免疫学实验凝集反应.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,免疫学实验凝集反应,免疫学实验凝集反应,第1页,实 验 要 求 与 实 验 室 规 则,试验课要求：,1.,课前预习，明确目标，了解试验内容与方法。阅读试验指导,2.,试验过程严厉认真，按试验规程操作，要有严格科学态度,3.,仔细观察如实统计试验现象与结果，按时独立完成试验汇报,试验室规则：,1.,进入试验室必须穿整齐隔离衣，禁止在试验室内高声喧哗,2.,禁止在试验室内饮食，吸烟和做与试验无关其它事情,3.,节约试验用具，爱护仪器设备，如有损坏及时汇报老师,4.,强化安全意识，注意水电安全。值日小组认真整理卫生，,保持试验台面清洁整齐，试验废物放入指定垃圾桶内。,免疫学实验凝集反应,第2页,临床免疫学试验指导,第一个别 抗原抗体反应,（,Antigen-Antibody Reaction,）,抗原抗体反应概念：,是指对应抗原,-,抗体在体内或体外发生特异性结合反应。,主要应用：,1.,用已知抗原检测未知抗体，抗体效价,2.,用已知抗体检测未知抗原，明确病原生物,抗原,-,抗体结合反应常见试验方法：,凝集反应 沉淀反应 补体结合试验,免疫标识试验技术,试验目标：,掌握抗原抗体结合反应原理，方法及其应用,免疫学实验凝集反应,第3页,第一节 凝集反应（,Agglutination,）,反应原理：,颗粒型抗原与对应抗体在电解质溶液中出现凝集想象,凝集反应方法：,直接凝集：,颗粒性抗原和对应抗体直接出现凝集反应,间接凝集：,先将可溶性抗原吸附于大分子颗粒载体,表面,再与对应抗体结合发生凝集反应。,详细试验内容与方法：,玻片凝集试验：,伤寒沙门氏菌与痢疾志贺式菌检测，用已知抗血清,检测患者体内未知抗原。操作见试验指导,试管凝集试验（微量反应板法）：,用已知颗粒性抗原与被检血清混合，,然后观察试管内有没有凝集，并观察血清凝集效价，判断抗体浓度。,间接凝集试验（类风湿因子检测,RF,）：属本身免疫性疾病,受外界刺激，机体,IgG,变性，产生抗原性（,RF,），刺激本身产生抗变性,IgG,抗体，此抗体与,RF,因子结合形成免疫复合物沉积于病变部位。,免疫学实验凝集反应,第4页,抗原抗体反应示意图,NaCl,可见反应,直接凝集反应,免疫学实验凝集反应,第5页,定义：,凝集反应,指细菌、红细胞等,颗粒性抗原,或表面覆盖抗原颗粒状物质,(,如红细胞、聚苯乙烯胶乳等,),，与对应抗体结合，在一定条件下，形成肉眼可见凝集团块现象。,试验目标：,掌握抗原抗体结合反应原理，方法及其应用,属免疫学最简单最直接最常见基础试验,试验一 凝集反应,免疫学实验凝集反应,第6页,用已知抗血清检测被检样品中有没有相对应抗原,免疫学实验凝集反应,第7页,【,试验内容,】,玻片凝集：,常见已知抗血清检测未知抗原，,定性,试管凝集：,可检测未知抗原或抗体,并能,汇报凝集效价,一、玻片凝集反应（定义）,当颗粒性抗原与对应抗体发生特异性结合时，二者 百分比适宜，在电解质溶液中展现肉眼可见颗粒状 凝集，此现象称凝集反应。,免疫学实验凝集反应,第8页,【,试验材料,】,1.1:20,痢疾免疫血清，,1:20,伤寒免疫血清。,2.,伤寒沙门菌菌液，痢疾志贺菌菌液。,3.,生理盐水，玻片，微量移液器，消毒缸等。,一、玻片凝集反应,1,2,取清洁玻片两张，用记号笔，玻璃蜡笔作出标识和画好分区，按试验指导要求加样操作。,免疫学实验凝集反应,第9页,【,方法,】,1.,取洁净玻片,2,张，各用记号笔划分三等份。,2.,在玻片左上角分别标识,1,和,2,。,3.,按以下要求依次加入反应物。,各种加量均为,20,微升,4.,转动玻片，充分混匀,1-2min,后观察反应结果并,作出解释。,解释说明出现凝集和不出现凝集依据。,1,2,生理,1,：,20,伤,1,：,20,痢,盐水 血清 血清,+,伤寒沙 伤寒沙 伤寒沙,门菌 门菌 门 菌,生理,1,：,20,伤,1,：,20,痢,盐水 血清 血清,+,痢疾志 痢疾志 痢疾志,贺菌 贺菌 贺 菌,免疫学实验凝集反应,第10页,二、试管凝集反应,【,试验原理,】,将待检血清,作对倍稀释,后，加入,等量已知颗粒性抗原,与待检血清混合，抗原与不一样稀释度抗体在试管内直接结合而出现凝集现象称为试管凝集反应。此法是一个半定量法。,常见已知抗原,(,如细菌悬液，,RBC,悬液,),来测定被检血清中,对应抗体水平,(,效价或滴度,),。,用于检测被检血清中是否存在和,已知抗原,对应抗体,及抗体效价：如；患者血清中免疫性抗体检测。,比如,孕妇血清中免疫性,IgG,检测，用于新生儿溶血病诊疗、,病毒感染后，患者抗病毒抗体产生情况观察,免疫学实验凝集反应,第11页,【,材料,】,1,1:20,伤寒免疫血清。,2,伤寒沙门菌菌液，甲型副伤寒沙门菌菌液。,3,生理盐水，,TIP,头，微量移液器，,4.U,型微量反应板。见下列图,5,恒温培养箱等。,免疫学实验凝集反应,第12页,方法,:,取,U,型微量反应板，做好标识，加样,小心加样！,取,U,型微量反应板（做好个人或小组标识）,于两横排,1,10,孔中各加入生理盐水,每孔,50l,。,分别在两横排,第,1,孔,内加入,1:20,伤寒免疫血清,50l,，,每排各从第,1,孔开始作对倍稀释至第,9,孔，,从第,9,孔混匀后弃去,50l,。,第一横排从,第,10,孔至第,1,孔,各加入,伤寒沙门菌,菌液,50l/,孔,第二横排,同法各加入,甲型副伤寒沙门菌菌液,50l/,孔。,充分混匀后，置,45,恒温箱孵育,1h,后取出。,室温静置,15min,，最好在黑色背景下，观察并汇报结果。,免疫学实验凝集反应,第13页,血清对倍稀释方法用微量移液器将第,1,孔溶液连续吸吹三次，使其充分混匀。吸出,50l,移入第,2,孔。同法吸吹三次使充分混匀后再吸出,50l,移入第,3,孔，如此作对倍稀释至第,9,孔，吸吹混匀后吸出,50l,弃去。此时第,1,9,孔血清稀释度依次增加一倍，即血清对倍稀释法或倍比稀释法。,注意：,做倍比稀释吸收时插到管底，吹出时离开,液 面，沿孔壁吹出。动作要连续轻巧，切勿犯错,免疫学实验凝集反应,第14页,孔 号,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10,生理盐水（,l,）,50 50 50 50 50 50 50 50 50 50,1:20,伤寒,50 50 50 50 50 50 50 50 50 免疫血清（,l,）,（,弃去,50,）,血清稀释度,1:40 1:80 1:160-1:10240 ,菌液（,l,）,50 50 50 50 50 50 50 50 50 50,血清最终,1:80 1:160 1:320 -1:20480 ,充分混匀后，置,45,孵育,1h,，取出室温静置,15min,观察结果,试管凝集试验操作与稀释图示,第一排：每孔加入,伤寒沙门菌,菌液,50l,。,菌液要充分混匀！,第二排：每孔加入,甲型副伤寒沙门菌 菌液,50l,。,免疫学实验凝集反应,第15页,【,结果观察与判定,】,观察结果：,先观察生理盐水阴性对照孔（,10,空）,此孔不发生凝集，呈混悬菌液。,液体混浊，管底,沉淀物呈圆形，边缘整齐,。此沉淀物是在静置,过程中细菌因重力作用自然下沉形成。轻轻摇动,呈混悬液。,然后自第,1,孔开始依次观察孔内液体混浊程度及孔底凝集块大小。,以,出现显著凝集,（,）管号血清滴度汇报结果,如：,4,孔,+,，,5,孔,+,，,6,孔,+,。则汇报为：,1,：,640,免疫学实验凝集反应,第16页,凝集物 上清液 凝集程度,全部凝集 澄清透明,+,（凝集块大，为最强凝集）,大部份凝集 基础透明,+,（凝集块较大，为强凝集）有显著凝集 半透明,+,（凝集块显著，为中度凝集）极少凝集 基础混浊,+,（凝集块不显著，为弱凝集）不凝集 混 浊,-,（未见凝集块，为不凝集）,+,+,+-,强凝集 显著凝集 弱凝集,免疫学实验凝集反应,第17页,凝集效价判定,1.,观察第一排,1-9,管凝集情况，作出判定：,凝集效价（血清凝集滴度）判定,：,以能与一定量抗原发生肉眼可见,显著凝集（,+,）血清最高稀释度,结果汇报：,凝集效价,1XXXX,2.,观察第二排,1-10,管反应情况，,并作出解释,免疫学实验凝集反应,第18页,复习思索题,？,1.,依据你试验结果说明抗原抗体反应,特异性。,2.,何谓血清凝集效价（滴度）？血清凝集,效价与血清抗体浓度相关性？,3.,结合自己学过知识，举例说明抗原,-,抗体,凝集反应在临床医学中应用。,免疫学实验凝集反应,第19页,免疫学实验凝集反应,第20页,不凝集,免疫学实验凝集反应,第21页,免疫学实验凝集反应,第22页,免疫学实验凝集反应,第23页,免疫学实验凝集反应,第24页,免疫学实验凝集反应,第25页,免疫学实验凝集反应,第26页,免疫学实验凝集反应,第27页,免疫学实验凝集反应,第28页,免疫学实验凝集反应,第29页,免疫学实验凝集反应,第30页,免疫学实验凝集反应,第31页,