NPN的鉴别方法.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,饲料原料中非蛋白氮,(,NPN,),的鉴别,山东六和集团技术部,郭吉原,一.目前,NPN,的种类,A,铵盐(,NH,4,HCO,3,、,(,NH,4,),2,SO,4,、,NH,4,Cl),、,尿素,B,尿素的衍生物:缩二,脲、磷酸脲、淀粉糊化,尿素,、脲醛聚合物(,蛋白精),、,糠醛尿素,、,糖基化尿素,C,叠氮化钙,CaN,6,D,三聚氰胺,C,3,N,6,H,6,脲醛聚合物和三聚氰胺,是目前最常用的,NPN,脲醛聚合物(,蛋白精)(,CP=10,元),三聚氰胺(,CP=20,元),二.,NPN,的鉴别(1)-,尿素,试剂:,1.生黄豆粉。将大豆磨成粉末,（,注意；切勿加热升温),2.酚红：,g/L。,称取酚红（苯酚红）0.1,g,溶于100,ml,乙醇中。,步骤：取约0.5-2,g,样品，于50,ml,比色管内，再加约0.1-0.2,g,生黄豆粉，35滴酚红，40,ml,水，塞好塞子，摇动30秒，静止，如溶液变成红色，则样品中掺入尿素,二.,NPN,的鉴别(1)-,尿素,定量分析:,称样1-3,g,于碘量瓶内,加生豆粉约1克,准确加入100,ml,水,在30,C,摇动1,h,过滤,取滤液50,ml,于蛋白仪内,加,NaOH,(30%)10ml,用硼酸吸收,再用盐酸滴定,同时做样品和生豆粉空白.,CP=,(V-V,0,-V,01,),xCx0.014x6.25,m,x50/100,x100,二.,NPN,的鉴别(2)-,铵盐,试剂,氢氧化钠溶液,g,氢氧化钠加,ml,水。,PH,试纸,步骤：取样品3-5,g,于100,ml,烧杯内，表皿内侧沾一条湿的,PH,试纸，向烧杯内加约5-10,ml,氢氧化钠，将表皿迅速盖上，如试纸迅速变蓝，打开表皿有很浓的氨味则含铵盐。,二.,NPN,的鉴别(3)-,脲醛聚合物(蛋白精,试剂：变色酸 2,g/L,硫酸溶液,称取0.2,g,变色酸于干燥的烧杯内，加入100,ml,浓硫酸，电炉上加热到约,70-80，,待溶解后，降温，移入120,ml,棕色的滴瓶内。,步骤：将可疑物从显微镜下夹出数粒于干燥的小烧杯内，滴加约1,ml,变色酸，电炉上加热到刚刚产生微烟，取下，加入约30,ml,水，若溶液变成稳定的紫色，则样品中有蛋白精。,二.,NPN,的鉴别(3)-,脲醛聚合物(蛋白精,1.,鱼粉肉骨粉除去伪装方法,：,任何掺假的鱼粉均要做一番伪装，如直接将经伪装过鱼粉放在显微镜下看很难发现真实情况，因此镜检前应首先要除去伪装，最有效的方法就是脱脂，具体做法如下：,鱼粉肉骨粉除去伪装方法(1),(1)将少许鱼粉（3-5,g）,用定性滤纸包好，放入索氏脂肪抽提器内，以石油醚作提取剂，脱脂约30分钟，至石油醚中看不到黄色为止，将纸包取出，水浴上烘干（70-80）。,(2)将少许鱼粉（3-5,g）,放入烧杯内，加入50,ml,石油醚，搅拌2分钟，过滤，将滤渣放回烧杯，加50,ml,石油醚，搅拌2分钟，过滤。将滤渣烘干（70-80）。,鱼粉肉骨粉除去伪装方法(2),(3)将少许鱼粉（3-5,g）,放入烧杯内，加丙酮50,ml,搅拌2分钟，静止5分钟，将上清液弃去，再加50,ml,石油醚搅拌2分钟，静止5分钟，弃去上清液，将下部分的鱼粉烘干（70-80）。,(4)将少许鱼粉（约3,g）,放入烧杯内,加3,gKOH,(,NaOH,),再150,ml,水搅拌后在放电炉煮沸2分钟,静止5分钟,倒掉上清液,用水洗残渣3-4次,再用丙酮50,ml,洗残渣23次,残渣用于蛋白精和含大量粗纤维类物质(如锯末、稻草、麦芽根)的检测,鱼粉肉骨粉除去伪装方法(3),(5)将少许鱼粉（约3-5,g）,放入分液漏斗中,加四氯化碳50-80,ml,轻轻摇动后静止5分钟,把分液漏斗活拴打开将沉淀物放到一小烧杯内,之后将小烧杯内沉淀物过滤出来,此残渣用于蛋白精的检测.,请注意：乙醚、丙酮、石油醚均为易燃品，请在通风的条件下操作，严禁烟火。,三.其它,定性检查,的方法,A.,掺入植物类物质,（,如小麦麸、稻谷壳、粉丝蛋白粉）,试剂：碘-碘化钾溶液,称1,g,的碘及5,g,碘化钾于烧杯内，加100,ml,水搅拌2分钟，待溶解后将其移入120,ml,棕色的滴瓶内。,步骤：取约5,g,样品放在烧杯内，加约70,ml,水，在电炉上煮沸，取下静止2分钟，滴加碘碘化钾试剂-2,ml，,如溶液变成蓝色则掺入植物性的物质,三.其它,定性检查,的方法,B,.,掺入植物性物质,（,含大量粗纤维类物质：如锯末、稻草、麦芽根,）,试剂：1.间苯三酚20,g/L,称间苯三酚2,g,加100,ml 95%,乙醇，溶解后放入棕色滴瓶 2.浓盐酸 36%分析纯,步骤：称1-2,g,鱼粉于培养皿内，滴加间苯三酚使样品湿润，放置5-10分钟后，滴加浓盐酸约0.5,ml，,放置2-3分钟，如样品显现深红色，则样品中含木质素，在显微镜下进一步确认为何物。,三.其它,定性检查,的方法,C.,掺入皮革粉,试剂:1.稀硫酸2,mol/L,将取10,ml,浓硫酸慢慢加入到90,ml,水中。,2.二苯基卡巴腙2,g/L,称0.2,g,二苯基卡巴腙，加入100,ml95%,乙醇，溶解后，移入棕色滴瓶内。,步骤：取1-3,g,鱼粉于坩埚内，在电炉上炭化，再放在马弗炉内于550-600下灰化2小时，取出，降温后，加入稀硫酸10,ml,搅拌，加二苯基卡巴腙5-10滴，如溶液显紫红色则样品中含皮革粉,。,四.,目前真蛋白测定中的问题,1.真蛋白的测定方法,水洗法,三氯乙酸法,碱性硫酸铜法,重金属盐沉淀法,四.,目前真蛋白测定中的问题,2.这类方法的特点,能查出水溶性的,NPN,如:铵盐,、,尿素,、磷酸脲,对水不溶性的,NPN,查不出。,如:,脲醛聚合物(,蛋白精),、,糠醛尿素,、,淀粉糊化,尿素,、,缩二,脲,、,糖基尿素,、,三聚氰胺,花生粕等本身就有3-7个,CP,是水溶的,.检测数据汇总花生粕水溶性蛋白试验.,xls,四.,目前真蛋白测定中的问题,不论掺什么,NPN,都盲目的测真蛋白将会错检,、,误检,、,漏检,四.,目前真蛋白测定中的问题,3.赖氨酸复合饲料的真蛋白?,玉米用亚硫酸,浸12-48,h,粗粉碎,胚芽 玉米皮分离,离心分离,膜过滤,淀粉,玉米胚芽 玉米皮,玉米蛋白粉,葡萄糖,淀粉酶,赖氨酸,Lys,渣,Lys,高蛋白,Lys98%,65%,Lys,复合饲料,Lys,蛋白,玉米皮稻谷壳,含,NH,3,废水,Lys,菌种及杂菌,赖氨酸菌种,NH,3,1#,2#,3#,4#,1#,2#,3#,4#,5#,Lys,4.95,4.66,5.82,3.70,NH,3,3.01,3.00,3.18,3.30,Met,0.36,0.32,0.32,0.27,CP,NH,3,15.5,15.4,16.4,17.0,Thr,0.47,0.48,0.41,0.45,CP,39.8,37.4,36.4,36.1,Cys,0.35,0.27,0.28,0.31,CF,8.48,10.45,10.44,9.07,Glu,1.70,1.88,1.44,1.80,EE,2.43,Ile,0.49,0.44,0.33,0.40,总能,Cal/g,3826,3942,3916,Leu,1.20,1.12,0.84,1.15,AFB1,ppb,18.26,Ala,0.99,1.00,0.79,0.94,DON,ppm,4.1,0.9,3.0,His,0.18,0.35,0.28,0.36,F,-,2,ppm,1627,1552,AA,16.4,15.4,14.6,14.5,赖氨酸复合饲料的质量情况汇总,赖氨酸复合饲料的质量特点,游离氨,NH,3,高,3%,CP,NH,3,=15-17%,AA=14-16%,CP=36-39%,CP,NH,3,CP,组成:玉米皮+赖氨酸生产过程的含氨废水,霉菌毒素的残留高,F-2=1500-5000ppb DON=1-3ppm AFB,1,=15-50ppb,40%,四.,目前真蛋白测定中的问题,赖氨酸蛋白(外观:褐色或黑色小球),2种赖氨酸菌体蛋白的对比,3.如何测真蛋白?,判断是否掺假(,NPN)-,镜检,、,定性分析。,根据,NPN,的种类决定采用什么方法,AA,总和最有效的方法,三氯乙酸法,、,碱性硫酸铜法,、,重金属盐沉 淀法,、,水洗法,四.,目前真蛋白测定中的问题,3.如何测真蛋白?,掺微量的,NPN(,调蛋白15个百分点),氨基酸分析也难查出,只有用其它方法检测,如:镜检,、过筛测定,CP,、定性分析,测真蛋白要根据具体情况定方法,决不能教条主义,四.,目前真蛋白测定中的问题,3.如何测真蛋白,AA,法-最有效,四.,目前真蛋白的测定中的问题,五.鱼粉,(1),鱼粉和鱼排粉有下面2个问题,真假,的问题,好坏,的问题,(2),解决问题的方法,真假,镜检,、,AA,、,N I R,、,定性和常规检测分析,上述这些方法已能解决真假的问题,五.鱼粉,好坏-是现在碰到最多的问题,鱼粉的好坏与鱼粉的种类有关,白鱼粉,蒸汽鱼粉,直火鱼粉,蒸干鱼粉,(下杂鱼粉,鱼干粉),直火鱼粉常含少部分(10-20%)过热成分,质量差的直火鱼粉有时含40-50%的烧焦鱼粉,也可能是掺入的自燃鱼粉.,直火干燥鱼粉。样品经脱脂处理。可见很,多颗粒被火燎焦糊了,直火干燥鱼粉。样品经脱脂处理。可见被火燎焦糊的颗粒,五.鱼粉,鱼粉的好坏与鱼粉的新鲜度有关,新鲜度指标:,感观,、,气味,、,VBN,、,组胺,、,酸价,、,过氧化值,、,TBA,蒸干鱼粉,下杂鱼粉,鱼干粉的新鲜度最差,含鱼溶浆多的鱼粉新鲜度也差一些,感观难看和气味难闻的鱼粉新鲜度很差,五.鱼粉,(1),乳猪料用蒸汽鱼粉,禁用蒸干鱼粉(下杂鱼粉,鱼干粉),最好不用直火鱼粉.,(2)69月减少国产鱼粉用量,多用进口鱼粉,其它时间增大国产鱼粉用量.,(3)进口鱼粉也逐渐象国产鱼粉一样掺假的手段及方法,谢 谢 大 家,