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流式的原理及应用.ppt

1、Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,流式的原理及应用,杜欣康,BD,生物科学,流式细胞仪技术支持,电话:,13915996251,邮箱:,Jack_duBD.com,什么是流式细胞术,什么是流式细胞术,流式细胞术,(,Flow Cytometry,)是指利用流式细胞仪,通过检测细胞上,/,内特异标记的荧光信号,从而测定细胞的多种生化特性(表面受体、抗原、离子、,DNA/RNA,等的表达)的方法。,

2、流式细胞术的特点,流式细胞术的特点,分析对象:,任何直径,50,m,的颗粒,一般为单细胞悬液,流式细胞术的特点,分析对象:,任何直径,50,m,的颗粒,一般为单细胞悬液,分析速度:,快速,,Calibur 2,000,事件,/,秒,流式细胞术的特点,分析对象:,任何直径,50,m,的颗粒,一般为单细胞悬液,分析速度:,快速,,Calibur 2,000,事件,/,秒,检测参数:,多个(两个散射光,多个荧光参数),流式细胞术的特点,分析对象:,任何直径,50,m,的颗粒,一般为单细胞悬液,分析速度:,快速,,Calibur 2,000,事件,/,秒,检测参数:,多个(两个散射光,多个荧光参数),

3、检测结果:,精度高,准确性好,具有统计学意义,BD,公司的分析型流式细胞仪,BD,公司的分选型流式细胞仪,流式细胞仪的结构,流式细胞仪的结构,液流系统,收集细胞并使之与激光正交,流式细胞仪的结构,液流系统,收集细胞并使之与激光正交,光学系统,激发和收集光信号,流式细胞仪的结构,液流系统,收集细胞并使之与激光正交,光学系统,激发和收集光信号,电子系统,把光信号按比例转化成电子信号,流式细胞仪的结构,液流系统,废液桶,鞘液桶,上样针,流动室,激光正交,流式细胞仪的结构,液流,样本,样本,鞘液,鞘液,鞘液,鞘液,红激光,蓝激光,紫激光,低流速,高流速,流式细胞仪的结构,流速:,低速,12,l/min

4、中速,35,l/min,高速,60,l/min,流式细胞仪的结构,光学系统,流式细胞仪的结构,长通,接收器,带通,长通,+,带通,流式细胞仪的结构,流式细胞仪的结构,LaserWavelengthMin.PowerCommonly Used Fluorochromes,(nm)(mW)or Dyes,Blue488 nm 13FITC,PerCP,PerCP-Cy5.5,Red 633 nm 11APC,APC-Cy7,APC-H7,Violet405 nm 30Pacific Blue,DAPI,BD Horizon V450 and V500,Near UV375 nm 7Hoechst

5、 Red,Hoechst Blue,PI,DAPI,Yellow-Green561 nm30PE,PE-Cy5.5,PE-Cy5,PE-Texas Red,mCherry,PE-Cy7,PI,Blue-Violet445 nm20CFP,AmCyan fluorescent protein,流式细胞仪的结构,流式细胞仪的结构,电子系统,光子,接收器,光信号转化为电信号,电信号处理,电脑,流式细胞仪的结构,电子系统,流式细胞仪的结构,高(,H,),=,最大荧光强度,宽(,W,),=,时间,面积(,A,),=,总荧光强度,流式细胞仪的结构,流式细胞仪的结构,流式细胞仪的结构,流式细胞仪的结构,流式

6、细胞仪的结构,流式细胞仪操作的基本流程,流式细胞仪操作的基本流程,开机和液流启动,质控,样本收集,数据分析,样本收集,数据分析,清洗和关机,流式分析样本的制备,流式分析样本的制备,流式分析样本的制备,单细胞悬液的制备,目的分子的标记,样本过滤等待上机,流式分析样本的制备,流式分析样本的制备,流式分析样本的制备,流式分析样本的制备,流式分析样本的制备,流式分析样本的制备,流式分析样本的制备,流式常见的实验,流式常见的实验,荧光免疫,直接染色,vs,间接染色,强荧光配弱表达,强表达配弱荧光,染料数量不大时可以避免使用临近通道,通道间的溢漏(补偿),流式常见的实验,荧光免疫,强荧光配弱表达,强表达配

7、弱荧光,流式常见的实验,荧光免疫,什么是溢光?为什么要补偿?,流式常见的实验,流式常见的实验,荧光免疫,为什么要做同型对照和单阳管?,流式常见的实验,荧光免疫(实例),CD4 FITC,CD8 PE,CD3 APC,染色,同型对照:,PB 100,L+Isotope FITC 20,L+Isotope PE 20,L+Isotope APC 5,L,单阳管:,PB 100,L+CD4 FITC 20,L+Isotope PE 20,L+Isotope APC 5,L,单阳管:,PB 100,L+Isotope FITC 20,L+CD8 PE 20,L+Isotope APC 5,L,单阳管:,PB 100,L+Isotope FITC 20,L+Isotope PE 20,L+CD3 APC 5,L,样品管:,PB 100,L+CD4 FITC 20,L+CD8 PE 20,L+CD3 APC 5,L,流式常见的实验,流式常见的实验,细胞周期,流式常见的实验,细胞周期,流式常见的实验,细胞凋亡,流式常见的实验,细胞凋亡,

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