志贺氏菌检测技术.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,志贺氏菌检测技术,志贺氏菌是引起人类细菌性痢疾的病原,菌，仅引起人类的肠道内感染，对其他动物,均无致病力，可随患者的粪便污染外环境。,细菌性痢疾至今仍然是我国城乡最为常,见的肠道传染病,病人和带菌者是本病的传染,源，尤以非典型病例、慢性患者和带菌者在,流行病学上的意义更为重要。,主要内容,生物学性状,标本采集和运送,分离培养,初步鉴定,血清凝集,系统生化鉴定,生物学性状,形态与染色,为革兰氏阴性杆菌，长约2-3 m,宽0.5-0.7 m。不形成芽胞，无荚膜，无鞭毛，有菌毛。,培养特性,需氧或兼性厌氧营养要求不高，能在普通培养基上生长，最适温度为37，最适pH为6.4-7.8。37培养18-24小时后菌落呈圆形、微凸、光滑湿润、无色、半透明、边缘整齐，直径约2nm，宋内氏菌菌落一般较大，较不透明，并常出现扁平的粗糙型菌落。在液体培养基中呈均匀浑浊生长，无菌膜形成。,生化特性,能分解葡萄糖，产酸不产气（福氏6型和鲍氏13、14型的部分菌株会产生少量气体）。大多不发酵乳糖，仅宋内氏菌迟缓发酵乳糖。靛基质产生不定，甲基红阳性，氧化酶、VP试验均阴性，不产生H,2,S和尿素酶。根据生化反应可进行初步分类。,常以甘露醇和乳糖发酵特性来区分志贺菌的生化群,常以甘露醇和乳糖发酵特性来区分志贺菌的生化群A群：痢疾志贺菌，甘露醇、乳糖、棉子糖及鸟氨,酸脱羧酶均阴性。,B群：福氏志贺菌，棉子糖和甘露醇阳性（其 中4、,6型常见甘露醇阴性的变种），乳糖及鸟氨酸,脱羧酶阴性。,C群：鲍氏志贺菌，甘露醇阳性，乳糖、棉子糖及,鸟氨酸脱羧酶（除13型）均阴性。,D群：宋内氏菌，甘露醇和乳糖（迟缓）阳性，鸟,氨酸脱羧酶阳性。,志贺菌属抗原分类,菌名,血清分类,生化特性,群,型,亚型,甘露醇,鸟氨酸,脱羧酶,志贺菌,A,112,福氏菌,B,1,6,X、y变种,1a,1b,1c,2a,2b,3a,3b,3c,4,4a,4b,4c,5a,5b,+,鲍氏菌,C,118,+,宋内菌,D,1,+,+,标本采集,粪便标本,应尽量在抗生素应用前采集，采集新鲜粪便标本中的脓血、黏液部分1g5g（水样便1ml5ml）。,肛拭子或采便管,将标本立即保存于Cary-Blair运送培养基内送检,水标本,直接增菌法:直接采集可疑水样450ml，加入50ml 10倍浓缩的GN增菌肉汤，37增菌6,8h。,过滤集菌法：采集水样5001000ml用无菌滤膜（0.450.65,m）过滤，取下菌膜直接贴种于选择性平板培养过夜或无菌条件下剪碎后放入9mlGN,增菌肉汤,，,37增菌68h后转种平板。,吸附沉淀法,食品,固体：于广口瓶或无菌塑料袋中，实验室无菌称取,25g,样品，剪碎后加入,225ml GN,增菌肉汤中，,37,增菌,6,8h,。,液体：采取食品,50,100ml,，实验室无菌称（量）取,25g,（,ml,）样品加入,225ml GN,增菌肉汤中，,37,增菌,6,8h,。,乳粉类应以无菌操作取,25g,放入装有,225ml,灭菌盐水的三角瓶中，摇匀，,37,增菌,6,8h,。,血液:,当怀疑为菌血症时，静脉采集510ml血液，按1:10比例加入血增菌培养液中进行培养。,其他标本:,疑似痢疾爆发疫情病原学检测时,外环境样本可采集患者的污染衣物、剩饭菜、可疑食品、抹布、污水、井水等，采集的标本应立即按1：10的比例接种GN增菌肉汤，置37增菌68h。,媒介昆虫如苍蝇类，用消毒蝇拍拍打1015只/份,装入9mlGN增菌肉汤中，尽快送实验室，置37增菌46h。,标本运送,现场采集的粪便标本若在2小时内不能送达实验室，应置冷藏包中送检（内置冰排，可保存13天）。,水、食品等外环境标本若在2小时内不能送达实验室，应保存于带有冰排的采样箱内送检。,分离培养,直接分离,采用接种环多点蘸取粪便标本中可疑部分或用采样拭子直接涂种，接种于麦康凯（MAC）及海克顿（HE）肠道琼脂平板各一块。也可选XLD、SS、DHL或DCA，,但应慎用SS琼脂，其可抑制型志贺菌生长,。分离平板置37培养1824h。,增菌分离,水、食品及其他标本于GN增菌肉汤中37增菌68h后，直接划线分离MAC及HE琼脂平板各一块，37培养1824h。,在HE上为透明、白色或浅绿色菌落。,在MAC上为无色（乳糖阴性），圆形，半透明，湿润、光滑、突起，大小为12mm的菌落。,志贺氏菌在不同平板上的菌落形态,初步生化反应,从37培养1624h的分离培养基上，观察挑选可疑菌落，接种TSI或KAI培养基，先穿刺后划线，做好标记，取出后直接接种动力-靛基质-尿素（MIU）培养基，放37培养16h以上，观察结果。,志贺菌属在TSI上的生化反应为：斜面红色，底层产酸黄色，不产气。,在KAI上斜面红色，底层产酸黄色，不产气或有少量气体，不产生H,2,S。,MIU：无动力、尿素酶阴性、靛基质阴性或阳性。,下列培养物可排除志贺菌：,KIA斜面和底部均呈黄色或红色,有动力者,产硫化氢者,尿素酶阳性者,产生气体者,（福氏志贺菌6型有时产少量气体）,在1848小时发酵乳糖的培养物（宋内菌35天迟缓分解乳糖）,血清分型,系统生化鉴定,谢 谢,