戊肝病毒与戊型肝炎.ppt

Slide Title,Body Text,Second Level,Third Level,Fourth Level,Fifth Level,戊肝病毒与戊型肝炎,WHO IS HE?,HE,H,epatitis,E,戊型肝炎的认识过程,1955.12-1956.1,世界上首次有记载的肠道传播-非甲非乙型肝炎(ET-NANBH)发生于印度新德里；,1983年前苏联学者Balayan应用免疫电镜技术(IEM)首先在感染志愿者和猕猴粪便中发现病毒样颗粒(VLPs)；,1988年本病命名为戊型肝炎(Hepatitis E,HE)；,1989年,美国学者,Reyes等克隆到病毒基因组，同年在东京国际肝炎会议上正式被命名为戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus，HEV),。,戊型肝炎病毒-HEV,HEV为直径2738nm的无包膜球形颗粒，基因组为单正链RNA；,HEV有三个ORF:ORF1约5kb，编码非结构蛋白,；,ORF2约2.4kb，编码主要结构蛋白，组成病毒衣壳；ORF3编码一个磷酸化蛋白，其功能尚不清楚。,HEV归于HEV样病毒属，其序列与风疹病毒和甜菜坏死黄叶脉病毒最为相近。,HEV病毒颗粒,基因型,群,HEV,病毒株,1,缅甸、中国、巴基斯坦、尼泊尔、埃及、印度、巴塞罗那、摩洛哥、乌兹别克斯坦、吉尔吉斯、乍得、日本,2,墨西哥、尼日利亚,3,美国、日本，美国、日本、荷兰,4,意大利,5,西班牙、希腊，荷兰,6,希腊、英国,7,阿根廷、奥地利,8,中国,9,中国,HEV的基因分型,HEV的基因分型,近年各地戊肝爆发情况,时间,地点,患病人数（已知死亡人数）,2006年7至10月,刚果,341（13）,2006年5月,尼泊尔,3000,2005年8月,乍得,50,2005年3月,印度,400,2005年1月,印度,500(10),2004年6至8月,乍得,672（21）,2004年5至7月,苏丹,625（22）,2004年3月,伊拉克,100,2004年4月,印度,800,戊型肝炎的国内流行情况,1982年起即有报道；,1986-88年间新疆南部大流行是迄今世界上最大的一次流行。,国内发生的戊肝暴发,时间,地点,罹患率,病死率(%),可能原因,1986.9-1988.4,新疆南部三地州,119280/4029729（2.96%）,0.6,水源污染,1993.2.18-3.10,北京市丰台区某工厂,11/107（10.3%),NA,不洁饮食,1994.4.27-5.15,天津某部队学院,24/379（6.87%),NA,不洁饮食,1995.2.3-3.15,长春市南关区某单位,11/92（12.0%）,9.1,不洁饮食,北京市某机关,9/600（1.5%),NA,2001.1.20-3.1,北京市某机关,145/1675 (8.7%),0.7,不洁饮食,各地临床散发急性肝炎中的戊肝比例,急性肝炎,戊肝,(%),上海(9094),1054,188,17.8%,武汉(02-03),226,43,19.0%,江苏(0506),266,98,36.8%,香港(02),129,24,18.6%,福州(0003),191,37,19.4%,2005年各型肝炎的发病率和死亡率的增减情况,资料来源:中国疾病预防控制中心,未分型肝炎戊肝？,文献及大量流行病调查数据显示，以往很大一部分的未分型的肝炎是戊型肝炎，是由于过去使用的戊肝检测试剂的灵敏度不足所致。,戊肝占非甲非乙型肝炎的30-70%!,戊肝在国内的流行情况很可能被低估了，临床上增加戊肝的检测有助于及时了解患者病情并开展治疗，而且能够更加准确的监控戊肝的流行。,甲肝,戊肝,戊肝爆发的季节性,戊型肝炎的年龄分布,戊型肝炎的性别差异,双抗原夹心法ELISA对不同动物HEV感染的检测,戊型肝炎是一种人畜共患病,我国在猪中获得5株HEV基因序列分型,中国商品猪中的戊肝感染情况,20个省市，120个猪场，8626只猪,20个省市，120个猪场，8626只猪,猪是戊肝病毒的携带者,复旦大学公共卫生学院郑英杰博士等在国际权威期刊感染性疾病,杂志上公布了最新研究结果：,人的戊型肝炎的感染主要来源于猪；,猪的带毒率远高于人群，,IV,型戊肝病毒能够在人群和猪群间自由传播；,猪的感染无症状，,IV,型戊肝病毒占主导地位。,戊型肝炎流行病学特征总结,暴发流行多见于发展中国家，发达国家以散发病例为主；,中老年罹患率高于青少年，男女发病比例约为 3：11.3：1；,潜伏期末期和急性期早期粪便排毒量大，是主要传染源；,水源和食物是主要传播途径，呈春季高峰；,病情较重，病死率（2.5%）高于甲肝（0.1%）和乙肝（0.9），孕妇病死率20%；,戊型肝炎是一种人畜共患病。,戊型肝炎的临床表现,潜伏期,10,60,天，平均,40,天；,急性起病，黄疸型多见；,乏力、恶心、呕吐、皮肤巩膜黄染；,转氨酶和胆红素生高；,黄疸程度较甲肝重,持续时间长,胆汁淤积更明显；,重症肝炎发生率较高。,成人多为临床型感染，儿童为亚临床型；,病程,6,8,周，一般不发展为慢性；,戊型肝炎的特异性诊断方法,方法,待测样品,反应物,方法评价,检测HEV抗原,免疫荧光,肝脏组织,患者血清,操作复杂，难以推广,免疫电镜,粪便/胆汁,患者血清,操作复杂，难以推广,检测HEV RNA,RT-PCR,血清/胆汁,/粪便,HEV特异引物,特异度和灵敏度好，,易污染，用于辅助诊断,检测HEV抗体,免疫电镜,血清/血浆,HEV病毒颗粒,操作复杂，难以推广,荧光抗体阻断,血清/血浆,HEV阳性的肝组织,组织来源有限，难以推广,Western Blot,血清/血浆,重组蛋白,ELISA,血清/血浆,重组蛋白/合成肽,戊型肝炎的病程,HEV抗体的检出模式与意义,检出模式,HEV-IgM,HEV-IgG,意 义,1,+,HEV感染早期、急性期,2,+,+,现症感染期和恢复期早期,3,+,HEV既往感染或恢复后期,两种抗原示意图,构象型抗原,线性表位抗原,构象型抗原能自发形成多种聚合体，类似于病毒颗粒的,装配过程。,构象型抗原具有很强的构象依赖性表位，与,HEV,病毒颗粒,表面的空间结构有较大相似性。,构象型抗原免疫的单抗能够直接捕获病毒，并具有中和,活性,不影响酶的标记。,E2抗原的血清反应性,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 N,急性期血清,(10例),恢复期血清,(8例),阴性对照,二聚体E2,单 体E2,戊肝急性期血清和多年后的恢复期血清均有明显的反应，,恢复期血清的反应性集中在二聚体上,。,E2抗原能自发形成以二聚体为基础的多种聚合形式，类似于病毒结构蛋白的装配过程。,E2抗原的质谱图（MALDI-TOF）,单体,二聚体,三聚体,四聚体,生物工程学报，2002,18:463-467,E2抗原的聚合形式,万泰公司试剂：,构象型抗原：E2,HEV-IgM：捕获法,HEV-IgG：间接法,GL,公司试剂：,线性抗原表位,HEV-IgM：间接法,HEV-IgG：间接法,不同戊肝试剂在急性戊肝中的灵敏度,单位,WT IgM,GL IgM,GL IgG,阳性数/检测数,灵敏度,阳性数/检测数,灵敏度,阳性数/检测数,灵敏度,香港卫生署,135/140,96.4%,112/140,80.0%,-,-,复旦大学,47/48,97.9%,35/48,72.9%,45/48,93.8%,广西CDC,123/126,97.6%,109/126,86.5%,-,-,合 计,305/314,97.1%,256/314,81.5%,45/48,93.8%,不同戊肝试剂在健康人群中的特异性,单位,检测人群,WT IgM,GL IgM,GL IgG,阴性数,/检测数,特异度,(),阴性数,/检测数,特异度,(),阴性数,/检测数,特异度,(),香港卫生署,自然人群,1287/1316,97.8,复旦大学公卫学院,自然人群,273/273,100.0,264/273,96.7,233/273,85.4,北京市红十字血液中心,献血员,6989/7113,98.3,北京铁路总医院,自然人群,882/883,99.9,广西CDC,自然人群,7234/7280,99.3,总 计,16665/16865,98.6,264/273,96.7,233/273,85.4,指标,正常人群,急性戊肝,约登指数(%),阴性数/,检测数,特异度,（%）,阳性数,/检测数,灵敏度,（%）,WT IgM,273/273,100.0,47/48,97.9,97.9,GL IgM,264/273,96.7,35/48,72.9,69.6,GL IgG,233/273,85.4,45/48,93.8,79.2,灵敏度和特异度综合评价,临床阴转血清的IgG检测对比,B公司,新疆戊肝感染10年后血清抗HEV抗体检出,16份临床急性戊肝阳转血清的评价,总 结,戊肝IgM在诊断急性戊肝上优于戊肝IgG，符合免疫学诊断常规；,IgM采用抗,链捕获法和构象抗原，诊断时间早，可准确区分既往和现症感染，是一个高度敏感、特异的诊断急性戊肝的指标。,谢 谢!,