补：毒理学动物实验基础.ppt

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,第一节 实验动物,实验动物,以科学研究为目的进行科学饲养和繁殖的动物。,为什么要使用实验动物？,可以较少的人力、物力和时间找出单一因素与结果的关系,可提供大量有价值的可与人类生命活动现象类比的资料。,一、常用动物习性及生理特征,动物种属,习性,生理,小白鼠,（,mouse),1.,喜安静、暗环境；,2.,不耐热、寒，对冷敏感；,3.,性温和，日休息，夜活动；,4.,抗病力弱。,1.,寿命,1.5,2,年,2.,性成熟,2m,体重,18,24g,3.,初配适龄期,2,3m,妊娠期,18,21d(19d),哺乳期,18,21d,雌性周期,4,5d,每胎产仔,5,13,只,一、常用动物习性及生理特征,动物种属,习性,生理,大白鼠,（,rat),1.,性暴躁、易惊、咬人；,2.,耐热、寒（相对于小鼠）,3.,白天休息，夜活动；,4.,抗病力较强。,1.,寿命,22.5,年,2.,性成熟,3m,体重,150 250g,3.,初配适龄期,80110d,妊娠期,21d,哺乳期,2830d,雌性周期,45d,每胎产仔,515,只,日本大耳白兔,新西兰白兔,青紫兰兔,一、常用动物习性及生理特征,动物种属,习性,生理,豚鼠,（,guinea pig),1.,性温和、胆小；,2.,不耐寒和潮湿；,3.,白天进食、活动；,1.,寿命,68,年,2.,性成熟,2m,成年时 体重,300700g,；,3.,初配适龄期,:,雌,3.54.5m,;,雄,6m;,哺乳期,1520d,雌性周期,1218d,每胎平均产仔,16,只,4.,体内不能合成,VC,5.,幼鼠出生时全身已长毛；,睁眼、能跑，几小时后可吃柔软饲料。,第一节 实验动物,二、实验动物的选择,基本原则,对毒物敏感,对毒物代谢方式尽可能和人一致或相近,经济、易得,容易饲养、便于进行实验处理,自然寿命不宜太长,毒理学最常用大、小鼠,第一节 实验动物,（一）种属选择,种属差异，不同实验不同毒物选不同种属动物,1.,气体、蒸汽的粘膜刺激：猫,2.,皮肤局部刺激：豚鼠、家兔,3.,过敏反应：首选豚鼠。,不同动物致敏顺序：豚鼠,家兔,狗,小鼠,猫,青蛙,4.,实质性脏器损害：大、小鼠,5.,呕吐反应：猫、狗（草食动物兔、豚鼠不呕吐）,6.,发热：兔、有时猫；大、小鼠不稳,7.,血压：狗、大鼠、家兔,第一节 实验动物,（一）种属选择,8.,致癌：大、小鼠,9.,致畸：大、小鼠,10.,苯胺及衍生物致变性血红蛋白作用：狗猫（肉食）,黄曲酶毒素急性毒性：鸭雏,黄曲酶毒素致癌：鳟鱼,迟发性神经毒性：母鸡,第一节 实验动物,（二）动物繁育方式的选择,不同的繁育方式可得到不同的实验动物：,近亲繁殖 近交系,异系杂交 杂交一代,随机繁殖 远交群（或封闭群）,第一节 实验动物,（二）动物繁育方式的选择,1.,近交系（,inbred strain),亦称纯系，是连续“兄妹”及亲系交配达,20,代以上的品系。,特点：,全部动物基因相同（纯和性达,98.6%,以上）,个体差异小，对毒物敏感，反应一致。,缺点是抵抗力弱，易患病。,第一节 实验动物,（二）动物繁育方式的选择,2.,杂交一代,（,F1 hybrid),有目的地选择两个近交系动物进行杂交而产生的第一代。,特点：,个体间在遗传上一致但又不是近亲，,其表现型的变异频率比亲本低，,动物健康。,第一节 实验动物,（二）动物繁育方式的选择,3.,远交群（,outbred colony),一个品系的动物尽量避免近亲交配所繁育的动物称为该品系的远交群。,封闭群（,closed colony),如远交群动物中连续,5,年不引进外来动物，则为封闭群。,第一节 实验动物,（三）微生物等级标准的选择,通过微生物学的监测手段，按对动物微生物控制的净化程度，把实验动物分为四级：,1.,普通动物（,conventional animal,CV,I,级）,动物不带有,人畜共患病的病原体,及,体外寄生虫,。,2.,清洁动物（,clean animal,CL,II,级）,在上述基础上还要求不带有,动物传染病的病原体,。,第一节 实验动物,（三）微生物等级标准的选择,3.,无特定病原体动物（,specific pathogen free animal,SPF,级,III,级）,在以上基础上 还需不带有,干扰实验的微生物,。,4.,无菌动物（,germ free animal,GF,IV,级）,不带有,任何用现代方法可以检测出的,微生物,悉生动物（,gnotobiote animal,GN),在无菌动物中植入一种或几种,已知微生物,。,第一节 实验动物,（四）个体选择,1.,年龄、体重,2.,性别,3.,生理状况,4.,健康状况健康动物的标志）,1),发育正常、体态丰满、外观无畸形；,2),被毛浓密、贴顺有光泽、不蓬乱；,3),胸阔宽阔、脊柱不弓不弯；,4),眼睛明亮,5),表皮无溃疡、无结痂（注意尾巴）,6),各天然孔干净、无分泌物；,7),行动灵活、反应敏捷。,第一节 实验动物,三、实验动物的饲养管理,重要性,保证实验动物的正常生存；,保证人和动物的安全；,保证对实验反应的一致。,内容,气候因素：温、湿度、气流、气压、风向、风速等,理化因素：换气、粉尘、臭气、噪音、照明等,居住因素：笼具、饲料、垫料、饮水等,生物因素：同种、异种动物、微生物和寄生虫等,设施,开放系统、,半屏障系统、,屏障系统、,隔离系统,环境指标（,GB/T14925-94,）,开放,亚屏障,屏障,隔离,温度,18-29,18-29,18-29,18-29,温差,3,3,3,湿度,%,40-70,40-70,40-70,40-70,换气量（次,/H,）,10-20,10-20,10-20,气流速度（,m/s,）,0.18,0.18,0.18,梯度压差,(pa),20-50,20-50,20-50,洁净度,(,级,),十万,万,百,落菌数,(,个,/,皿,h),12.2,2.45,0.49,氨浓度,(mg/m),14,14,14,14,噪声,(db),60,60,60,60,照度,(lx),150-,300,照明时间,(h),12/12,12/12,12/12,12/12,第二节 动物实验基本方法,实验前检疫，按性别分笼饲养,一、实验动物的标记,二、实验动物的分组,三、实验动物的染毒方法,染毒（,administration,exposure),为研究毒物对实验动物的毒性作用，模拟人的实际接触途径将毒物经某种途径与动物接触,的过程,。,第二节 动物实验基本方法,三、实验动物的染毒方法,（一）染毒前的准备工作,1.,毒物一般资料的收集,2.,溶剂的选择,3.,剂型的选择,取决于不同的染毒途径及具体的染毒方法。,消化道：喂饲、灌胃、,呼吸道：气管注入、,注射：肌肉注射、静脉注射、腹腔注射,经皮染毒：,第二节 动物实验基本方法,三、实验动物的染毒方法,（二）各种染毒途径及方法,1.,经口染毒,1,）灌胃,2,）喂饲,3,）胶囊吞服,第二节 动物实验基本方法,三、实验动物的染毒方法,（二）各种染毒途径及方法,2.,经呼吸道染毒,静式吸入染毒法,在一定容积的密闭容器内加入一定量的毒物，使之（挥发）充分与空气混合，均匀分布形成一定浓度的含毒空气环境，放入动物，在规定的时间内观察动物的毒性反应。,）染毒装置,）染毒浓度的计算,动物染毒柜的模式图,A,，整体暴露；,B,，口鼻暴露,第二节 动物实验基本方法,挥发性液体,C,ad/L1000,；,a,CL/1000d,式中，,C,：染毒浓度，,mg/L,a:,加入的毒物的量，,ml,d:,毒物比重,L:,染毒柜的容积，,L,气体,mg/,m,3,ppm/22.4;,ppm=22.4,mg/,m,3,/,:,气体分子量,第二节 动物实验基本方法,3),操作步骤：略。,动式吸入染毒法,采用机械通风装置，联系将新鲜空气和毒物气体送入染毒柜，并排出等量的含度空气，使染毒浓度相对稳定的染毒方式。,）染毒装置：染毒柜、机械通风装置、配气系统,）染毒步骤：略。,图,1-8,动式吸入染毒设备,静式吸入染毒和动式吸入染毒的优缺点比较,静式吸入染毒,动式吸入染毒,优点,1.,设备简单，操作容易；,2.,消耗毒物少；,3.,用于急性毒性实验，毒物来源少也用于其它毒性试验。,.,染毒柜内毒物浓度恒定,.,避免随时间延长，容器内,O,2,下降,、,CO,2,含量升高,.,适用于较长时间、反复染毒的实验,缺点,随时间延长，,1.,容器内,O,2,下降,、,CO,2,含量升高,2.,毒物浓度下降,3.,气温、气湿升高,.,设备装置复杂、昂贵,.,耗毒物,第二节 动物实验基本方法,.,经皮染毒,）,备皮,）染毒方法,浸尾,涂皮,.,注射途径,）,ip.Iv.im.,第二节 动物实验基本方法,四、生物材料的采集方法,（一）血液的采集,1.,剪尾采血（小鼠,.1ml/,次；大鼠,0.5ml/,次）,2.,眶静脉丛,3.,眼球摘除,4.,心脏采血,5.,心脏,6.,股动脉、腹主动脉,7.,兔耳缘静脉,（二）粪尿的收集,代谢笼,The end,