药物分析第六章芳酸及其酯类.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,*,中国药科大学药物分析教研室,Aromatic carboxylic acids,水杨酸类,水杨酸,SA,s,alicylic,a,cid,阿司匹林aspirin,对氨基水杨酸钠PAS-Na,贝诺酯benorilate,双水杨酯salsalate,苯甲酸类,羟苯乙酯,ethylparoben,丙磺舒 probenecid,苯甲酸benzoic acid,甲芬那酸 mefenamic acid,sodium benzoate,其他芳酸类,氯贝丁酯clofibrate,布洛芬ibuprofen,碱式苯甲酸铁盐（,赭色沉淀,）,加稀HCl，沉淀分解，生成游离,白色,布洛芬,重氮化偶合反应,具体方法见芳香胺类药物的鉴别,氧化反应,异羟肟酸铁反应,甲芬那酸,H,2,SO,4,深蓝色,黄色,并产生,绿色荧光,随即变为,棕绿色,Fe/3,紫色,水解产物的反应,分解产物的反应,UV特征吸收,IR吸收光谱,特殊杂质的由来与方法检查,A,cetyl,S,alicylic,A,cid,副产物,SA,ASA,Aspirin,生产工艺,SA,溶液的澄清度,酚类和酯类,其他副反应产生酯类,易,碳化物,炽灼,残渣,重金属,PAS-Na,间氨基酚,Ch.P,样品3.0,g,用,乙醚提取,，加入,H,2,O，,用,HCl,滴定液（0.02,mol/L),滴定，生成,杂质,HCl,（,转溶入,H,2,O,相，甲基橙指示剂）。,滴定液不得过0.30,ml,USP HPLC,法,C,18,NaH,2,PO,4,(0.05mol/L)-Na,2,HPO,4,(0.05mol/L),-CH,3,OH(,含氢氧化四丁基铵,1.9,g),(425：425：150),254nm,检测内标：磺胺,羟苯乙酯,供试品自身对照法BP（1998）反相TLC 高低浓度对比法,取羟苯乙酯丙酮液1.0%和0.01%，2ul，254nm查荧光，前一个任何第二个斑点的大小和强度不应超过后一个。,a.,杂质对照品法,方法：,供试品供试品溶液,杂质对照品对照品溶液,供试品,对照品,判断：供试品中所含杂质斑点不得超过相应的杂质对照斑点。,优点：同一物质，同一,R,f,值比较，准确度高、直观性强。,缺点：需要杂质对照品。,b.,高低浓度对比法,方法：,供试品,对照品,判断：,供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点（或荧光强度）,控制杂质斑点个数，控制杂质种类,氯贝丁酯,对氯,酚（0.0025%）,挥发性杂质（0.5%）,GC,法5,%,SE-30 2m160，,N,2,FID,杂质以归一化法求得,含量测定,酸碱滴定法,Acid-base titration method,以ASA及其制剂为例,苯甲酸pKa 4.20,水杨酸pKa 2.98酸性较强,羧酸邻位-OH，吸电子基团使酸性增加；并有氢键，更增加了其极性,因此，可采取,直接滴定法,直接滴定法,pKa 36,的药物溶于中性醇,可,直接用NaOH滴定,pKa 69,的药物要用,非水溶液滴定法,中性乙醇：对指示剂(酚酞)而言为中性，,可消除滴定误差,乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶,液中滴定过程易水解,本法特点：简单,注意点：若SA不合格，不宜采用本法,Aspirin 丙磺舒(Ch.P.BP.JP等)苯甲酸(Ch.P等)均采用本法,水解后剩余滴定法,Residual titration after hydrolysis,USP23方法：取本品约1.5g，精密称定，准确加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，水浴上煮沸15min，放冷，以酚酞为指示剂，用H,2,SO,4,液(0.25mol/L)滴定,剩余,的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。每,1ml,的NaOH液(,0.5ml/L,)相当于,45.04mg,的C,9,H,9,O,4,剩余滴定时消耗酸量,V,(ml),同时做空白试验，消耗酸量,V,0,(ml),Ch.P 00羟苯乙酯的Assay亦采用,bB,aA,反应物质之间的化学计量关系,a,A,+b,B,cC+dD,被测物,滴定液,毫摩尔数,滴定度计算,0.5,规定的硫酸浓度为0.25mol/L,T,毫摩尔质量,两步,滴定法,Two-step titration,用于Aspirin片测定,片剂中有稳定剂,水解产物,水杨酸SA,HAc,枸橼酸,Citric acid,酒石酸,Trataric acid,为了避免这些酸类的干扰，采用两步滴定法,Ch.P.阿司匹林片,取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于阿司匹林0.3g)，置锥形瓶中，加中性乙醇(对酚酞指示剂显中性)20ml，振摇使ASA溶解，加酚酞指示液3滴，,滴加NaOH液,(0.1mol/L)至显粉红色，,再精密加NaOH液,(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热15min，并时时振摇，迅速放冷至室温，,用H,2,SO,4,液(0.05mol/L)滴定,，并将滴定的结果用空白试验校正,每1ml的NaOH液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C,9,H,8,O,4,第一步,：NaOH滴定所有的酸：ASA，CA，TA，SA，HAc,第二步,放冷后，用H,2,SO,4,滴定液滴定剩余的NaOH,V,；,空白滴定消耗H,2,SO,4,V,0,；,(,V,0,-,V,),H2SO4,则为用于中和水解ASA所需的,NaOH,计算,：称取10片重 1.8240g,C,NaOH,0.1032mol/L,片粉重 0.5312g,C,0.05120mol/L,标示量 0.1g,V,3.02ml,V,0,20.18ml,直接,水解后,两步 滴定法,剩余滴定法,滴定法,优点,操作简便,水杨酸干扰少,结果准确，,避免了游离,SA以及片剂,中稳定剂的,干扰,缺点,游离水杨酸,不能完全,不合格时结,排除干扰,果偏高,Ch.P 氯贝丁酯的Assay采用两步滴定法,双相滴定法,Titrimetry in two phases,Ch.P 2005用于苯甲酸钠的测定,苯甲酸钠,为芳酸碱金属盐，,易溶于水,；苯甲酸不溶于水，不利于终点的正确判断,因此，利用,苯甲酸能溶于有机溶剂,的性质，采用双相滴定法,HCl,乙醚(苯甲酸),H,2,O(苯甲酸钠),0.5mol/L,25ml,1.5g,50ml,2d,甲基橙,橙红色,分出H,2,O层，置具塞锥形瓶,，,乙醚层用H,2,O 5ml洗涤，洗液并入锥形瓶,，,加乙醚20ml，继续用HCl滴定，至水层显持续的橙红色,柱分配色谱-紫外分光光度法,Column Partition Chromatogr.,ASA capsule,等制剂,除用上述两步滴定法外，,最好用色谱法,，可以,分离酸性杂质,和,辅料,以及,稳定剂,等，经分离后同时测定ASA与SA,如,USP用柱分配色谱-UV测定ASA Capsule,Column Partition Chromatography,CPC,担 体：硅藻土(Celite 545),固定相：一定pH的缓冲水溶液,流动相：与水不相混溶的有机溶剂,(洗脱前必须先用水饱和),200300mm,60mm,4mm,22mm,层析柱,玻棉,压榨棒,350mm,21mm,CPC-UV法测定ASA Capsule,SA,测定,供试液制备,用,CHCl,3,50ml,洗涤，弃去(,洗去,ASA,),10ml,冰,HAc,-,水饱和乙醚液(110)(使,紫色配位化合物被分解,，,SA,析出,),洗脱液收集于已盛有10,ml,甲醇和2滴,HCl,的,50,ml,量瓶中,，继用30,mlCHCl,3,洗，并稀释至刻度,SA,对照品溶液,：,75,g/ml，,取10,ml,50ml,量瓶中盛有：,10,ml,甲醇，2滴,HCl,和10,ml,冰,HAc,-,水饱和乙醚液(110)，,CHCl,3,至,刻度,测定：306nm测定供试液和SA对照品液,SA,与试剂生成,紫色水杨酸铁,配位化合物，在柱上,移动慢,，,带窄,，色泽较深,若有,Fe,3+,洗下，,黄色,影响测定结果,消除干扰方法,：迂底部拌有磷酸的硅藻土，,生成不溶解的FePO,4,A,供试液,A,对照品液,L=,75(,g/ml)10m,100mg1000,100%0.75%,ASA+SA,测定,供试液制备,洗脱,5,25,mlCHCl,3,，,弃去,CHCl,3,洗脱,10,ml,冰,HAc,-CHCl,3,(110),*,；85ml,冰,HAc,-CHCl,3,(1100)，,并稀释至100,ml,对照品溶液,50,g/ml,冰,HAc,-CHCl,3,(1100),CPC-UV法测定ASA Capsule,测定,：280nm,空白,：CHCl,3,NaHCO,3,使,ASA和SA成盐,保留于柱上,用,CHCl,3,洗脱的目的,：,去除中性或碱性杂质,冰HAc酸化的目的,：,使ASA游离,，易被,CHCl,3,洗脱,含量测定,计算公式,所取胶囊细粉中ASA(mg),供试品溶液吸收度,对照品溶液吸收度,CPC技术的类型,利用固定相,酸碱性的不同,进行分离,利用药物和固定相起化学反应而进行分离,利用生成,离子对,进行层析分离,单纯靠选择流动相进行分离,阿司匹林栓,Aspirin suppositories,测定法,咖啡因,乙醇溶液4mg/ml,对照品溶液,ASA对照品(约0.15g),50.0ml,内标,5.0ml,供试品溶液,：取本品5粒，精密称定()，4050微温熔融，不断搅拌下冷却至室温，,精密称取适量,(ASA约0.15g),(,W,),内标,5.0ml,50.0ml,乙醇,50.0ml,2.0ml,2.0ml,乙醇,50.0ml,HPLC,血清中,ASA,&,SA,的测定,色谱条件,C,18,5,m 1504.6mm,甲醇-水-正丁醇,(30,:20:1,),经0.5,m 滤膜减压过滤后5,l H,3,PO,4,超声脱气,237nm,内标,：苯甲酸,血清样品的处理,血清样品100,l,加入HClO,4,(30%)50,l、不同浓度ASA&SA对照品稀释液、内标(各浓度均为10,g/ml混合2min离心进样,血清ASA，SA和内标物对照品色谱图,1,0,3,2,0.溶剂峰1.ASA2.内标物3.SA,样品预处理方法,样品,方法,血清中阿司匹林,HClO,4,沉淀蛋白,血浆中布洛芬,甲醇沉淀蛋白,尿中丙磺舒,C,8,固相萃取柱,药物及其代谢产物,从,血浆,或,尿,中,分离的实验步骤,药物从蛋白结合或缀合物中释出,蛋白变性,：如应用,三氯醋酸,、,HClO4,、,有机溶剂,(甲醇、乙醇、丙酮、乙腈等)使蛋白沉淀,盐酸水解,酶消化法,：最常使用蛋白水解酶中枯草菌溶素(一种细菌性蛋白分解酶，可在pH 7.011.0使肽键降解),