色谱柱的日常维护.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,色谱柱的日常维护PPT讲座,液相色谱柱的保养,柱的稳定性与固定相类型及使用情况有关。如流动相中盐类的存在会使键合相柱的性能衰退；以SiO,2,为基质的固定相，过程随温度和pH(8)增加而加速。一根柱子使用是否得当，直接影响它的柱效和寿命。对于填装了粒度为10m以下的固定相的柱子，尤其如此。为了保持柱效、柱容量及渗透性，必须进行仔细地保养。是否会由于柱外效应，使分析柱的柱效明显下降？,液相色谱柱的保养,1柱易被极细的颗粒堵塞，因此必须将流动相仔细地蒸馏、过滤。在流动相贮槽与柱之间，使用0.5m孔径的过滤器。水往往是一个重要的污染源。在水溶液流动相(如缓冲液)中，细菌容易生长，可能堵塞筛板。防止细菌生长的办法是加入抑制剂，如0.01%NaNO,3,。显然，抑制剂不能干扰分离和测定。,液相色谱柱的保养,2在恒定压力下，发现流量减少，柱子可能部分堵塞。堵塞最容易发生在极窄的入口接头处以及入口、出口筛板处。堵塞后需要仔细拆洗，清除堵塞物，但必须防止较强的机械震动，防止用热手接触柱子，以扰动柱内的固定相层，使柱效发生变化。,液相色谱柱的保养,3柱子的实际操作压力应低于填装时的最高压力，最好在最高压力的一半以下。实际操作压力过高，易使入口的固定相层下沉，形成一个空穴。若空穴形成，应重新装柱。在空穴中加入新的匀浆或玻璃微珠，也无法恢复到原来的柱效。,4应该用进样阀，而不用注射器进样，以防止注射隔膜碎屑集聚在柱入口。,液相色谱柱的保养,5要防止反冲(流动相逆向流动)，否则使固定相层位移，柱效下降。,6柱子两端用金属螺帽封闭，保存在纯净的有机溶剂中。应该将柱子保存在以下pH范围内的水溶液流动相中：2pH8.5。为了长期保存，最好用纯有机溶剂(如甲醇)清洗柱子。,7一定要防止柱子干涸，特别是硬胶柱。,液相色谱柱的保养,8使用卫柱(Guard Column,亦称预柱)。连续注射含有强滞留(不被洗脱)组分的样品，将使柱效下降，保留值改变，选择性变坏，柱寿命缩短。为了延长柱寿命，在进样阀和分析柱之间加上卫柱。,卫柱较短(510cm)，固定相与分析柱类似。其作用是吸着强滞留的组分，防止对分析柱的污染，保持分析柱性能稳定。实验表明，只要卫柱与高效、小粒度分析柱联用，除了使k为零的组分的塔板数大大减少外，对k值较大的组分，其柱效下降很少。,色谱柱是否与进样口和检测器正确地连接,进样口是否漏,更换进样垫,检查进样衬管是否损坏,柱是否与进样口连接？,?,是否使用自动进样器,检查进样针,更换进样针推杆,样品瓶中是否有足够的样品，以便进样针能吸到样品？,若使用冷柱头进样，检查,TEFLON,垫是否有漏,点火了吗？,(FID),柱中是否有载气,气相色谱柱的故障诊断与排除,无峰或峰很小,8,火点着了吗,?,用一个玻璃片放在,FID,出口,-,有水蒸汽冷凝,检测仪器的输出值,-,数值是否大于,0.0,？,应大约为,16.2,pico,amps,柱中是否有载气,?,拆开柱到检测器一端,用流量计（或皂沫流量计）测量,有流量,寻找色谱峰的方法,(多数的情况是有漏或堵塞 ),9,综合,已点火,柱出口有流量,检测器喷嘴可能被堵塞,检查FID组件（注意请记录零件的安装顺序）,检查喷嘴本身,-,被石墨碎屑堵塞（拆下柱子时，石墨垫的外型有变化）,用旧的进样针清除堵塞物,重新安装,FID,组件,再次进样,寻找色谱峰的方法,(多数的情况是有漏或堵塞 ),10,基线不好的问题,(检查气源的质量),使用气体过滤器,11,柱过载,减少进样量或将样品稀释,10,倍,稀释样品可以得到较好的结果,试一下较厚液膜的其他色谱柱,前面介绍的所有内容均适用,前伸峰和拖尾峰均说明是非线形的分配,即色谱柱与样品不匹配,使用不同选择性的色谱柱可以解决这个问题,色谱柱故障的诊断与排除,峰型不好（拖尾）,12,分析过程中基线位置突然变化,偏离,基线偏离或漂移,基线偏离,不规律地升高或降低,在整个色谱过程中基线不规律地升高或降低,偏离或漂移是由于下列原因产生的,温度,流速,13,确保在两次进样之间有足够的平衡时间,检查体系是否有漏,主要检查进样口部分,柱前,前次色谱过程中的残余的低挥发性流出物,基线漂移,漂移,正确地使用高纯度的载气,色谱柱老化,色谱柱的最高使用温度不能超过该柱所规定的最高温度极限,进样口温度与检测器温度要高于色谱柱的最高使用温度,14,基线噪音,色谱图的基线噪音太高,进样垫流失,密封垫的类型不对或使用时间过常，需要更换,衬管被污染,新的密封垫在柱温箱中老化过夜，以除去易挥发性化合物,vespel,密封垫不能超过使用温度,(,350),衬管被污染,较脏的样品每进样,1520,次后，更换新的衬管,气源可能被污染,选择正确的在线气体净化器,(traps),实验室是否有异常的气体,每使用四瓶气体，至少要更换一次气体净化器,检测器可能已被污染,清洗检测器,噪音,15,流失,(MSD),由柱外产生的杂峰,色谱柱：HP 5 MS 30mx0.25mmx0.25um,柱温：80,25/min,160，160,3/min,(4),320，320,20/min(4),325,进样：分流比 100:1;1ul of 100ng/ul,检测器：MSD(HP-5973),4.00,6.00,8.00,10.00,12.00,14.00,16.00,18.00,20.00,峰高大约相当于 5 ppb of PAH,(真正的杂质),16,HP 绿色的高级进样垫,P/N 5183-4594(11 mm),320,325,进样垫,17,隔垫类型,性 能,流失及温度优化的进样垫(BTO)橙/红色,高温进样垫适合与进样口温度在,400以上使用（批检）,HP 绿色高级进样垫,350 以上普通用途的高温进样垫,HP 黄色长寿命进样垫,长寿命的进样垫，无需特殊保护（可用于自动进样器）,灰色低流失进样垫,经济型 比 BTO、高级绿色垫、长寿命黄色垫（较贵）的流失高，但更经济,红色低流失进样垫,与灰色低流失进样垫接近流失高于,BTO、绿色垫、黄色垫,柱故障的诊断与排除,附加峰(第一页),鬼峰,柱头污染,烘焙色谱柱，然后做空运行（无样品）,进样垫流失,使用高质量的产品,进样口污染,残留在进样口或衬管中的物质,载气不纯,使用高纯度的载气及高质量的气体净化器，并定期更换,有两种类型的附加峰,1.即使不进样也会出现的峰(鬼峰)，并且在色谱分析过程中也会出现在真实的峰之中,2.由样品产生的附加峰,18,柱故障的诊断与排除,附加峰(第二页),载气中杂质与固定相发生反应,若使用分离,/,无分流进样口,进样口底部的密封垫可能会与样品反应,使用金制进口密封垫,即使进纯样，也会出现附加峰,柱故障的诊断与排除,附加峰(第三页),做一次空运行,-,如果这些峰还存在，不是由样品产生的，按照前面介绍的方法检查,进样口温度过热，可以导致样品组分的降解,每次将进样口降低,20,，观察这些峰是否还出现,衬管与样品起反应,使用脱活的衬管,衬管内填充物有活性,更换衬管内填充物或使用无填充物的衬管,样品在进样口停留的时间太长,增加柱流速,样品组分稳定性差,尽可能降低进样口温度,使用脉冲式无分流或脉冲式分流进样,20,柱故障的诊断与排除,丢失色谱峰,进样口温度太低,高沸点的化合物不能很快地气化,增加进样口温度,进样口温度太高,许多挥发性的组分在进样口降解,降低进样口温度,进样口被污染,进样口的污染物与样品发生反应,清洗进样口，更换衬管和进样垫,衬管有活性,使用脱活的衬管,色谱图中没有出现你希望得到的样品组分峰,21,柱故障的诊断与排除,峰型不好,柱过载,将样品稀释,10,倍重新进样,使用较厚液膜但固定液相同的色谱柱,减少进样量,小体积进样,增加分流比,可能是几个未分离的色谱峰,将柱温降低,20,再进样,局部的分离可以显示其它额外的样品组分,22,使用较长的色谱柱,试一试不同选择性或不同极性的柱子,如将,HP-1,换成,HP-5,如将,HP-5,换成,HP-35,或,HP-50+,例如半挥发性的苯甲酸（色谱性能不好）,柱故障的诊断与排除,峰型很差,合并的峰（未分离的峰）,将柱温降低,20-30,在进样口的底部安装柱子的地方安装,绝缘帽,将进样口温度增加,20-30,检查样品与溶剂的选择是否正确,峰顶分叉（双肩峰）,23,对极性的化合物使用极性的溶剂,检测器过载,减少进样量或将稀释样品,10,倍,或者使用较大的分流比,稀释样品可以达到较好的效果,色谱柱安装位置可能引起的问题,色谱柱到检测器安装位置不正确,;,使其不能到达,FID,喷嘴,色谱柱到进样口安装位置不正确,.,使其不能到达进样口,色谱柱到进样口及检测器的位置安装正确,24,色谱柱安装到进样口,评定因素,安装深度,-,柱到针的间隙,按照厂方的介绍,在进样针头到柱保留,1-2,厘米的间隙,对分析物和样品基质选择适用的衬管,使用专用的柱切割器,保证所有的柱接头及其它接口不漏,25,