实验血清、红细胞制备.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验血清、红细胞制备,实验目的,1,、学习实验动物不同部位的取无菌采血方法；,2,、学习动物血清、红细胞的制备；,3,、观察兔、豚鼠的免疫器官,。,实验原理,免疫系统由免疫器官、免疫组织、免疫细胞和免疫分子组成。,免疫细胞,1.,固有免疫的组成细胞：吞噬细胞、淋巴器官、树突状细胞、,NK,细胞、,NKT,细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞；,2.,适应性免疫应答细胞：,T,细胞、,B,细胞,免疫分子,1.,膜型分子：,TCR,、,BCR,、,CD,分子、粘附分子、,MHC,分子、细胞因子受体。,2.,分泌型分子：免疫球蛋白、补体、细胞因子。,实验原理,血液是一种结缔组织（细胞间质）。血液系统是各种重要的免疫细胞、免疫分子的载体，也是各种免疫事件发生的场所。,组成：,1,、血浆,血浆蛋白（白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原）,脂蛋白、无机盐、氧等成分,激素、酶、抗体,细胞代谢产物等。,2,、血细胞,红血球、白血球（有粒白细胞：中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞和无粒白细胞：单核细胞和淋巴细胞,),血小板,实验原理,实验研究中，要采集实验动物的血液进行检查或分析，故必须掌握血液的正确采集、分离和保存的操作技术。,采血方法的选择，主要决定于实验的目的所需血量以及动物种类。,用血量较少可刺破组织取毛细血管的血,当需血量较多时可作静脉采血,（原则：静脉采血时，若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉,),实验原理,现将采用血方法按动物和部位分别加以介绍。,小鼠和大鼠采血方法：割尾采血法、尾静脉穿刺采血、眼眶后静脉丛采血、摘眼球法、断头采血、颈（股）动静脉采血,豚鼠采血法：耳缘剪口采血、心脏采血、股动脉采血、背中足静脉取血,兔采血法：耳静脉采血、耳中央动脉采血、心脏取血、后肢胫部皮下静脉取血、股动静脉、颈动静脉取血、,鸡采血法：翼根静脉采血、心脏采血、颈静脉采血,实验原理,家兔采血方法,（,1,）耳缘静脉采血：,家兔固定，将耳缘静脉皮肤上的毛拔去或剪去，,75%,酒精消毒，用左手食指和中指夹住静脉近心端，以使其血管怒张拇指和小指夹住耳缘部分，以左手无名指和小指放在耳下作垫，待静脉充盈后，右手持注射器使针头由静脉末端刺入，顺血管方向向心端刺约,1-1.5cm,，放松左手拇指和食指对血管的压迫，右手缓慢抽吸注射器，若注射阻力较大，说明针头没有刺入静脉，应调整针头或重新穿刺；也可以刀片在血管上切一小口，让血自然流出，滴入盛器内，采血完毕，用干棉球按压止血。,大家应该也有点累了，稍作休息,大家有疑问的，可以询问和交流,8,（,2,）兔心脏穿刺取血：,家兔背位固定，在左胸第,2,4,肋间剪毛一块，用,75%,酒精和碘伏消毒。然后用,5,10ml,注射器，在胸骨左缘,3-4,肋间心尖搏动最明显处作垂直穿刺。,注意事项有：,动作宜迅速，以缩短在心脏内的留针时间和防止血液凝固；,如针头已进入心脏但抽不出血时，应将针头稍微后退一点。,在胸腔内针头不应左右摆动以防止伤及心，肺、,实验原理,豚鼠采血方法,（,1,）背中足静脉取血,固定动物，将动物脚背面用酒精消毒，找出背中足静脉后，以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手拿的注射针刺入静脉。采血后，用纱布或脱脂棉压迫止血。反复采血时，两后肢交替使用。2,）心脏采血,通常在胸骨左缘的正中，选心跳最强的部位作穿刺。针头宜稍细长些，以免发生手术后穿刺孔出血，其操作手法详见兔心脏采血。,实验动物的采血量,血清的制备,血清的制备：不加抗凝剂,无菌静脉采血,2ml,，,37,自然凝固，待血清开始出现后，放冰箱内,12,小时或,24,小时，离心分离血清（,3000rpm,，,5-10min,），得到的上清液即为血清，小心将上清吸出（注意切勿吸出细胞成分）。,血浆的制备：需加抗凝剂（抗凝剂：血液,=1：9,）,无菌静脉采血,2ml,（注射器用抗凝剂润洗），,将血液,加入到有抗凝剂的离心管中颠倒混匀，离心（,3000rpm,，,5-10min,）后所得的上清液即为血浆。,注意：血清的保存可以在每,50ml,血清中加,1,硫柳汞水溶液,1ml,防腐。,红细胞及悬液制备,标准红细胞的制备：,取全血,1ml,，加等渗盐水,2,3ml,，充分摇匀离心沉淀，弃去上清液，然后再加生理盐水,2,3ml,按上述方法洗涤，共三次，离心去上清，余下的为压积红细胞。,红细胞悬液的制备：,2,红细胞悬液：压积红细胞,2,滴,+,新鲜等渗盐水,4ml,5,红细胞悬液：压积红细胞,5,滴,+,新鲜等渗盐水,4ml,10,红细胞悬液：压积红细胞,5,滴,+,新鲜等渗盐水,2ml,注意：标准红细胞盐水悬液临用前制备，最多存放,3,天，用,柠檬酸葡萄糖溶液（ACD）,溶液保存最长可保存,1,周,实验器材,实验动物：豚鼠、兔,实验试剂：血液抗凝剂（,1:500u,肝素钠注射液）,生理盐水,实验器材：,5ml,注射器、,一次性离心管（,5,、,10,、,15ml,规格）、,普通吸管、尖吸管、,1ml,刻度吸管,75%,酒精棉球,水平离心机,实验步骤,1.用75酒精棉球消毒采血部位皮肤,2.用,5ml,注射器分别抽取豚鼠或兔静脉血2,ml,豚鼠采血法：背中足静脉取血,心脏采血、,兔采血法：耳缘静脉采血,心脏采血,3.制备血清、红细胞（如上述流程）,注意事项：,1,、采血部位需要进行消毒,2,、采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥；,3,、注意血清与血浆制备的区别：抗凝剂的使用,4,、不同规格离心管的使用,