药物分析生物碱类药物的分析培训课件.ppt

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环酰胺（近中性）；,吗啡兼有两性；茶碱显酸性。,碱性的生物碱可利用碱性与酸成盐，如盐酸麻黄碱；,碱性极弱的生物碱，以游离状态存在，如咖啡因和利血平。,碱性,游离生物碱大都不溶或难溶于水，溶于或易溶于有机溶剂,碱性生物碱在稀酸溶液中成盐而溶解。,生物碱的盐类多易溶于水，不溶或难溶于有机溶剂,溶解性,多具旋光性。,中国药典中对许多生物碱都规定了旋光度测定。,旋光性,药典收载药物,中国药典（,2010,年版）主要收载有麻黄碱、伪麻黄碱、秋水仙碱、阿托品、山莨菪碱、硫酸奎宁、奎尼丁、吗啡、可待因小檗碱、士的宁、长春碱、长春新碱、利血平、咖啡因、茶碱、毛果芸香碱、川芎嗪等常用生物碱类药物,（二）常见生物碱类药物的结构与性质,1.,苯烃胺类生物碱,2.,托烷类生物碱,3.,喹啉类生物碱,4.,异喹啉类生物碱,5.,吲哚类生物碱,6.,黄嘌呤类生物碱,其它种类,1.,苯烃胺类生物碱,药物结构,理化性质,盐酸麻黄碱（,ephedrine hydrochloride,）,盐酸伪麻黄碱（,pseudoephedrine hydrochloride,）,秋水仙碱（,colchicine,）,一、生物碱类药物性质与结构分析,苯烃胺类药物结构,盐酸麻黄碱,（,ephedrine hydrochloride,）,白色针状结晶或结晶性粉末，无臭，味苦,一、生物碱类药物性质与结构分析,盐酸伪麻黄碱,（,pseudoephedrine hydrochloride,）,苯烃胺类药物结构,白色结晶性粉末，无臭、味苦,一、生物碱类药物性质与结构分析,苯烃胺类药物结构,秋水仙碱,（,colchicine,）,淡黄色结晶性粉末,一、生物碱类药物性质与结构分析,苯烃胺类药物理化性质,性状及溶解性,碱性,氨基醇双缩脲反应,旋光性,紫外特征吸收,一、生物碱类药物性质与结构分析,盐酸麻黄碱水中易溶，乙醇中溶解，三氯甲烷和乙醚中不溶；盐酸伪麻黄碱极易溶于水，易溶于乙醇，微溶于三氯甲烷；秋水仙碱无臭，遇光色渐变深，乙醇、三氯甲烷中易溶，水中溶解，乙醚中极微溶。,苯烃胺类药物理化性质,性状及溶解性,一、生物碱类药物性质与结构分析,麻黄碱,和,伪麻黄碱,，碱性较强，易与酸成盐；,秋水仙碱,碱性很弱，不与酸成盐。,苯烃胺类药物理化性质,碱性,一、生物碱类药物性质与结构分析,盐酸,麻黄碱,和,伪麻黄碱,具有氨基醇结构，可发生双缩脲反应。,苯烃胺类药物理化性质,氨基醇双缩脲反应,一、生物碱类药物性质与结构分析,盐酸麻黄碱为左旋体，,50mg/ml,溶液测定比旋度为,33,35.5,；盐酸伪麻黄碱为右旋,体，,50mg/ml,溶液测定比旋度为,61.0,62.5,；秋水仙碱为左旋体，,10mg/ml,溶液比旋度为,425,450,。,苯烃胺类药物理化性质,旋光性,一、生物碱类药物性质与结构分析,苯烃胺类药物理化性质,紫外特征吸收,盐酸伪麻黄碱,0.5mg/ml,溶液在,251,、,257,、,263nm,波长处有最大吸收；,秋水仙碱在,243,与,350nm,波长处的吸光度比值为,1.70,2.00,。,一、生物碱类药物性质与结构分析,2.,托烷类生物碱,硫酸阿托品,（,atropine sulfate,）,消旋山莨菪碱（,raceanisodamine,）,氢溴酸东莨菪碱（,scopolamine hydrobromide,）,药物结构,理化性质,一、生物碱类药物性质与结构分析,硫酸阿托品,（,atropine sulfate,）,托烷类药物结构,无色结晶或白色结晶性粉末，无臭,一、生物碱类药物性质与结构分析,消旋山莨菪碱,（,raceanisodamine,）,托烷类药物结构,白色结晶或结晶性粉末，无臭，味苦,一、生物碱类药物性质与结构分析,氢溴酸东莨菪碱,（,scopolamine hydrobromide,）,托烷类药物结构,无色结晶或白色结晶性粉末，无臭，具有微风化性,一、生物碱类药物性质与结构分析,托烷类药物理化性质,溶解性,碱性,稳定性,旋光性,莨菪酸反应,一、生物碱类药物性质与结构分析,托烷类药物理化性质,溶解性,硫酸阿托品水中极易溶解，乙醇中易溶；消旋山莨菪碱在乙醇或盐酸中易溶，水中溶解；氢溴酸东莨菪碱水中易溶，乙醇中略溶，三氯甲烷中极微溶，乙醚中不溶。,一、生物碱类药物性质与结构分析,托烷类药物理化性质,碱性,托烷类生物碱氮原子位于五元环内，为叔氮,碱性较强，易与酸成盐。,一、生物碱类药物性质与结构分析,为莨菪醇和莨菪酸组成的酯类物质,易于发生水解。,托烷类药物理化性质,稳定性,一、生物碱类药物性质与结构分析,氢溴酸东莨菪碱为左旋体，,50mg/ml,溶液比旋度为,24,27,；硫酸阿托品和消旋山莨菪碱均为消旋体，无旋光。,托烷类药物理化性质,旋光性,一、生物碱类药物性质与结构分析,水解生成莨菪酸，可为发烟硝酸硝化，在碱性醇溶液中呈现深紫色，后转暗红色，最后颜色消失（,Vatili,反应）；,亦可与硫酸、重铬酸钾在加热条件下，发生氧化反应而生成具有苦杏仁味的苯甲醛。,托烷类药物理化性质,莨菪酸反应,一、生物碱类药物性质与结构分析,药物结构,理化性质,3.,喹啉,类生物碱,硫酸奎宁,（,quinine sulfate,）,硫酸奎尼丁,（,quinidine sulfate,）,一、生物碱类药物性质与结构分析,硫酸奎宁,（,quinine sulfate,）,白色细微的针状结晶，轻柔，易压缩，无臭，味极苦，遇光渐变色,喹啉类药物结构,一、生物碱类药物性质与结构分析,硫酸奎尼丁,（,quinidine sulfate,）,喹啉类药物结构,白色细针状结晶,一生物碱类药物性质与结构分析,喹啉类药物理化性质,溶解性,碱性,6,位含氧的喹啉衍生物,旋光性,荧光特性,一、生物碱类药物性质与结构分析,溶解性,喹啉类药物理化性质,硫酸奎宁，易溶于三氯甲烷,-,无水乙醇（,21,）的混合液，水、乙醇、三氯甲烷、乙醚中微溶。,硫酸奎尼丁，易溶于沸水，溶于三氯甲烷、乙醇，水中微溶，不溶于乙醚。,一、生物碱类药物性质与结构分析,碱性,喹啉类药物理化性质,均具有喹啉环和喹核碱，含有二个氮原子,喹啉氮为芳香氮，碱性较弱，不可与酸成盐；,喹核氮为脂环氮，是叔氮，碱性较强，可与酸成盐,1,分子硫酸与,2,分子药物成盐。,喹核氮,喹,啉,氮,一、生物碱类药物性质与结构分析,喹啉类药物理化性质,硫酸奎宁和硫酸奎尼丁是对映异构体，仅喹核碱部分立体结构不同，硫酸奎宁是左旋体，,20mg/ml,水溶液比旋度为,237,244,；硫酸奎尼丁为右旋体，,20mg/ml,水溶液，比旋度为,275,290,。,旋光性,一、生物碱类药物性质与结构分析,喹啉类药物理化性质,与氯水、氨水发生绿奎宁反应。,6,位含氧的喹啉衍生物,一、生物碱类药物性质与结构分析,喹啉类药物理化性质,在稀酸条件下，均显蓝色荧光，可用于鉴别。,荧光特性,一、生物碱类药物性质与结构分析,药物结构,理化性质,4.,异喹啉,类生物碱,硫酸吗啡（,morphine sullfate,）,盐酸吗啡（,morphine hydrochloride,）,磷酸可待因（,codeine phosphate,）,盐酸小檗碱（,berberine hydrochloride,）,一、生物碱类药物性质与结构分析,硫酸吗啡,（,morphine sullfate,）,白色针状结晶或结晶性粉末，无臭，遇光易变质,异喹啉类药物结构,一、生物碱类药物性质与结构分析,盐酸吗啡,（,morphine hydrochloride,）,白色，有丝光的针状结晶或结晶性粉末，无臭，遇光易变质,异喹啉类药物结构,一、生物碱类药物性质与结构分析,磷酸可待因,（,codeine phosphate,）,白色细微的针状结晶性粉末，无臭，有风化性,异喹啉类药物结构,一、生物碱类药物性质与结构分析,盐酸小檗碱,（,berberine hydrochloride,）,黄色结晶性粉末，无臭，味极苦,异喹啉类药物结构,一、生物碱类药物性质与结构分析,异喹啉类生物碱理化性质,溶解性,酸性和碱性,吗啡生物碱的特征反应,还原性,小檗碱的呈色反应,一、生物碱类药物性质与结构分析,溶解性,异喹啉类药物理化性质,硫酸吗啡与盐酸吗啡，在水中溶解，乙醇中略溶，三氯甲烷和乙醚中不溶；,一、生物碱类药物性质与结构分析,酸性和碱性,异喹啉类药物理化性质,吗啡,结构中具有,酚羟基和叔氮基团,，具有,酸碱两性,，可溶于氢氧化钠溶液和盐酸溶液，但碱性略强；,可待因分,子中酚羟基被甲氧化，仅有叔氮基团，碱性较强，不溶于氢氧化钠溶液；,小檗碱,具有,-,羟胺结构，能形成醇式、季铵式、醛式互变异构，季铵式最稳定，并离子化呈强碱性，可与酸成盐。,一、生物碱类药物性质与结构分析,异喹啉类药物理化性质,吗啡,A,环,酚羟基,具有弱还原性，易被氧化；,可待因,不具有酚羟基，不易氧化,此性质可用于区别吗啡和可待因。,还原性,一、生物碱类药物性质与结构分析,异喹啉类药物理化性质,与甲醛试液的,Marquis,反应,与钼硫酸试液的,Frohde,反应。,吗啡生物碱的特征反应,一、生物碱类药物性质与结构分析,异喹啉类药物理化性质,游离小檗碱可与丙酮结合为丙酮小檗碱，析出黄色沉淀；,220,加热可分解为红色的小檗红碱；在酸性溶液中加漂白粉（或通氯气）溶液即显樱红色；与,5,没食子酸水浴加热，显翠绿色。,小檗碱的呈色反应,一、生物碱类药物性质与结构分析,药物结构,理化性质,5.,吲哚类生物碱,硝酸士的宁（,strychnine nitrate,）,利血平（,reserpine,）,硫酸长春碱（,vinblastine sulfate,）,硫酸长春新碱（,vincristine sulfate,）,一、生物碱类药物性质与结构分析,硝酸士的宁,（,strychnine nitrate,）,无色针状结晶或白色结晶性粉末，无臭，味极苦,吲哚类药物结构,一、生物碱类药物性质与结构分析利血平,（,reserpine,）,白色或淡黄褐色的结晶或结晶性粉末，无臭，几乎无味，遇光色渐变深,吲哚类药物结构,一、生物碱类药物性质与结构分析,硫酸长春碱,（,vinblastine sulfate,）,白色或类白色的结晶性粉末，无臭，有引湿性，遇光或热易变黄,吲哚类药物结构,一、生物碱类药物性质与结构分析,硫酸长春新碱,（,vincristine sulfate,）,白色或类白色结晶性粉末，无臭，有引湿性，遇光或热易变黄,吲哚类药物结构,一、生物碱类药物性质与结构分析,吲哚类生物碱理化性质,溶解性,碱性,士的宁,旋光性,利血平的还原性,利血平吲哚环,-,位氢,长春碱与长春新碱,一、生物碱类药物性质与结构分析,溶解性,硝酸士的宁沸水中易溶，水中略溶，微溶于乙醇、三氯甲烷，乙醚中不溶；利血平三氯甲烷中易溶，丙酮或苯中微溶，不溶于水、甲醇、乙醇或乙醚；硫酸长春碱和长春新碱水中易溶，甲醇、三氯甲烷中溶解，乙醇中极微溶解。,吲哚类生物碱理化性质,一、生物碱类药物性质与结构分析,吲哚类生物碱理化性质,结构中均具有吲哚氮和脂环氮。,吲哚氮,与芳环共轭，碱性较弱，不与酸成盐；,士的宁,结构中,脂环氮,为叔氮，碱性较强，可与硝酸成盐；,利血平,结构中的,脂环氮,由于邻近基团存在立体位阻效应，碱性较弱，不能与酸成盐，以游离药物形式存在；,长春碱,和,长春新碱,结构中的,脂环氮,有两个，均具有一定的碱性，故可与一分子二元酸成盐。,碱 性,一、生物碱类药物性质与结构分析,吲哚类生物碱理化性质,利血平为左旋体，,10mg/ml,三氯甲烷液比旋度为,115,131,。,旋光性,一、生物碱类药物性质与结构分析,吲哚类生物碱理化性质,用硫酸溶解后，可与重铬酸钾反应呈现紫色。,士的宁,一、生物碱类药物性质与结构分析,吲哚类生物碱理化性质,易于氧化，产物为黄色的,3,4-,二去氢利血平，伴有黄绿色荧光，进一步可氧化为,3,4,5,6-,四去氢利血平，具有蓝色荧光。,利血平的还原性,一、生物碱类药物性质与结构分析,吲哚类生物碱理化性质,较活泼，可与芳醛发生缩合反应而显色。,利血平吲哚环,-,位氢,一生物碱类药物性质与结构分析,药物结构,理化性质,6.,黄嘌呤类,生物碱,咖啡因（,caffeine,）,茶碱（,theophylline,）,氨茶碱（,aminophylline,）,一、生物碱类药物性质与结构分析,咖啡因,（,caffeine,）,白色或带极微黄绿色、有丝光的针状结晶，无臭，味苦，有风化性,黄嘌呤类药物结构,一、生物碱类药物性质与结构分析,茶碱,（,theophylline,）,白色结晶性粉末，无臭、味苦,黄嘌呤类药物结构,一、生物碱类药物性质与结构分析,氨茶碱,（,aminophylline,）,白色或微黄色的颗粒或粉末，微有氨臭，味苦,黄嘌呤类药物结构,一、生物碱类药物性质与结构分析,黄嘌呤类生物碱理化性质,溶解性,酸性和碱性,黄嘌呤生物碱的紫脲酸铵反应,一、生物碱类药物性质与结构分析,溶解性,咖啡因在热水或三氯甲烷中易溶，在水、乙醇或丙酮中略溶，乙醚中极微溶；茶碱在乙醇、三氯甲烷中微溶，水中极微溶，氢氧化钾或氨溶液中易溶；氨茶碱在水中溶解，乙醚中不溶。,黄嘌呤类生物碱理化性质,一、生物碱类药物性质与结构分析,酸性和碱性,咖啡因不显酸性；,茶碱,7,位,N-H,可解离显酸性，可与乙二胺成,氨,-,茶碱,；,黄嘌呤环上,N-9,碱性极弱，近中性，游离碱可供药用,黄嘌呤类生物碱理化性质,一、生物碱类药物性质与结构分析,黄嘌呤生物碱的紫脲酸铵反应,咖啡因和茶碱具有黄嘌呤结构，与盐酸和氯酸钾水浴蒸干，遇氨气生成四甲基紫脲酸铵，显紫色，加氢氧化钠紫色消失。,黄嘌呤类生物碱理化性质,一、生物碱类药物性质与结构分析,（一）生物碱一般鉴别试验,1.,熔点测定,2.,生物碱显色反应,3.,生物碱沉淀反应,4.,紫外分光光度法,5.,红外分光光度法,6.,薄层色谱法,二、生物碱类药物的鉴别试验,固体生物碱类药物大多具有一定的熔点，,某些生物碱药物采用测定,游离生物碱熔点,的鉴别方法,1.,熔点测定,（一）生物碱一般鉴别试验,二、生物碱类药物的鉴别试验,磷酸可待因的鉴别,取本品约,0.2g,，加水,4ml,溶解后，在不断搅拌下滴加,20,氢氧化钠溶液至出现白色沉淀，用玻璃棒摩擦器壁使沉淀完全，滤过；沉淀用水洗净，在,105,干燥,1,小时，测定熔点为,154,158,。,二、生物碱类药物的鉴别试验,常用显色试剂有浓硫酸、浓硝酸、钼硫酸、矾硫酸、甲醛,-,硫酸、硫酸铈铵等,显色反应的机制可能是脱水、氧化、缩合等。,（一）生物碱一般鉴别试验,2.,生物碱显色反应,二、生物碱类药物的鉴别试验,中国药典（,2010,年版）中硝酸士的宁鉴别,取硝酸士的宁,0.5mg,，置蒸发皿中，加硫酸,1,滴溶解后，加重铬酸钾的结晶一小粒，周围即显紫色,二、生物碱类药物的鉴别试验,常见生物碱的显色鉴别试验,茶碱,磷酸可待因,盐酸小檗碱,利血平,硝酸士的宁,硫酸长春新碱,硫酸长春碱硫酸奎宁、奎尼丁,硝酸毛果芸香碱,表,1,表,2,二、生物碱类药物的鉴别试验,常见生物碱的显色鉴别试验表,1,生物碱类药物,鉴别显色试剂,试验现象,茶碱,磷酸可待因,盐酸小檗碱,利血平,硝酸士的宁,重氮苯磺酸试液,铜,-,吡啶试液,亚硒酸硫酸液,5,没食子酸,0.1,钼酸钠的硫酸溶液,红色,三氯甲烷萃取层绿色,即显绿色，渐变蓝色,翠绿色,即显黄色，渐变蓝色；,二、生物碱类药物的鉴别试验,生物碱类药物,鉴别显色试剂,试验现象,硫酸长春新碱,硫酸长春碱,硫酸奎宁、奎尼丁,硝酸毛果芸香碱,重铬酸钾,1,硫酸铈铵磷酸液,1,硫酸铈铵磷酸液,溴试液、氨试液,重铬酸钾、过氧化氢,紫色,即显蓝色，放置后渐变为紫堇色,即显紫红色至暗紫红色,翠绿色,三氯甲烷萃取层紫色,常见生物碱的显色鉴别试验表,2,二、生物碱类药物的鉴别试验,常用的生物碱沉淀剂有：碘化铋钾、碘化汞钾、碘,-,碘试液、二氯化汞等,由于反应专属性不高，中国药典（,2010,年版）仅对个别生物碱类药物的鉴别使用此类反应,（一）生物碱一般鉴别试验,3.,生物碱沉淀反应,二、生物碱类药物的鉴别试验,生物碱类药物大都含有芳环、芳杂环以及共轭双键结构，具有特征的紫外吸收，可供鉴别。,（一）生物碱一般鉴别试验,4.,紫外分光光度法,中国药典（,2010,年版）紫外鉴别方法,常见生物碱类药物的紫外鉴别,二、生物碱类药物的鉴别试验,中国药典（,2010,年版）紫外鉴别方法,（,1,）对比吸收光谱的特征参数。,（,2,）对比吸收光谱的一致性。,（,3,）对比吸光度比值的一致性。,二、生物碱类药物的鉴别试验,常见生物碱类药物的紫外鉴别,药物,溶剂,浓度,紫外鉴别,秋水仙碱,盐酸伪麻黄碱,硫酸吗啡,硫酸长春碱,磷酸川芎嗪,水,水,水,0.1 mol/L NaOH,无水乙醇,水,10,g/ml,0.5,mg/ml,0.015,0.015,20,g/ml,15,g/ml,A,243,/A,350,比值为,1.70,2.00,251,nm,、,257,nm,、,263,nm,处有最大吸收,285,nm,处有最大吸收，吸光度为,0.65,，,298,nm,处有最大吸收，吸光度为,1.1,215,nm,、,264,nm,处有最大吸收,295,nm,处有最大吸收,二、生物碱类药物的鉴别试验,除硝酸士的宁、磷酸奎尼丁外均采用此法鉴别。,（一）生物碱一般鉴别试验,5.,红外分光光度法,二、生物碱类药物的鉴别试验,（一）生物碱一般鉴别试验,6.,薄层色谱法,【实例分析】消旋山莨菪碱的鉴别,【实例分析】消旋山莨菪碱的鉴别,分析,展开剂中添加碱性的氨溶液,显色方法,二、生物碱类药物的鉴别试验,（一）生物碱一般鉴别试验,6.,薄层色谱法,【实例分析】消旋山莨菪碱的鉴别,药典方法,取本品与消旋山莨菪碱对照品，分别加甲醇制成每,1ml,中含,1mg,的溶液，照薄层色谱法，吸取上述溶液各,10l,，分别点于同一硅胶,GF,254,薄层板上，用甲醇,-,丙酮,-,乙醇,-,浓氨液（,450.60.4,）为展开剂，展开后晾干，置紫外灯（,254nm,）下检视，供试品溶液所显主斑点的位置应与对照溶液的主斑点相同；,二、生物碱类药物的鉴别试验,中和硅胶的弱酸性，防止生物碱在薄层板上吸附太牢，导致严重拖尾,除氨溶液外，还可使用乙二胺,展开剂中添加碱性的氨溶液,二、生物碱类药物的鉴别试验,采用,GF,254,的荧光背景,普通硅胶板，可利用生物碱自身的颜色、荧光性质以及与生物碱沉淀剂的显色反应显色,显色方法,二、生物碱类药物的鉴别试验,（二）生物碱特征鉴别试验,1.,具有氨基醇结构生物碱的特征反应,2.,托烷生物碱的特征反应,3.6,位含氧喹啉衍生物的特征反应,4.,吗啡生物碱的特征反应,5.,吲哚生物碱的特征反应,6.,黄嘌呤类生物碱的特征反应,二、生物碱类药物的鉴别试验,（二）生物碱特征鉴别试验,1.,具有氨基醇结构生物碱的特征反应,双缩脲反应,中国药典（,2010,年版）盐酸麻黄碱的鉴别,反应原理,方程式,二、生物碱类药物的鉴别试验,反应原理,Cu,2+,与仲胺基形成紫堇色配位化合物，溶于乙醚层显紫红色，四水配合物溶于水层呈蓝色。,无水配合物及一水配合物,四水配合物,乙醚,水层,二、生物碱类药物的鉴别试验,双缩脲反应方程式,二、生物碱类药物的鉴别试验,中国药典（,2010,年版）盐酸麻黄碱的鉴别,取盐酸麻黄碱约,10mg,，加水,1ml,溶解后，加硫酸铜试液,2,滴与,20,的氢氧化钠溶液,1ml,，即显蓝紫色；加乙醚,1ml,，振摇后，放置，乙醚层即显紫红色，水层变为蓝色。,二、生物碱类药物的鉴别试验,2.,托烷生物碱的特征反应,莨菪酸，与发烟硝酸和醇制氢氧化钾发生特征维他立（,Vitali,）反应。,中国药典（,2005,年版）对氢溴酸东莨菪碱、消旋山莨菪碱、硫酸阿托品均采用此法鉴别,（二）生物碱特征鉴别试验,Vitali,反应,中国药典,附录,III-Vitali,反应,反应原理,方程式,二、生物碱类药物的鉴别试验,Vitali,反应原理,酸性条件下，托烷类生物碱酯键水解，生成,莨菪酸,，莨菪酸为硝酸硝化为三硝基衍生物，在醇制氢氧化钾碱性条件下，转变为,紫色,的醌型物质。,二、生物碱类药物的鉴别试验,Vitali,方程式,二、生物碱类药物的鉴别试验,中国药典,附录,III-Vitali,反应,取供试品约,10mg,，加发烟硝酸,5,滴，置水浴上蒸干，得黄色的残渣，放冷，加乙醇,2,3,滴湿润，加固体氢氧化钾一小粒，即显深紫色。,二、生物碱类药物的鉴别试验,奎宁和奎尼丁在酸性溶液中，与溴水（或氯水）及氨水发生绿奎宁反应,中国药典（,2010,年版）采用此法鉴别上述药物。,（二）生物碱特征鉴别试验,3.6,位含氧喹啉衍生物的特征反应,绿奎宁,（,Thalleioquin,）反应,中国药典（,2010,年版）硫酸奎宁鉴别,方程式,二、生物碱类药物的鉴别试验,中国药典（,2010,年版）硫酸奎宁鉴别,取本品约,20mg,，加水,20ml,溶解后，分取溶液,5ml,，加溴试液,3,滴与氨试液,1ml,，即显翠绿色,二、生物碱类药物的鉴别试验,绿奎宁反应方程式,（翠绿色）,二、生物碱类药物的鉴别试验,（二）生物碱特征鉴别试验,4.,吗啡生物碱的特征反应,（,1,）,Marquis,反应,（,2,）,Frohde,反应,（,3,）还原反应,二、生物碱类药物的鉴别试验,吗啡为含有酚羟基的异喹啉类生物碱，可与甲醛硫酸反应产物为具有特征,紫红色,的醌式化合物。,（,1,）,Marquis,反应,方法：取本品约,1mg,，加甲醛硫酸试液,1,滴，即显紫堇色,二、生物碱类药物的鉴别试验,吗啡与钼硫酸试液发生显色反应，呈紫色,-,蓝色,-,棕绿色的渐变。灵敏度为,0.05g,。,（,2,）,Frohde,反应,方法：取本品约,1mg,，加钼硫酸试液,0.5ml,，即显紫色，继变为蓝色，最后变为棕绿色。,二、生物碱类药物的鉴别试验,（,3,）还原反应,原理,反应式,方法,二、生物碱类药物的鉴别试验,原理,吗啡酚羟基邻位,C,2,具有弱还原性，铁氰化钾试液可将其氧化生成伪吗啡，自身被还原为,亚铁氰化钾,，再与三氯化铁反应生成,普鲁士蓝,（亚铁氰化铁）,二、生物碱类药物的鉴别试验,反应式,二、生物碱类药物的鉴别试验,返 回,方法,方法：取本品约,1mg,，加水,1ml,溶解后，加稀铁氰化钾试液,1,滴，即显蓝绿色（与可待因区别）,二、生物碱类药物的鉴别试验,利血平吲哚环上的,-,氢原子较活泼，可与香草醛缩合显玫瑰红色，与对,-,二甲氨基苯甲醛缩合显绿色,（二）生物碱特征鉴别试验,5.,吲哚生物碱的特征反应,官能团反应,二、生物碱类药物的鉴别试验,黄嘌呤生物碱与盐酸及氯酸钾加热后，咪唑环开环，遇氨气即缩合生成四甲基紫脲酸铵，显紫色,（二）生物碱特征鉴别试验,6.,黄嘌呤类生物碱的特征反应,紫脲酸铵反应,方程式,反应方法,二、生物碱类药物的鉴别试验,紫脲酸铵方程式,二、生物碱类药物的鉴别试验,反应方法,方法：取本品约,10mg,，加盐酸,1ml,与氯酸钾,0.1g,，置水浴上蒸干，遗留浅红色的残渣，遇氨气即变为紫色；再加氢氧化钠试液数滴，紫色即消失,二、生物碱类药物的鉴别试验,【相关链接】无机酸根鉴别试验 药典附录,III,（一般鉴别实验）,如硝酸士的宁应显硝酸盐的鉴别反应,盐酸麻黄碱应显氯化物的鉴别反应,硫酸阿托品应显硫酸盐的鉴别反应,磷酸川芎嗪应显磷酸盐的鉴别反应等,二、生物碱类药物的鉴别试验,1.,氯化物的鉴别反应,2.,硫酸盐的鉴别反应,3.,硝酸盐的鉴别反应,4.,溴化物的鉴别反应,5.,磷酸盐的鉴别反应,无机酸根鉴别试验 药典附录,III,（一般鉴别实验）,二、生物碱类药物的鉴别试验,取供试品试液，加硝酸使成酸性后，加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨试液即溶解，再加硝酸，沉淀复生成。如供试品为生物碱或其他有机碱的盐酸盐，须先加氨试液使成碱性，将析出的沉淀滤过除去，取滤液进行试验。,取供试品少量，置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热，即发生氯气，能使湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色,（三）无机酸根鉴别试验,1.,氯化物的鉴别反应,二、生物碱类药物的鉴别试验,取供试品溶液，滴加氯化钡试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。,取供试品溶液，滴加醋酸铅试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。,取供试品溶液，加盐酸，不生成白色沉淀（与硫代硫酸盐区别）,（三）无机酸根鉴别试验,2.,硫酸盐的鉴别反应,二、生物碱类药物的鉴别试验,取供试品溶液，置试管中，加等量的硫酸，小心混合，冷后，沿管壁加硫酸亚铁试液，使成两液层，接界面显棕色。,取供试品溶液，加硫酸与铜丝，加热，即发生红棕色的蒸汽。,取供试品溶液，滴加高锰酸钾试液，紫色不应褪去（与亚硝酸盐区别）,（三）无机酸根鉴别试验,3.,硝酸盐的鉴别反应,二、生物碱类药物的鉴别试验,取供试品溶液，加硝酸银试液，即生成淡黄色凝乳状沉淀；分离，沉淀能在氨试液中微溶，但在硝酸中几乎不溶。,取供试品溶液，滴加氯试液，溴即游离，加三氯甲烷振摇，三氯甲烷层显黄色或红棕色,（三）无机酸根鉴别试验,4.,溴化物的鉴别反应,二、生物碱类药物的鉴别试验,取供试品的中性溶液，加硝酸银试液即生成浅黄色沉淀；分离，沉淀在氨试液或稀硝酸中均易溶解。,取供试品溶液，加氯化铵镁试液，即生成白色结晶性沉淀。,取供试品溶液，加钼酸铵试液与硝酸后，加热即生成黄色沉淀；分离，沉淀能在氨试液中溶解。,（三）无机酸根鉴别试验,5.,磷酸盐的鉴别反应,二、生物碱类药物的鉴别试验,双缩脲反应,蓝紫色,盐酸麻黄碱,Vitali,反应,紫色,硫酸阿托品,硫酸奎宁,翠绿色,绿奎宁反应,盐酸吗啡,Marquis,反应,紫红色,硝酸士的宁,硫酸，重铬酸钾,紫色,二、生物碱类药物的鉴别试验,1.,利用旋光性差异,检查硫酸阿托品中的,莨菪碱,莨菪碱为左旋体，而阿托品无旋光性，要求硫酸阿托品供试品溶液（,50mg/ml,）的旋光度不得超过,0.40,三、生物碱类药物的特殊杂质检查,检查硫酸阿托品中的,其它生物碱（东莨菪碱、山莨菪碱和樟柳碱等）,碱性较阿托品弱，盐酸盐可为氨试液置换为游离生物碱，不溶于水，盐酸阿托品不游离，仍溶解于水。,取供试品溶液，加氨试液,2ml,，振摇，不得立即发生浑浊。,2.,利用溶解性差异,三、生物碱类药物的特殊杂质检查,3.,利用光学性质差异,检查利血平中的,氧化产物,。,利血平氧化变质，产物具有荧光。,将供试品置紫外光灯（,365nm,）下检视,不得显明显的荧光。,三、生物碱类药物的特殊杂质检查,（二）利用杂质和药物化学性质区别进行检查,1.,中国药典（,2010,年版）盐酸吗啡中特殊杂质检查,2.,中国药典（,2010,年版）硝酸士的宁中马钱子碱的检查,三、生物碱类药物的特殊杂质检查,1.,中国药典（,2005,年版）盐酸吗啡中特殊杂质检查,阿扑吗啡,罂粟酸,三、生物碱类药物的特殊杂质检查,阿扑吗啡,利用,阿扑吗啡,具有还原性，产物在水溶液中为绿色，乙醚中为宝石红色，而药物没有此性质,检查时，规定,乙醚层不得显红色,，,水层不得显绿色,，以此控制阿朴吗啡限量；,三、生物碱类药物的特殊杂质检查,罂粟酸,利用罂粟酸可与,三氯化铁,在微酸性条件下生成,红色,的,罂粟酸铁,，吗啡没有此现象,要求在加入,2,滴三氯化铁试液后，溶液不得显,红色,。,三、生物碱类药物的特殊杂质检查,（三）利用杂质和药物色谱学行为差异进行检查,1.,薄层色谱法,2.,高效液相色谱法,3.,【实例分析】,三、生物碱类药物的特殊杂质检查,1.,薄层色谱法检查“特殊杂质”,中国药典（,2010,年版）对药物中“其他生物碱”的检查,杂质对照品法，如氢溴酸山莨菪碱中其它生物碱的检查。,供试品溶液的自身稀释对照法，如硫酸奎宁中其它金鸡钠碱的检查。,杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用，如盐酸吗啡中其它生物碱的检查。,三、生物碱类药物的特殊杂质检查,高效液相色谱法具有分离效能高、专属性强、检测灵敏等特点，其在杂质检查上的应用，在近版药典中有逐渐增加的趋势，,如中国药典（,2010,年版）对长春新碱中其他生物碱、磷酸川芎嗪中有关物质的检查。,2.,高效液相色谱法检查特殊杂质,三、生物碱类药物的特殊杂质检查,3.,【实例分析】,生物碱中特殊杂质色谱法检查,薄层色谱检查,高效液相色谱法检查,硫酸奎宁其它金鸡纳碱,盐酸吗啡其它生物碱,薄层色谱法讨论,硫酸长春新碱中有关物质的检查,磷酸川芎嗪中有关物质检查,三、生物碱类药物的特殊杂质检查,附表,-,药典中常见生物碱特殊杂质及检查方法,硫酸阿托品氢溴酸东莨菪碱,盐酸伪麻黄碱,硫酸奎宁,硫酸奎尼丁,表,1,表,2,表,3,盐酸吗啡,硫酸吗啡,磷酸可待因,盐酸小檗碱,硝酸士的宁,利血平,硫酸长春新碱,硫酸长春碱,咖啡因,茶碱,氨茶碱,硝酸毛果芸香碱,磷酸川芎嗪,三、生物碱类药物的特殊杂质检查,药典中常见生物碱特殊杂质及检查方法 表,1,药物,特殊杂质（检查法）,硫酸阿托品,氢溴酸东莨菪碱,盐酸伪麻黄碱,硫酸奎宁,硫酸奎尼丁,莨菪碱（旋光）、其它生物碱（氨试液的混浊）,其他生物碱（氨试液的混浊）、易氧化物（,KMnO,4,）,有关物质（,HPLC,）,三氯甲烷,-,乙醇中不溶物、其它金鸡钠碱（,TLC,）,三氯甲烷,-,乙醇中不溶物、有关物质（,TLC,）,三、生物碱类药物的特殊杂质检查,药物,特殊杂质（检查法）,盐酸吗啡,硫酸吗啡,磷酸可待因,盐酸小檗碱,硝酸士的宁,利血平,阿扑吗啡、罂粟酸（显色试验）、其它生物碱（,TLC,）,其他生物碱（残渣重量法）,吗啡（比色法）,其它生物碱（,TLC,）、氰化物、有机,腈,（,TLC,）,马钱子碱（显色试验）,氧化产物（荧光）,药典中常见生物碱特殊杂质及检查方法 表,2,三、生物碱类药物的特殊杂质检查,药物,特殊杂质（检查法）,硫酸长春新碱,硫酸长春碱,咖啡因,茶碱,氨茶碱,硝酸毛果芸香碱,磷酸川芎嗪,有关物质（,HPLC,）,其它生物碱（,TLC,）,有关物质（,TLC,）,有关物质（,TLC,）,有关物质（,TLC,）,其它生物碱（氨试液的混浊）,有关物质（,HPLC,）,药典中常见生物碱特殊杂质及检查方法 表,3,三、生物碱类药物的特殊杂质检查,（一）非水滴定法,（二）提取酸碱滴定法,中国药典,(2010,年版,),常用生物碱药物含量测定方法一览表,（三）酸性染料比色法,（四）紫外分光光度法,（五）高效液相色谱法,四、生物碱类药物的含量测定,（一）非水滴定法,1.,高氯酸法基本原理,2.,一般方法,3.,滴定注意事项,【实例分析】,【相关链接】,四、生物碱类药物的含量测定,1.,高氯酸滴定法基本原理,高氯酸置换出与生物碱结合的较弱的酸的反应。,BH,+,A,-,：表示生物碱盐类；,HA,：表示被置换出的弱酸；,四、生物碱类药物的含量测定,不同,HA,在醋酸中的酸性情况如示：,HClO,4,HBr,H,2,SO,4,HCl,HSO,4,HNO,3,H,3,PO,4,及其它弱酸,四、生物碱类药物的含量测定,2.,一般方法,除另有规定外，精密称取供试品适量,消耗高氯酸滴定液（,0.1mol/L,）约,8ml,，加冰醋酸,10,30ml,使溶解，加各品种项下规定的指示液,1,2,滴，用高氯酸滴定液（,0.1mol/L,）滴定。终点颜色应以电位滴定时的突跃点为准，并将滴定结果用空白试验校正。,四、生物碱类药物的含量测定,3.,滴定注意事项,（,1,）方法的适用对象2,）不同酸根的影响,硝酸盐,磷酸盐及有机酸盐,氢卤酸盐,硫酸盐,（,3,）滴定终点的指示方法,（,4,）滴定剂的注意事项,四、生物碱类药物的含量测定,（,1,）方法的适用对象,适于,Kb10,-8,的有机碱、有机酸的碱金属盐的含量测定。,Kb,为,10,-8,10,-10,，宜选,冰醋酸,作溶剂；,Kb,为,10,-10,10,-12,时，选用,冰醋酸与醋酐,的混合溶剂；,Kb10,-12,，选择,醋酐,作溶剂。,如咖啡因（,Kb,10,-14.15,）的含量测定选择醋酸和醋酐的混合溶剂。,四、生物碱类药物的含量测定,（,2,）不同酸根的影响,磷酸盐及有机酸盐,在冰醋酸中酸性极弱，不干扰高氯酸滴定，故,可直接滴定,四、生物碱类药物的含量测定,（,2,）不同酸根的影响,氢卤酸盐,在醋酸中酸性较强，反应不能完全,药典规定生物碱的氢卤酸盐,不可直接滴定,需加入,5,醋酸汞冰醋酸试液,3,5ml,后，使其生成在醋酸溶剂中难解离的卤化汞，再进行滴定，此时可反应完全,Hg(Ac),2,2BH,+,X,-,HgX,2,+2BHX,四、生物碱类药物的含量测定,（,2,）不同酸根的影响,硝酸盐,可直接滴定,硝酸有较强的氧化性，可氧化指示剂结晶紫,硝酸盐不宜用结晶紫作指示剂，改用,电位法,指示终点。,电位滴定时用玻璃电极作为指示电极，饱和甘汞电极（玻璃套管内装氯化钾的饱和无水甲醇溶液）为参比电极,四、生物碱类药物的含量测定,（,2,）不同酸根的影响,硫酸盐,硫酸在醋酸中酸性较弱，是一元酸,只能被置换为,HSO,4,，仅滴定至,硫酸氢盐,为止。,当生物碱的硫酸盐分子中具有不同碱性的氮原子时，反应的定量关系需格外注意,四、生物碱类药物的含量测定,（,3,）滴定终点的指示方法,终点判定有,电位法,和,指示剂法,二种。,硝酸盐类采用电位法,其余生物碱、有机碱性药物的终点判定多使用指示剂法。,常用指示剂为结晶紫,四、生物碱类药物的含量测定,结晶紫终点指示,不同的碱及盐，终点颜色有较大差异。,终点颜色呈现的变化为紫、蓝、蓝绿、绿、黄。,一般碱性较强的药物，终点为,蓝色,，如硫酸阿托品；,碱性中