神经发生的原理、过程及相关标记物.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,神经发生的,原理,、过程,及相关标记,物,报告人：黄清健,1,神经再生,的,原理,神经发生的过程,常用标记物,2,内容,神经干细胞,(,neuralstemcell,),是一类具有分裂潜能和自更新能力的,母细胞,具有,增殖、分化和替代受损神经元促进神经功能恢复的,作用,。,3,神经再生的,原理,根据分化潜能及产生子细胞种类,不同：,神经管,上皮细胞（分化能力最强存在于胚胎时期，可产生神经细胞和成胶质细胞）,神经,母细胞（成体中主要存在的神经干细胞，可以产生神经前体细胞、神经元、各类神经胶质细胞,）,神经前体细胞（祖细胞）（各类神经细胞的前体细胞）,4,分类,哺乳,动物,包括人类的大脑神经干细胞主要存在,于,：,1.,海马齿状回颗粒下区,（,subgranular,zone,，,SGZ,）,2.,侧脑室室下区（,subventricular,zone,，,SVZ,）,5,大脑神经,干细胞,主要分布区域,SGZ,SVZ,6,成体大脑中新生神经元,的,三个,成熟,过程,祖细胞,海马齿状回颗粒细胞层,齿状回,颗粒细胞,祖细胞,嘴侧迁移,流,（,RMS,）,嗅球,嗅球层,颗粒细胞层,嗅球,颗粒细胞,嗅球,球旁细胞,迁移,迁移,迁移,迁移,迁移,分化,分化,分化,7,齿状回颗粒细胞,嗅球颗粒细胞,嗅球球旁细胞,8,神经发生的过程,（,SGZ,）,增殖阶段,9,影响齿状回,颗粒细胞成熟的因素,外在因素,内在因素,1.,神经递质：谷氨酸，,5-HT,多巴胺（,DA,）,去甲肾上腺素（,NA,）,内源性大麻素，乙酰胆碱,（,ACh,）,NO,等,2.,激素：甲状腺激素,肾上腺,类固醇，雌激素,孕烯醇酮,垂体腺苷酸环化酶激活,肽（,PACAP,）等,3.,生长因子：表皮生长因子（,EGF,）,肝素结合表皮生长因子（,HB-EGF,）,血管内皮生长因子（,VEGF,）,成纤维细胞生长因子（,FGF,）,睫状,神经营养因子（,CNTF,）,胰岛素样生长因子（,IGF1,）,脑源性神经营养因子（,BDNF,）等,4.,环境：跑步、孤立、压力、睡眠剥夺等,1.,神经源性因素,：,PAX6,、,WNT,、,MASH1,3.,干细胞的自我更新：,TXL,、,SHH,2.Gliogenic,因素：,Notch,10,神经发生的过程（,SVZ,）,11,影响嗅球颗粒细胞和球旁细胞成熟,的因素,增殖阶段,外在因素,内在因素,1.,神经递质：,5-HT,、,DA,、,Ach,、,NO,2.,激素：甲状腺计算、催乳素、孕烯醇酮、,PACAP,3.,生长因子：,EGF,、,HB-EGF,、,VEGF,、,FGF,、,CNTF,、,BDNF,、转化生长因子,（,TGF,）,1.,神经源性因素,：,PAX6,、,WNT,3.,干细胞的自我更新：,TXL,、,SHH,、,Notch,、,BMI1,2.Gliogenic,因素：,Notch,、,OLIG2,12,迁移,阶段,横向迁移,径向迁移因素：,Reelin,tenasin,-R,PK2,1.,内部因素：伽马氨基丁酸（,GABA,）、整联蛋白（,Integrins,）,2.,外在微环境因素：,PSA-NCAM,、,Slit-,Robo,、,ephrins,、,neuroregulins,神经递质类：,谷氨酸,：成熟神经元中最重要的兴奋性神经递质，可以上调,细胞增殖,GABA,：在未成熟细胞中发挥兴奋性，在成熟神经元中表现抑制性,13,部分调控因素的功能,生长因子类,：,EGF,：促进神经干细胞的存活，保持长久的增殖分化能力,BDNF,：在神经元的存活、分化、生长发育起重要作用,并能防止神经元受损伤死亡、改善神经元的病理状态、促进受损伤神经元再生及分化等生物效应,14,激素类：,雌激素：,可以调控海马,神经再生，雌激素水平升高时可以提高细胞的增殖水平，雌激素水平降低时，细胞增殖水平降低,肾上腺激素：降低神经再生,15,神经源性因素：,Wnt,蛋白,：,Wnt,蛋白是一类富含,L,半胱氨酸、,相对分子,质量大小约,39 000,46 000,的糖蛋白,与特异受体结合,触发,几种信号途径,括,连环蛋白依赖信号,途径，在诱导,神经特异,性分化中起重要作用,16,Gliogenic,因素：,Notch,：,Notch,基因编码一种跨膜蛋白,与邻近,细胞表面,的配体结合后,胞内部分被切割,转运至细胞核,与,Notch,下游分子结合传递,Notch,信号,。,过度表达活化的,Notch1,可以增加海马细胞的增殖，并向胶质细胞分化，而阻断,Notch,信号导致细胞增殖降低和新生细胞向神经元分化,17,18,局灶性脑缺血,后,神经元发生路径,SVZ,脑,尾状核,（,Cpu,）,RMS,胼胝体,（,CC,）,Ctx,（皮层）,OB,标记物,定位,功能,相关神经元,唾液酸神经细胞黏附分子（,PSA-NCAM,）,细胞膜,促进神经干细胞存活、分化、迁移,新生非成熟细胞,双皮质素,/,微管相关蛋白（,DCX,）,胞质和突起,神经元迁移分化所必需,蛋白,神经元前体细胞和未成熟的神经元,CRMP4/TUC-4,（,TOAD/,Ulip,/CRMP family protein 4,）,胞质,新生,神经元的特异标记,新生神经元,TuJ1/,III-tubulin/tubulin,-4,胞质,是微管蛋白,tubulin,家族的一种微管成分,，,参与,神经元细胞类型特异性分化的微管蛋白,新生神经元,19,常用标记物,标记物,定位,功能,相关神经元,5-,溴脱氧尿嘧啶核苷（,BrdU,）,细胞核,是一种,胸腺嘧啶类似物,，,可在,DNA,合成期（,S,期）代替胸腺嘧啶,MCM2,细胞核,染色体维持蛋白，,DNA,复制相关蛋白,巢蛋白,（,nestin,）,胞质,中间丝类型的蛋白，能够特异性的表达在神经上皮干细胞上一种分子标记物,神经,干,细胞,胶质纤维酸性蛋白（,GFAP,）,胞质,分布于中枢神经系统的星形胶质细胞，参与细胞骨架的构成并维持其张力强度,星形胶质细胞,20,常用,标记物,标记物,定位,功能,相关神经元,增殖相关抗原,（,Ki-67,）,细胞核,有丝分裂标记物,，,细胞增殖相关蛋白,，,存在于所有细胞周期,（除了,G0,）,PCNA,细胞核,有丝分裂标记物,caspase-3,细胞核,细胞凋亡相关蛋白,Hu,细胞核,RNA,结合蛋白,中枢及外周神经系统的所有神经元,DAPI,细胞核,核酸染料（蓝色）,（,神经元特异性核蛋白,）,NeuN,细胞核,神经元特异核蛋白,大多数分化后神经元,ENCAM,21,常用,标记物,DAB,染色：,优点：观察方便，观察过程中不怕淬灭,缺点：分别率低，一般不能共标记（标记物需定位在细胞不同位置）,荧光染色：,优点：允许相同位置标记物的共标记，成像漂亮,缺点：不是永久标记（长时间观看荧光会褪色）,22,DAB,染色与荧光染色的优缺点,23,谢谢,