基因治疗2.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,基因治疗（,Gene therapy,）,基因治疗,：,指应用,DNA,重组技术，将,外源正常基因,导入,靶细胞,，以,纠正,或,补偿,因基因缺陷和异常引起的疾病,以达到治疗的目的。,1966,年：安德森提出“基因治疗”概念。,1970,年：美国医生罗杰斯尝试基因治疗精氨酸血症。,1980,年：美国加州大学马丁,克赖恩教授进行人类第一例真正意义上的基因治疗，未获批准，也未获成功。马丁,克赖恩教授被誉为“基因治疗的先驱”。,1989,年：美国批准进行,5,例标志基因的人体转移试验。安德森被誉为“基因治疗之父”。,1990,年：布利等人进行了世界上首次人体基因治疗的临床试验，取得初步治疗效果。,1991,年起：国内外基因治疗临床试验越来越多。,二、基因治疗的发展历史,1990,年，布利和安德森等人进行了世界上首次人体基因治疗的临床试验，他们用无害的病毒作为载体，将能产生腺苷脱氨酶（,ADA,）的健康基因导入患者体内的细胞中，用于治疗由于基因缺陷而无法合成具有分解氨基毒素功能的,ADA,的,4,岁女孩，获得了初步治疗果。,1990-1994,年,，,40,余项基因治疗方案被批准；至,1998,年，已实施,373,个临床方案，,3134,人接受了基因转移试验（其中肿瘤方案,234,个，受试者,2134,人）；至,2002,年，,400,余项基因治疗方案进入临床试验；,2003,年，基因治疗药物上市。,欧盟委员会（EC）已批准了西方世界首个基因治疗药物Glybera，该药来自一个很小的荷兰生物技术公司uniQure，标志着修复基因缺陷的新颖医疗技术的一个里程碑。该药用于治疗一种极其罕见的遗传性疾病脂蛋白脂肪酶缺乏症（LPLD），预计每名患者的花费将高达120万欧元（约合160万美元），该药将创造昂贵现代医药的新纪录,1,、致病基因的原位置换,2,、基因的异位替代,3,、直接抑制有害基因的表达,4,、增强机体免疫能力的基因治疗,第一节、基因治疗的策略,具体策略：,1,、基因矫正：,对异常基因在原位进行修复，理论上的理想方式。,2,、基因置换：,同源重组的方式将正常基因取代变异基因，困难在于体内同源重组的频率很低,3,、基因增补：,将正常的目的基因输入病人体内，以补偿缺陷基因的功能或调整细胞的某些功能,4,、基因失活：,反义核酸、核酶、,DNA,三链技术、,RNA,干涉和基因敲除（,gene knock-out,）,5,、免疫基因疗法：,DNA,疫苗，免疫因子基因导入,6,、活化前体药物基因疗法（“自杀基因”）：,如单纯疱疹病毒胸苷激酶（,HSV-TK,），催化核苷酸类似物,(,丙氧鸟苷,),磷酸化为有毒中间物，阻断,DNA,合成,7,、化疗保护性基因疗法：,多药抗性基因（,MDR-1,）导入骨髓干细胞,（一）基因置换（,gene replacement,）,定义：,指将特定的目的基因导入特定细胞，通过定位重组，以导入的正常基因置换基因组内原有的缺陷基因。,目的：,将缺陷基因的异常序列进行矫正。,对缺陷基因的缺陷部位进行精确的原位修复，不涉及基因组的任何改变。,技术,：基因同源重组,基因置换,必要条件,：,1,、对导入的基因及其产物有详尽的了解,2,、外来基因能有效地导入靶细胞,3,、导入基因能在靶细胞中长期稳定存在,4,、导入基因能有适度水平的表达,5,、基因导入的方法及所用载体对宿主细胞安全无害,（二）基因添加,基因添加或称基因增补,（,gene augmentation,）,:,通过导入外源基因使靶细胞表达其本身不表达的基因。,类型,:,1,、在有缺陷基因的细胞中导入,相应的正常基因,，而细胞内的缺陷基因并未除去，通过导入正常基因的表达产物，补偿缺陷基因的功能；,2,、向靶细胞中导入靶细胞,本来不表达,的基因，利用其表达产物达到治疗疾病的目的。,基因干预,(,gene interference,),指采用特定的方式抑制某个基因的表达，或者通过破坏某个基因而使之不表达，以达到治疗疾病的目的。,反义核酸：封闭基因表达,核 酶：裂解特异的靶,mRNA,RNA,干涉技术：,（三）基因干预,（四）自杀基因治疗,自杀基因治疗,:,恶性肿瘤基因治疗的主要方法之一。,原理,:,将,“,自杀,”,基因导入宿主细胞中，这种基因编码的酶能使无毒性的药物前体转化为细胞毒性代谢物，诱导靶细胞产生,“,自杀,”,效应，从而达到清除肿瘤细胞的目的。,自杀基因的作用机制,TK/GCV,单纯疱疹病毒,型胸苷激酶（,thymidine kinase,tk,）基因编码胸苷激酶，特异性地将无毒的核苷类似物丙氧鸟苷（,ganciclovir,GCV,）转变成毒性,GCV,三磷酸核苷，后者能抑制,DNA,聚合酶活性，导致细胞死亡。,CD/5-FC,大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（,cytosine deaminase,CD,）基因，在细胞内将无毒性,5-,氟胞嘧啶（,5-FC,）转变成毒性产物,5-,氟尿嘧啶（,5-FU,）。,1.,自杀基因系统,5-FU,通过,竞争性抑制,胸苷酸合酶,的活性，从而抑制脱氧胸苷三磷酸的合成。,旁观者效应,:,“,自杀基因,”,治疗不仅使转导了,“,自杀基因,”,的肿瘤细胞在用药后被杀死，而且与其相邻的未转导,“,自杀基因,”,的肿瘤细胞也被杀死。,2.,旁观者效应,（五）基因免疫治疗,通过将抗癌免疫增强细胞因子或,MHC,基因导入肿瘤组织，以增强肿瘤微环境中的抗癌免疫反应。,治疗性基因的选择,基因载体的选择,靶细胞的选择,基因转移,外源基因表达的筛选,回输体内,二、基因治疗的基本程序,治疗性基因的选择,目的基因分类：,直接选择缺陷基因的正常基因，如选择腺苷脱氨酶治疗重症联合免疫缺陷综合征（,SCID,）,间接治疗作用的基因：细胞因子基因、自杀基因、多药抗性基因等,目的基因来源：,基因克隆、人工合成和,PCR,扩增,性细胞,基因治疗（,Germline gene therapy,）,:,是在生殖细胞中进行操作，改变生殖细胞的程序，这些细胞能将改变传递给下一代，使其后代从此再不会得这种遗传疾病。,伦理学问题？,体细胞基因治疗,（,Somatic gene therapy,）,:,是在体细胞中进行基因操作，以改变身体已分化细胞,DNA,的程序，但这些细胞没有能力将这种改变传递给下一代，其子孙后代仍会患这种病。,二、靶细胞的选择,靶细胞的选择须考虑：,最好为组织特异性细胞,细胞较易获得，且生命周期较长,离体细胞较易受外源基因转化,离体细胞经转染和一定时间培养后再植回体内，仍较易成活,目前常用的靶细胞有：,造血细胞,皮肤成纤维细胞,肝细胞,血管内皮细胞,淋巴细胞,肌肉细胞,肿瘤细胞,三）靶细胞的选择,靶细胞,是指接受外源,Gene,的体细胞,选择靶细胞的,原则,是：,1,）必须较坚固，便于体外培养和进行遗传技术,操作；,2,）易于由人体分离又便于输回体内,3,）具有增殖优势，生命周期长（能存活几月至,几年，或整个生命周期）,4,）易于受外源遗传物质转化。,常见的靶细胞,外周血,T,淋巴细胞,上皮细胞,内皮,皮肤成纤维细胞,造血干细胞,地中海贫血、严重,复合免疫缺陷病等基因治疗,肝,C,家族性高胆固醇血症、低密度,脂蛋白病的基因治疗,肌细胞,人类体细胞基因治疗方法,:,体外法（,ex vivo,）：,将病人的细胞取出，在体外加入正常基因校正细胞，再将校正后的细胞放回到病人体内，使新的功能得到表达。,原位法（,in situ,）：,将新基因直接引入病人疾病部位（如癌块、心肌等），可用病毒宿主或裸露的,DNA,引入。,体内法（,in vivo,）：,将宿主注入血流，将治疗性基因以安全有效的方式带至组织，目前尚未研制成功。,生物学方法（病毒载体）,逆转录病毒载体，腺病毒载体，腺病毒相关病毒载体，单纯疱疹病毒载体,非生物学方法,物理方法：显微注射，电穿孔,化学方法：脂质体，磷酸钙共沉淀，其它方法,三、基因治疗中基因导入的方法,1.,病毒介导的基因转移系统,病毒载体,介导的基因转移效率较高，因此它也是使用最多的基因治疗载体。据统计，有,72%,的临床实验计划和,71%,的病例使用了病毒载体，其中用得最多的是逆转录病毒载体。,感染细胞,Retrovirus,（,1,）逆转录病毒,主要有,逆转录病毒,（,Retrovirus,RV,）、,慢病毒,（,Lentivirus,LV,）、,腺病毒,（,Adenovirus,AV,）、,腺相关病毒,（,Adeno-Associated Virus,AAV,）等。,LTR,gag,pol,env,LTR,长末端,重复序列,调节和,启动转录,产生病毒,核心蛋白,产生,逆转录酶,产生病毒,外膜蛋白,包装信号,DNA,前病毒的结构特征,U5 R U3,U3=,增强子，,R=,启动子，,U5=,转录起始位点,(1),保留病毒颗粒的包装信号而缺失病毒蛋白基因,(2),辅助细胞株，产生病毒包装蛋白。,包装细胞主要有：,2,PA317,CRIP,Retroviral packaging system,逆转录病毒载体的特点,逆转录病毒包膜上由,env,编码的糖蛋白，能够被许多哺乳动物细胞膜上的特异性受体识别，从而使逆转录病毒携带的遗传物质高效地进入靶细胞。,逆转录病毒结构基因,gag,、,env,和,pol,的缺失不影响其他部分的活性。,前病毒可以高效整合至靶细胞基因组中，有利于外源基因在靶细胞中的永久表达。,包装好的假病毒颗粒（携带目的基因的重组逆转录病毒载体）以芽生的方式分泌至辅助细胞培养的上清液中，易于分离制备。,逆转录病毒载体的主要,缺点,随机整合，有插入突变、激活癌基因的潜在危险；,逆转录病毒载体的容量较小，只能容纳,7 kb,以下的外源基因。,（,2,）,腺病毒,(adenovirus,，,AV),载体,腺病毒是一种大分子,(36 kb),双链无包膜,DNA,病毒。它通过受体介导的内吞作用进入细胞内，腺病毒基因组转移至细胞核内，保持在染色体外，不整合进入宿主细胞基因组中。,AV,两端各有一个反向重复序列目前作为基因治疗中所用的,AV,载体通常是一些复制缺陷病毒，其基因缺失位于基因组的,E1A-E1B,或,E3,区。,ITR,E2,E3,E4,E1,ITR,反向重复序列,包装信号,腺病毒的,优点,1.,基因导入效率高，对人类安全；,2.,宿主范围广；,3.,基因转导与细胞分裂无关；,4.,重组腺病毒可通过口服经肠道吸收、或喷雾吸入或气管内滴注；,5.,腺病毒载体容量较大，可插入,7.5 kb,外源基因；,腺病毒载体缺点,2.,宿主的免疫反应导致腺病毒载体表达短暂。,3.,有两个环节可能产生复制型腺病毒。,4.,靶向性差（特异性差）。,1.,不能整合到靶细胞的基因组,DNA,中。分裂增殖快的细胞，导入的重组病毒载体，随分裂而丢失的机会增多，表达时间相对较短。,(1),腺病毒产生过程中与,293,辅助细胞内,E1,区序列发生同源重组；,(2),腺病毒载体与被治疗的患者体内已感染的野生型腺病毒，甚至乳头瘤病毒、巨细胞病毒发生重组。,2.,非病毒载体介导的基因转移系统,（,1,）脂质体介导,脂质体介导的基因转移技术使用方便、成本低廉。,基本原理,:,利用阳离子脂质体单体与,DNA,混合后，可以自动形成包埋外源,DNA,的脂质体，然后与细胞一起孵育，即可通过细胞内吞作用将外源,DNA,（即目的基因）转移至细胞内，并进行表达。,脂质体介导的基因转移示意图,人工脂质体膜具有如下特点：,与体细胞相容，无毒性和免疫原性,可生物降解，不会在体内堆积,可制成球状,(0.0350,m,),，包容大小不同的生物活性分子,可带有不同的电荷,具有不同的膜脂流动性、稳定性、及温度敏感性，能适应不同的生理要求,缺点,：,脂质体介导进入靶细胞内，易被单核,-,吞噬细胞系统选择性吞噬、降解。,（,2,）基因直接注射技术,不需要进行基因工程的繁琐操作，直接将裸露基因,DNA,注入动物肌肉或某些器官组织内。重组,DNA,可贮存于,5%-30%,的蔗糖溶液中，也可用生理盐水或,PBS.,动物实验表明：接受注射外源,DNA,的小鼠能够按其基因编码合成相应的蛋白质，并能维持数月之久。,1.,将促进心脏血管生长的基因直接注入实验鼠的心脏，可使其心脏壁内毛细血管增加,30%,40%,；,2.,将胰岛素基因直接注入鼠骨骼肌细胞，能分泌糖尿病所缺少的胰岛素；,3.,肌内注射凝血因子,基因，可产生血友病所需的凝血因子等等。,基因直接注射法的优点,1.,制备具有调控部件的质粒,DNA,重组体的技术较容易；,2.,排除病毒载体可能潜在的致癌性或其他副作用；,3.,导入的基因不需整合即可表达，避免了逆转录病毒载体导入整合后，一旦发生副作用不易中止或逆转的缺点；,4.,基因直接注射法可反复使用，而病毒载体则可能诱导体内免疫应答，致使反复治疗效果下降。,（,3,）受体介导基因转移技术,将,DNA,与细胞或组织亲和性的配体偶联，可使,DNA,具有靶向性。这种偶联通常通过多聚阳离子（如多聚赖氨酸）来实现。多聚阳离子与配体共价连接后，又通过电荷相互作用与带负电荷的,DNA,结合，将,DNA,包围，只留下配体暴露于表面。这样形成的复合物可被带有特异性受体的靶细胞吞饮，从而将外源,DNA,导入靶细胞。,缺点：受体介导的,DNA,通常进入细胞溶酶体内被降解。,（,4,）磷酸钙沉淀法：,目的基因与磷酸钙等物质混合，形成沉淀的,DNA,微细颗粒，易通过细胞膜进入细胞内，并整合到受,体细胞基因组中，在适当条件下得以表达。,磷酸钙,+DNA ,混合微细颗粒,沉淀反应,2030min,细胞在沉淀物中暴露,524h,方法简单，但转化效率低。,（,5,）,电穿孔法（,electroporotion,）,将细胞置于高压脉冲电场中，通过电压使细胞产生可逆性的穿孔。周围基质中的,DNA,可渗进细胞，进而表达。,瞬间,细胞 细胞膜核膜通透性增加,高压脉冲,DNA,渗入细胞,（,6,）显微注射法,利用显微操作把目的基因直接注入靶细胞或细胞核,例转基因动物的制备,重组基因,DNA,微注射（体外）,小鼠受精卵,回植,假妊娠,仔 鼠,动物模型：转基因鼠,(,每个鼠细胞中都含有外源基因，按孟德尔方式遗传,),三、,Gene,治疗的现状与前景,体细胞,Gene,治疗临床实验已经开始，生殖细胞,Gene,治疗正在完善。进行基因治疗必须具备下列条件,：,具备下列条件,选择适当的疾病，清楚疾病的发病机理，,Gene,的结构和功能。,被纠正的基因已克隆，并清楚,Gene,表达与调控机制与条件。,选择适当的受体细胞并在体外有效表达。,安全有效的基因转移方法，以及供利用的动物模型。,基因治疗实例,1,、,复合免疫缺陷综合征的基因治疗,（人类,Gene,治疗成功例子）,ADA,缺乏症,-,致死性疾病，患者由于,腺苷酸脱氨酶（,ADA,）,缺乏。,ADA-Gene +vector,（逆转录病毒）,重组分子,患者,T Ly C IL-2,刺激,C,分裂,导入,细胞生长分裂,10,天,Gene,表达,回输患儿体内,12,月治疗一次,10,个月,患儿体内,ADA,水平达正常人的,25%,2,、乙型血友病,XR,，患者凝血因子,缺乏，,因子基因定位在,Xq26.3q27.2,。,临床表现，易出血，凝血时间长，轻伤、小手术后常出血不止。发病率为,1/30000,。,例如：我国学者薛京伦实施的,F,的基因治疗。,逆转录病毒载体,+FcDNA,重组体,5 LTR F neo SV PSO LTR 3,导入仓鼠细胞（,CHO,）,F,表达；,导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）,F,表达；,91,年，导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）回植病人皮下,F,基因表达，,F,基表达水平达正常人的,5%,。,是我国基因治疗成功的例子,。,3,、黑色素瘤的基因治疗,肿瘤,Gene,治疗,是人们十分关注的问题，进行了广泛的探索。研究发现,，肿瘤浸润淋巴细胞,TIL,，,它积聚肿瘤部位，并在该处持续存在而无副作用，利用此特点协助治疗肿瘤。,例：细胞因子基因治疗和肿瘤坏死因子基因治疗,IL-2 Gene,TNF-Gene,（白介,2,）,（肿瘤坏死因子）,逆转录病毒载体,导入,TIL,（体外培养的自体细胞）,回植患者体内,TIL,进入自体肿瘤部位，提高细胞因子杀伤肿瘤细胞 的作用。,三、基因干预,Gene Interference,主要干扰特定细胞的,mRNA,转录和翻译,基因干预的种类：,1.,反义,RNA(antisense RNA),2.,干扰,RNA(RNA interference),3.,核酶,(ribozyme),（一）反义,RNA,1.,反义,RNA,与基因表达调控,利用反义,RNA,对体外培养的细胞进行基因表达调控，通常采用的方法有两种：,（,1,）体外合成反义,RNA,，直接作用于培养细胞，细胞吸收,RNA,后，发挥作用。,缺点：,RNA,易降解,（,2,）构建能转录反义,RNA,的重组质粒，将质粒转入细胞，转录出反义,RNA,而发挥作用,缺点：细胞内转录的反义,RNA,量不易控制,反义基因治疗,DNA DNA,RNA RNA,反义,RNA,阻断表达,（二）干扰,RNA,（干涉,RNA,）,RNA,干扰（,RNA interference,，,RNAi,）是一种由双链,RNA,诱发的基因沉默现象。在此过程中，与双链,RNA,有同源序列的信使,RNA,（,mRNA,）被降解，从而抑制该基因的表达。,2,个步骤：,1,、小干扰性,RNA,（,siRNA,）：长双链,RNA,被细胞内的双链,RNA,特异性核酸酶Dicer,切成,21-23,个碱基对的短双链,RNA,。,2,、,siRNA,与细胞内的某些酶和蛋白质形成复合体，称为,RNA,诱导的沉默复合体。该复合体可识别与,siRNA,有同源序列的,mRNA,，并在特异的位点将该,mRNA,切断。,（三）核酶,(ribozyme),用于基因治疗,天然核酶多为单一的,RNA,分子，具有自我剪切作,用。但核酶也可以由两个,RNA,分子组成。,在基因治疗时，利用核酶分子结合到靶,RNA,分子中适当的邻位，形成锤头核酶结构，将靶,RNA,分子切断，通过破坏靶,RNA,分子达到治疗疾病（如清除病毒基因组,RNA,）的目的。,只要两个,RNA,分子通过互补序列相结合，形成锤头状的二级结构（,3,个螺旋区），并能组成核酶的核心序列（,13,个或,11,个保守核苷酸序列），就可在锤头右上方产生剪切反应。,锤头型核酶的二级结构和空间立体结构示意图,三个双螺旋区,13,个核苷酸残基保守序列,剪切反应在右上方,GUX,序列的,3,端自动发生,（,N,代表任意核苷酸，,H,代表,A,U,或,C,）,基因治疗新进展,1.,基因疗法彻愈小鼠转移性黑色素瘤,每日科学,2010,年,11,月,18,日报道,将一种强力抗癌基因植入罹患转移性,黑色素瘤的小鼠后，结果使小鼠产生新的免疫系统并彻底清除了其体内的肿瘤细胞。,相关研究论文将发表于,2010,年,12,月,临床研究杂志,Journal of Clinical Investigation,。,印地安那大学医学院的研究者运用经改造的慢病毒（,lentivirus,）将一种强有力的抗黑色素瘤,T,细胞受体基因导入小鼠的造血干细胞内。造血干细胞是能够产生所有血细胞与免疫系统细胞的骨髓细胞。,该,T,细胞基因可识别黑色素瘤体表上发现的一种特殊蛋白。研究者将该基因从一名黑色素瘤患者体内分离出后在实验室克隆，然后，将经过基因改造后的干细胞植入宿主体内。他们发现，这些干细胞彻底清除了小鼠体内的转移性黑色素瘤并终身受益。,自然,：地中海贫血症基因疗法试验初获成功,男性患者，从,3,年前开始接受基因疗法。当时他,18,岁，患有,型地中海贫血症。这种病由基因缺陷引起，患者自身不能生成正常的红细胞，因此需要通过输血来保持血液的供养等功能。这名患者从,3,岁开始输血，严重时每个月都要输血。,在基因疗法试验中，研究人员先利用患者自身的骨髓造血干细胞培养出包括红细胞在内的血液细胞，然后使用病毒作载体，将无缺陷的基因引入这些细胞中，再用化学手段去除多余细胞，只留下基因缺陷得到修正的红细胞，最后将这些红细胞移植回患者体内。,结果显示，患者自身生成正常红细胞的能力逐渐上升，在接受治疗一年后就不再需要输血了。现在该患者虽然仍有轻微贫血症状，但迄今一直不需要输血，并且已经有了一份全职的厨师工作，这说明基因疗法取得了初步成功。,全国第一个基因治疗药物,女，,49,岁。胃体癌晚期，胃窦增厚强化，与周围粘连，腹膜增厚，腹腔广泛转移，伴大量腹水。放,/,化疗失败，无法手术。治疗方案：腹腔灌注今又生,210,12,VP/2,次,/,周，共,12,周，同时灌注顺铂和,5-,氟尿嘧啶腹腔，后,4,周加,8,次全腹热疗。治疗后：第,3,周，腹水消失；第,8,周，胃窦、腹膜和网膜变薄，盆腔结节明显变小。后行手术切除残余胃肿瘤，术中探查全腹和盆腔未扪及肿瘤。术后病检胃肿瘤内未见癌细胞。,男，,67,岁，下唇鳞状细胞癌，,T4N2aM0,。治疗方案：今又生联合化疗。今又生,210,12,VP/,次，,10 ml,生理盐水稀释后，,20-30分钟内动脉介入药盒给药，,1,次,/5,天，共完成,10,次。化疗方案为：奥沙利铂,(200mg,第,1,天,)+,博莱霉素,(8mg,第,2,，,6,，,8,天,)+,甲氨喋呤,(30mg,第,1,，,8,天,),，完成,2,个疗程。治疗后,2,个月，肿瘤完全消退。,肺癌脑转移,患者，女性，,71,岁，,2008,年,3,月,13,日发现多发颅内转移瘤，经外院诊查后示已失去放化疗治疗机会，,KPS,评分,60,分，预计生存期在两个月以内。,14,日患者自觉头晕加重，遂就诊于我院肿瘤介入科，以颅内多发转移瘤收住院。入院后查胸,CT,发现左下肺占位伴纵隔淋巴结肿大，活检经病理组织学诊断为腺癌。在脱水降颅压基础上，采用,重组人,p53,腺病毒,联合介入化疗。每个月,1,次，,3,次为一疗程，每月复查头,MR,、胸,CT,、肿瘤标志物。,效 果,疗效：第一次治疗后,1,个月，复查头,MR,和胸,CT,示：颅内多发转移瘤部分消失、大部分肿瘤缩小,50%,以上；肺部肿瘤停止进展。,KPS,评分较治疗前增加,10,分。第二次治疗后,1,个月，复查头,MR,和胸,CT,示：颅内多发转移瘤大部分消失、部分肿瘤继续缩小，未见新发病灶；肺部肿瘤停止进展。,KPS,评分较治疗前增加,10,分。随访,3,个月，无复征象。见下图。治疗过程中癌胚抗原变化（,CEA)3,月,24,日,20.20 ng/ml 4,月,28,日,15.61ng/ml 5,月,24,日,7.52 ng/ml,。,