临床科研选题与科研设计.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,以几个案例作例子来阐述,Idea,（新鲜）（创新点）,Design,如何,(,从哪几方面,),来验证，它们的逻辑关系,Methods,（逻辑，内在联系）,新发,SLE,患者（创新点）,调节性,T,细胞的研究,(,表面标志,CD25,与转录因子,Foxp3,的,表达、细胞的抑制作用、其临床意义）,国外的,SLE,患者绝大多数有激素或细胞毒药物治疗的经历,案例一,自身免疫应答靶抗原的的“暴露”或形成（隐蔽抗原）,微生物感染激活自身反应性淋巴细胞（分子模拟）,协同刺激分子的异位表达,多克隆淋巴细胞的非特异性活化（超抗原）,免疫调节紊乱（包括,调节性,T,细胞,数量减少或功能减弱）,其它,自身免疫病发病的免疫学因素,研究,新发,SLE,患者,周围血,CD4+CD25-Foxp3+,T,细胞的临床意义,检测10例活动期、11例非活动期新发,SLE,患者、及11例健康志愿者。用流式细胞仪分析,Foxp3,与,CD25,在,CD4 T,细胞的表达。分离,CD4+CD25+与CD4+CD25-T,细胞，检测它们对T细胞增殖的影响。,G,检测,CD4+CD25-T,细胞与其他临床指标（如抗,dsDNA、尿蛋白、血清C3水平、SLEDAI,）的相关性,这个故事并不复杂，内容较简单，文内仅2张图与1个表格。但创新点明显，文章发表于Ann Rheum Dis.2008;67(7):1037-40.Impact fector 7.188。,第2项研究：,Clinical significance of increased CD4+CD25-Foxp3+T cells in patients with,new-onset systemic lupus erythematosus,第3项研究:,Are CD4,+,CD25,Foxp3,+,cells in untreated new-onset lupus patients regulatory T cells?Arthritis Res Ther 2009;11(5):R153,研究新发,SLE,患者周围血中的,CD4+CD25-Foxp3+T,细胞与,CD4+CD25+Foxp3+T,细胞表面表达的分子及分泌的细胞因子有何不同，及,CD4+CD25-Foxp3+,T细胞,有否抑制。,检测,22,例新发,SLE,患者。用流式细胞仪分析比较,CD4+CD25-Foxp3+,细胞与,CD4+CD25+Foxp3+T,细胞表面标志子表达及细胞因子表达的差异。检测,CD4+CD25+Foxp3+T,细胞对,T,细胞增殖有否调节作用。,新发,SLE,患者其它免疫细胞有什么特点,新发其它自身免疫病免疫细胞有什么特点,新发其它自身免疫病,其它免疫学指标有什么特点从案例一能得到的启发,案例二,新型抗流感药,DAS181,的研发,A,型流感病毒的生活周期,已批准上市的抗流感药物,M2,离子通道阻滞剂,盐酸金刚乙胺（,1993,年美国,FDA,批准上市）,金刚烷胺（,1966 FDA,年批准为预防药，,1976,年确认其为治疗药）,神经胺酸酶（,NA,）抑制剂,达菲（,1999,年美国,FDA,批准上市）,扎那米韦（,1999,年,5,月首先在澳大利亚获准上市）,除了毒副作用外，,主要的问题是流感病毒产生抗药性，因为病毒基因突变,研发中的抗流感药物,流感病毒的,NA,与,HA,相互作用感染靶细胞,Neu5Ac,(2,3)-Gal,与,Neu5Ac,(2,6)-Gal,分子就是流感病毒的受体。人流感病毒主要识别,(2,6)-Gal,唾液酸，禽,流感病毒与马流感病毒主要识别,(2,3)-Gal,唾液酸。流感病毒的,HA,与细胞表面含,(2,3)-Gal或/和(2,6)-Gal,唾液酸的糖蛋白相结合。,人,呼吸道上皮细胞的唾液酸主要是,(2,6)-Gal,型，但也有,(2,3)-Gal,型，所以,禽,流感病毒也能感染人，尽管感染效率不高。,NA,的作用是破坏,HA,的受体。它酶切呼吸道黏膜上诸如,mucin,等潜在抑制性分子的唾液酸，从而使之灭活，促进病毒在呼吸道传播;酶切病毒感染细胞表面的唾液酸，促进子代病毒释出，以助于病毒传播。,HA,的受体结合作用和,NA,的受体破坏作用相互相成，维持平衡，于病毒复制和传播十分重要。,呼吸道上皮细胞,唾液酸,流感病毒,HA,NA,以往有报道，体外实验中唾液酸酶能有效阻止流感病毒感染细胞。,因此学者欲研制一种融合蛋白，由唾液酸酶与能锚定于人呼吸道上皮细胞的蛋白组成,。,DAS181,的分子模式,报道已从微生物和真核细胞分离出,15,种底物特异性和酶动力学各异的唾液酸酶。从中选择,A.viscosus,唾液酸酶的催化功能域。其理由为：底物特异性广；催化活性最大；人免疫系统对其耐受，因为人正常口腔和胃肠道细菌也产生此唾液酸酶。,DAS181,抗流感病毒作用的研究（细胞、小鼠与雪貂模型）,DAS181,的创新点,靶点在宿主细胞上，能避免产生病毒耐药,广谱抗流感病毒药物（,A,B,型流感、流感病毒耐药株、副流感病毒）,能酶切,SA,2,3Gal,和,SA,2,6Gal,，也能酶切,SA,2,8Gal,。因此，对现有流感毒株、未来毒株、及重组变异毒株均有效,吸入给药，生物利用度高,药物作用持续时间较长：至少,2,天（,MDCK,),至少,7,天（,HAE,),，用于预防和治疗均可,案例三：与,IgA,肾病发病机制相关,聚糖,（glycan),核酸、蛋白质、聚糖和脂是所有细胞的4种基本大分子,核酸链基本上由,4,种核苷酸组成,肽链基本上由,23,种氨基酸组成,糖链十分复杂,脂质按生物学功能可分为三类储存脂质（包括甘油三脂和蜡）,结构脂质（构成生物膜脂双层的磷脂）,活性脂质（类固醇和萜）,案例四：几个病案分析及其它,XXX,等（301医院）：不明原因发热的病因分布及临床特征,2000年1月至2009年1月在301医院内科住院且符合不明原因发热的患者816例，病因分布，临床特征，老年患者与非老年患者之间的比较。,XXX,等（北京协和医院）：结石性急性胆管炎的治疗,1998.1-2008.12急诊的,急性胆管炎患者,426例，随着介入技术（急性行经皮经肝胆道穿刺引流术）和内镜技术（急性行经内镜逆行胰胆管造影）的进展，,急性胆管炎患者由,急诊手术经保守治疗或介入治疗转为择期手术，可以大大减少手术并发症发生率，降低手术死亡率。,XXX,等（北京协和医院）：胰腺实性假乳头状瘤的CT诊断及鉴别诊断,对14例病理确诊的胰腺实性假乳头状瘤患者的,CT,资料作,CT,诊断及鉴别诊断(无功能性胰岛细胞瘤、胰腺囊腺瘤、胰腺癌、胰腺假性囊肿,）分析,XXX,等（北京协和医院）：细针穿刺技术在乳腺癌手术治疗中的应用价值,2004.1-2009.1北京协和医院初诊考虑乳腺癌可能性大的530例女性患者作,细针穿刺细胞学（,FNAC,）检查。,FNAC,检查阳性,325,例，直接行,乳腺癌根治术，,术后组织病理学检查均为,乳腺癌。,FNAC,检查阴性,205,例，开放活检术，术后组织病理学检查,137,例乳腺癌，,68,例非,乳腺癌。表明,FNAC有助于,对怀疑,乳腺癌者选择适当的术式。,以中国医学科学院学报2011年第1期上的几篇论文为例,病案分析加检验科检测指标,也能发SCI文章,2009,确定,“,点,”,，要有新意,要有正常对照和其它对照（如阳性对照）,分析的指标不能单一，分析要有层次,正确的统计处理,最好能结合一点实验室检测,病案分析中需注意的几点,药剂科的人员一般做药代动力学和生物效性等的试验较多,对药剂师科研工作的建议,与临床大夫密切合作,参与新药研制,有效制剂的开发（如协和医院的健脑合剂等）,做一点药物作用机理的研究,科研工作中尚需注意的几点,每一步都要走得踏实，要核实试剂和仪器是否,OK,（以本人做,PCR,检测及研制,PSA,试剂盒失败为例说明）,表位可分成两类：,线性表位（,linear，,指肽链上由一段序列相连续的氨基酸残基所形成的抗原表位,）和构象表位（,conformation，,指多肽或多糖链上由空间位置相邻，而序列上不相连续的氨基酸残基或多糖残基所形成的抗原表位,）,严格实验操作，做好实验记录（包括病案记录）,随时分析实验结果，适时对研究目的和技术路线作调整,爱因斯坦有关如何做科学研究的名言,One percent inspiration and ninety nine percent perspiration,灵感来自哪里?临床实践与文献。要找到和明确什么是你研究的“,点,”（,创新最关键,）。,Idea,Design,(切实可行的技术路线,从哪几方面说明这个“点”，它们的逻辑顺序怎样）,Methods,。,需要多一点分子生物学、免疫学、细胞生物学等的知识，需多读文献。,如何写科研论文,明确什么是这篇论文的“,点,”。确定论文的题目。,画制图表（论文的,核心,）,材料与方法,查阅文献,引言（包括问题的提出（背景、假设），回答了什么问题，创新点）,讨论（简单小结本研究的发现，与其他学者研究的比较，本创新发现的意义，其它，等等）,摘要,Clinical significance of increased CD4+CD25-Foxp3+T cells in patients with new-onset systemic lupus erythematosus,题 目,以前述案例一（2）为例,实验结果（图表的制作）,Fig 1.CD4+CD25+Foxp3+and CD4+CD25-Foxp3+T cells in SLE patients and normal controls,Fig 2.The expression of CD127 by CD4+T cell subpopulation,材料与方法,（可以参考他人的文章）,前言,CD4+CD25+,调节性,T,细胞在,SLE,发病中作用的的报道不甚一致，且尚无在新发,SLE,患者研究的报道,Foxp3,表达不只限于,CD4+CD25+T,细胞,（,Treg,），作者以往研究观察到,新发,SLE,患者,CD4+CD25-Foxp3 T,细胞频率增高,CD4+CD25-Foxp3+T,细胞有什么临床意义,（包括问题的提出（背景、假设），回答了什么问题，创新点）,讨 论,有关,CD4+CD25+Treg,细胞在,SLE,患者周围血中状况的报道不尽相同。这可能与各种免疫抑制剂使用相关。,本文报道了在新发SLE所做的研究。对,CD4+CD25-Foxp3+T,细胞作了讨论。与,CD127,表达的关系。,新发SLE患者的,CD4+CD25-Foxp3+T,细胞有一定临床意义。,新发SLE患者的,CD4+CD25-Foxp3+T,细胞有否抑制作用？,（简单小结本研究的发现，与其他学者研究的比较，本创新发现的意义，其它，等等）,如果自己用英语写论文暂时有困难，可请专门的论文写作公司帮忙。,关键是要有创新的研究结果和确切可靠的数据。,中文论文也一样,基金申请,申请书的撰写（立论依据、技术路线、拟使用的方法、创新点、工作基础、队伍）,评审的流程,谢 谢!,