植物细胞组织培养园艺.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,资料仅供参考,不当之处，请联系改正。,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,资料仅供参考,不当之处，请联系改正。,3.,不定芽发生型,外植体类型：各种外植体,新生芽来源：外植体细胞脱分化后再分化,4.,胚状体发生型,外植体类型：各种外植体,胚状体来源：外植体细胞脱分化后再分化,新生苗来源：胚状体萌发,5.,原球茎发生型,兰科植物的一种繁殖方式,外植体类型：茎尖或腋芽,新生苗来源：原球茎萌发,5.2,植物离体快繁程序,阶段,繁殖体增殖,阶段,芽的生根（获得再生植株）,阶段,再生植株驯化和移栽,再生植株的鉴定,阶段,初代培养物的建立（无菌培养物的获得）,4,6,周,（,4,8,周继代一次）,5.2.1,初代培养物的建立,任务：获得无菌外植体并使其在适宜的培养环境中以某种器官发生类型进行增殖。,5.2.1.1,母本植株和外植体的选取,母本植株的选取：,性状稳定、生长健壮、无病虫害的成年植株。,田间污染严重的母本植株处理：,修剪后进行室内栽培，喷洒杀虫剂和杀菌剂，待长出新枝后进行取材。,外植体的选取：,木本植物和较大的草本植物多采用带节茎段、顶芽或腋芽；易繁殖、矮小或具短缩茎的草本则多采用叶片、叶柄、花茎、花瓣等。,5.2.1.2,无菌外植体的获得,外植体灭菌,每瓶接种一个外植体,基本培养基,培养并检测污染情况,无污染并成活的外植体,10,天以上,接种,5.2.1.3,无菌外植体的启动生长培养,外植体启动生长的方式：,腋芽被刺激后进行生长,外植体的切口处产生不定芽,外植体切口处产生愈伤组织,外植体启动生长培养基：,生长素和细胞分裂素浓度最重要；,刺激腋芽萌发时，细胞分裂素的适宜浓度为,0.5,1.0mg/L,，同时配合使用低浓度生长素（,0.01,0.1mg/L,）效果更好；,诱导不定芽形成时，需较高浓度的细胞分裂素；,诱导愈伤组织形成，需增加生长素的浓度并配合一定浓度的细胞分裂素。,5.2.1.4,初代培养物建立的技术关键,通过灭菌关,筛选出有利于初代培养物形成和生长的培养基,5.2.2,繁殖体增殖,任务：对初代培养物进行增殖，使之不断分化产生新的丛生芽、不定芽、原球茎或胚状体。,5.2.2.1,初代培养物继代培养大量增殖,初代培养获得的丛生芽分割成单芽或单芽苗切割成带叶茎段后，转移到新鲜培养基中继代培养。,原球茎丛分割成单个原球茎或单个原球茎切割成小块后，转移到新鲜培养基中继代培养。,繁殖体增殖阶段，,4,8,周继代一次，根据生产需要可进行多次继代，但要防止芽苗衰退。,5.2.2.2,增殖培养基,用于继代增殖培养的培养基，应能使培养物在每次继代培养中产生最大数量的有效繁殖体。,通常，基本培养基与阶段,相同，而细胞分裂素水平则高于阶段,。,激素最佳浓度应通过试验进行确定。,5.2.2.3,增殖体的大小和切割方法,将初代培养物上获得的带有,2,4,个茎节的芽苗切割成单节茎段。,茎段垂直插入培养基中，但茎节不能插入培养基内。也可将其平放于培养基表面。,切除芽苗的初代培养物可进行切分后继续培养诱导芽苗分化形成。,如出现顶芽发育而抑制腋芽增殖的现象，应将顶芽切除，用其下部带节茎段增殖培养。,5.2.2.4,不定芽增殖培养的关键,提高增殖率和增殖系数，用最短的时间获取最大数量的有效芽苗。,防止玻璃化苗和变异苗的产生,5.2.2.5,不定芽增殖培养注意问题,驯化现象,-,增殖芽内外源激素的累积,预防措施,-,在继代培养中的一定阶段酌情降低激素浓度水平,5.3,不定芽生根,此阶段的任务：为移栽准备小植株。,诱导生根可在试管内进行，也可在试管外进行。,5.3.1,诱导不定芽根分化和根系形成,将继代增殖获得的无根芽苗以单芽形式转移到生根培养基或适宜的环境中，诱导根分化和根系形成，最终获得完整小植株。,5.3.2,试管内诱导根分化的技术关键,调节激素种类和浓度,-,在继代增殖培养基的基础上,多数植物根分化需要适当提高生长素浓度，降低细胞分裂素浓度；,有些植物转入仅有低浓度（,0.1,0.5mg/L,）生长素的培养基中即可生根；,有些植物在无激素条件下即可生根。,调节基本培养基营养组成,一般基本培养基配方与继代增殖培养相同，但需降低无机盐浓度（通常只是降低大量元素化合物用量），常用,1/2,1/4,的量；,也可更换为其他的低无机盐浓度的培养基。,调节渗透压,根分化所需的培养基渗透压要低于芽分化培养基；,降低蔗糖的浓度可有效降低培养基的渗透压,生根培养基中蔗糖浓度一般为,1%,2%,。,5.3.3,试管外诱导根分化的技术关键,生根基质的准备和灭菌,通常用珍珠岩：蛭石,=2,：,1,配制成混合基质,加入一定量的杀菌剂杀死有害微生物,芽苗生根,芽苗先在适宜浓度的生长素溶液中快速浸蘸或在含有高浓度生长素的培养基中培养,5,10,天，然后在温室中插入生根基质中。,芽苗生根过程的管理,经常喷雾，保持高湿度的空气环境，同时要调控温度，适当遮阴，防止强光照射。,5.4,再生植株的驯化移栽,此阶段是试管苗从异养到自养的转变阶段，是一个逐渐适应的过程。,5.4.1,驯化,原则：,逐步过度，逐渐适应。,驯化步骤：,日光锻炼,-,晒苗,湿度锻炼,驯化操作：,出管前一周，在移栽温室中打开瓶口，逐渐提高光照强度和降低空气相对湿度，使试管苗逐渐适应外界环境。,5.4.2,移栽,用镊子取出试管苗，放入装有清水的容器中；,洗净试管苗根部附着的培养基；,将小苗载入预先配制好混合基质中。,5.4.3,移栽后的驯化管理,湿度的控制,光的控制,温度的控制,防菌类滋生,思考题,何谓植物离体快速繁殖技术,?,植物离体快繁程序,?,无菌培养物的获得,无菌,外植体启动生长的方式,?,最适合,离体快繁的方式,?,外植体启动生长培养基中最重要的成分是,？,刺激腋芽萌发时，细胞分裂素的适宜浓度为,？生长素浓度为,？,诱导不定芽形成时，需较高浓度的,？,诱导愈伤组织形成，需增加,？,的浓度并配合一定浓度的,？,。,初代培养物建立的技术关键？,筛选有利于不定芽分化形成和生长的培养基的,筛选重点？,初代培养获得的丛生芽如何进行增殖？,初代培养获得的,原球茎丛如何进行增殖？,用于继代增殖培养的培养基与,阶段,的培养基有何异同？,初代培养物上所获得的可作为增殖体的芽苗大小,?,如何进行切割？如出现顶芽发育而抑制腋芽增殖的现象，应如何处理？,不定芽增殖培养的关键？,不定芽增殖培养注意问题？,试管内诱导根分化的技术关键？,试管苗移栽后如何进行管理？,