中药质量控制专题.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,LC/MS,主要应用,生物药学(生物大分子),药物研究：（获取分子量信息、,未知物的结构,鉴定、杂质和降解产物的确定、品质控制）,药代动力学研究（非临床、临床）,内 容,LC/MS,构造及工作原理,主意事项,应用实例,典型液相组成,LC,部分,？,更高,更快,更强,1290 UHPLC,System,UPLC,UFLC,Ultra Performance Liquid Chromatography,离子光学组件,质量分析器,检测器,样品引入,工作站,真空系统,质谱部分,LC,I.,离子源,:,使被分析样品的原子或分子离子化为带电粒子,(,离子,),的装置，并对离子进行加速使其进入分析器。,EI,(Electron Impact Ionization),：电子轰击电离,硬电离,。,CI,(Chemical Ionization),：化学电离,核心是质子转移。,MALDI,(Matrix Assisted Laser Desorption),：基质辅助激光解吸电离。通常用于飞行时间质谱和,FT-MS,，特别适合蛋白质，多肽等大分子,大气压电离,(API),：,软电离，,核心是电子的转移,液质的离子源：,电喷雾电离，,ESI(Electrospray,Ionization):,适,宜极性分子的分析，能分析小分子及大分子。,大气压化学电离，,APCI,(Atmospheric Pressure Chemical Ionization):,更适宜做弱极性小分子。,大气压光喷雾电离，,APPI,(Atmospheric Pressure PhotoSpray Ionization):,同上，更适宜做非极性分子,API,源：细分为如下,3,类,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,加热干燥氮气 反吹气,绝缘毛细管入口,喷雾器与毛细管入口成,90,角,流动相喷雾,离子,-5,000 V,Agilent,直角喷雾,API,技术,喷雾气,离子光学组件,质量分析器,检测器,前级真空,高真空,310,5,II.,真空系统,III.,离子光学组件,毛细管,Skimmer,及八级杆,Les1,、,Les2,让所有离子通过，顺利进入质量分析器,保证传输的效率,保证离子传输中不发生变化,Octopole 1,Rough Pump,Turbo,Turbo,Quad Mass Filter(Q1),Lens 1 and 2,Capillary,Vacuum wall,IV.,质量分析器,根据气态离子的质荷比测定,四极质谱仪,(Q).,飞行时间质谱仪,(TOF).,离子阱质谱仪（,TRAP,）,付利叶变换,-,离子回旋共振质谱仪,(FT-ICRMS).,四极,+TOF,（,Q-TOF,）,串列式多级质谱仪,三重四极杆（,QQQ,）,(MS/MS)TOF+TOF,高选择性，最高定量灵敏度,复杂基质中痕量组分定量分析的首选；多种扫描模式的组合运用可提供结构信息,Q-TOF,Sensitivity,Selectivity,API,Source,Detector,Energy,QQQ:Triple Quadrupole,高灵敏度,(,适合生物样品中痕量化合物的定量分析）,高选择性,消除干扰,：定量分析结果更准确,多组分分析,结构定性分析：中性丢失和母离子扫描,快速,实现高通量分析,串联四极杆液质在分析中的优势,Agilent QQQ,QQQ,不同的扫描方式：,Q1 Full Scan(Start Stop)(Q1,全扫描,),Q1,always,used as single MS analyzer,Used primarily for,ident.of precursor ion,SIM,-Selected Ion Monitoring(,选择离子监测,),Used to optimize analyzer for specific ions,SIM used for quantitative analyses,Q1 SIM used to“optimize”precursor ion,Maximize signal in preparation for MS/MS,Product Ion Scan(,子离子扫描,),After identification,the precursor ion is sent into the collision cell and fragmented by CID,Q1 is,fixed,Q3 sweeps a given mass range,Used for structural elucidation,First step to developing quantitative method,m,3scanned,m,1,+,fixed,Example of Product Ion Spectrum,Ephedrine,MW=165,Precursor Ion Scan(,母离子扫描,),Q1 sweeps a given mass range,Q3 is,fixed,Used to determine the“origin”of particular product ion(s)created in the collision cell,Frequently used for drug metabolite identification(common product ion observed in the metabolites),m,3,+,fixed,m,1,+,scanned,Example of Precursor Ion Spectrum,600,900,1200,1500,1800,m/z,amu,5,8,7,.,5,7,4,5,.,6,8,9,5,.,6,8,0,2,.,4,6,3,3,.,4,520.3,1105.0,1704.4,600,900,1200,1500,1800,m/z,amu,3.0e6,6.0e6,9.0e6,1.2e7,Intensity,cps,6,0,8,.,3,520.3,802.4,600,900,1200,1500,1800,m/z,amu,3.0e4,6.0e4,9.0e4,Intensity,cps,Precursors of 86(Ile/Leu),Q1 Scan,745.6,Neutral Loss Scan(,中性丢失扫描,),Q1&Q3 both scan a given mass range but with a constant,difference,between ranges scanned,Spectrum indicates which ions lose a,neutral species,equal to Q1-Q3,difference,Complement to Precursor Ion Scan,Neutral“gain”indicates a multiply charged precursor ion was fragmented,m,m,1,+,scanned,m,3,+,scanned,When an Ion fragments the following formulas apply:,Positive mode,(Parent),+,A,+,+B,Neutral,Negative mode,(Parent),-,A,-,+B,Neutral,Multiple Reaction Monitoring(MRM),Precursor ion,fixed,Product ion,fixed,Fragmentation,(CID),可以同时检测多个离子对,提高子离子的响应,主要用于定量,灵敏度、选择性提高,多反应监测（,MRM,）,170,210,250,290,210,222,268,280,165,Quad Mass Filter(Q3),Quad Mass Filter(Q1),Collision Cell,全扫描质谱，分子离子峰和背景离子,(ESI),Q1,只选择母离子,m/z 210,190,210,210,在碰撞池中，使,m/z 210,产生碎片,150,170,190,210,210,158,191,Q3,只监测,m/z 210,产生的特征碎片离子，,158,和,191,用于定量分子和确认,160,158,190,191,没有背景离子干扰,VI.,检测器,带对数放大信号电路的离轴双打拿极设计，将离子信号转为电子信号,可以获得更高的信号增益,实现正负极性的快速切换,提高检测器的寿命和降低噪音,离轴设计可防止中性物质进入电子倍增器,离子信号转化为电子信号,信号的放大（电子倍增管）,电子信号转化为数字响应,VII.,工作站,MassHunter,软件,在线质谱图,方法编辑器,序列编辑器,仪器状态,极性切换,离子化模式,扫描模式选择,内 容,LC/MS,构造及工作原理,注意事项,应用实例,注意事项,流动相,：,（,1,）,不挥发性的盐或酸,（,2,）正负模式选择于流动相之间的关系,离子源的选择：极性,?,HPLC,图谱不能与质谱离子流完全对应！,QQQ,局限性,:,(1),异构体，立体化学方面区分能力差。,(2),重复性稍差，要严格控制操作条件。,(3),有离子源产生的记忆效应，污染等问题。,(4),价格稍显昂贵，操作有点复杂。,内 容,LC/MS,构造及工作原理,注意事项,应用实例,具有拒食和胃毒作用的活性物质,肝毒性,药典,Scan,广东产千里光药材中总生物碱的总离子流图,广东产千里光药材中总生物碱的总离子流图,SIM,PI,野百合碱 阿多尼弗林碱 去氢克氏千里光碱 克氏千里光碱,建立定量方法的一般步骤,前提：,待测化合物的信息：结构、分子量等,待测化合物的对照品,待测样品的特点,流动相,分离条件,建立定量方法的一般步骤,在单个样品模式，用质谱,2,扫描注射样品,在定性软件中，为每个目标化合物选择母离子。,建立一个流动注射分析程序，找出无,CID,时母离子传输的最终碰撞,解离电压,。在定性软件中选择。,找到最佳的,碰撞能量,，得到期待的用于定量的子离子，包括一个辅助定量离子。一个丰富的质谱图应该有至少一个特征离子,和一个辅助定量离子,建立一个分时间段的方法，使每个目,标化合物都可以得到一个,MRM quan,和最少一个辅助定量离子，最好,有两个。,sulfamethazine,Full scan,sulfamethazine,SIM,sulfamethazine,PI,Fragmentor,选择,40V 80V 120V 160V 200V,80V 100V 110V 120V,10V 20V 30V 40V 50V,Collision Energy,选择,专属性,线性及线性范围,精密度及准确度,提取率及基质效应,谢谢,