细胞实验室简介.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,细胞实验室简介,作者,Vincent,细胞实验室组成,细胞实验室的设置,细胞实验室的基本设备配置,常用器皿、器械,实验室操作注意事项,大纲,细胞培养实验室的设计是由工作的目的和规模决定的，其基本要求是：便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察。,细胞培养实验室的设置必须满足三个基本的需要，即：实验准备,（,培养基配制，洗涤与灭菌等,）,、无菌操作、控制培养。,一,.,细胞实验室组成,基本组成：,基本实验室,消毒准备室,制备室,无菌操作室,辅助实验室,细胞学实验室,生化分析室,摄影室及暗室,消毒准备室,制备室,无菌操作室,1.,基本实验室：,消毒准备室,功能,一切与实验有关的准备工作,要求,设备的安装和排列要合理,房间要宽敞明亮，通风条件好,地面要便于清洁、防滑,配备,实验台，高压灭菌锅、排风灭火设备、,超声波清洗器、洗瓶机等,。,制备室,功能,进行培养液及相关试剂的配制,要求,在无菌操作台内过滤、除菌。,配备,冰箱、天平、真空泵、,PH,计等。,无菌操作室,地面、天花板及四壁尽可能光洁，无死角，易于清洁。,大小适度，层高不高于,2.5,米。,干爽、安静、清洁、明亮。,紫外灯,1,2,盏，保持室内无菌状态。,无菌操作室,设置空气过滤和恒温恒湿装置，恒温温度,26,度左右。相对湿度控制在30-65%。,保持正压，尽量减少与外界的空气对流，减少尘埃与微生物侵入。,通常由内外间组成，外间为缓冲间，用于准备工作。,研究人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。,无菌操作,（1）无菌操作室：无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域，最好能与外界隔离，不能穿行或受其他干扰。,理想的无菌操作室应划为三部分：,a)更衣室,供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。,b)缓冲间,位于更衣间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境。,c)无菌操作间,专用于无菌操作、细胞培养。其大小要适当，且其顶部不宜过高（不超过2.5m）以保证紫外线的有效灭菌效果；墙壁光滑无,死角以便清洁和消毒。工作台安置不应靠墙壁，台面要光滑压塑作表面，漆成白色或灰色以利于酚红,显示pH的观察。,无菌操作间的空气消毒：,紫外线灯,产生臭氧，并且室内温度及湿度均较高，不利于工作人员健康。,空气过滤的恒温恒湿装置,最好,无臭氧紫外线消毒器,电子消毒灭菌器,在高压电场作用下，电子管的内外电极发生强烈电子轰击，使空气电离而将空气中的氧转换成臭氧。臭氧是一种强氧化剂，能同细菌的胞膜及酶蛋白氢硫基进行氧化分解反应，从而靠臭氧气体弥漫性扩散达到杀菌之目的，消毒时没有死角。消毒后空间的残留臭氧只需3040min即能自行还原成氧气，空气不留异味，消毒物体表面不留残毒。,细胞培养实验室应能进行五方面的工作：,无菌操作,制备,清洗,消毒灭菌处理,储藏,二,.,细胞实验室的设置,三,.,细胞实验室的基本设备配置,基本设备,灭菌设备,无菌操作设备,细胞培养设备,细胞学鉴定设备,冰箱,天平,酸度计,恒温水浴锅,磁力搅拌器,液氮,罐,纯水,设备,1.,基本设备,PH 7.0,7.4,去离子水,无菌,高温电子灭菌炉,蒸汽式压力灭菌锅,过滤灭菌装置,喷雾消毒器,紫外灯,2.,灭菌设备,0.45,m,0.22,m,生物安全柜,3.,无菌操作设备,生物安全柜,根据主要几项生物安全柜国际标准的规定，安全柜可分为,一级、二级,和,三级,三大类以满足不同生物研究和防疫的要求。安全柜的分类级别与生物安全登记无关。,一级生物安全柜,保护工作人员和环境，而不保护样品。,排气口安装有,HEPA,过滤器。,无自带风机，依赖外接通风管中的风机带,动气流。,二级生物安全柜,可提供对样品，环境，工作人员的保护。,排气口安装有,HEPA,过滤器，独有特征是具有垂直层状薄片（无定向的）,HEPA,过滤器。,内置风机，形成下沉气流,无自带风机，依赖外接通风管中的风机带,动气流。,三级生物安全柜,为,3,4,级实验室生物安全等级而设计，柜体完全气闭。,通过手套进行操作，俗称“手套箱”。,实验品通过双门的传递箱进出。,适用于高风险的生物实验。,CO,2,培养箱,离心机,4.,细胞培养设备,温度：,370.5CO,2,浓度：,5%,相对湿度：,100%,定期清洗、消毒,罐内压力指示,接培养箱的管子,输出压力指示,压力调节旋钮,流量控制阀门,5.,细胞学鉴定设备,倒置显微镜,荧光显微镜,酶标检测仪,流式细胞仪,四,.,常用器皿、器械,培养器皿,移液器,特殊用具,移液器,电动移液器,微量移液器,多通道微量移液器,特殊用具,细胞筛网、细胞刮刀、细胞计数板,五,.,实验室操作注意事项,做好实验前准备，避免反复进出而增加污染机会,进入细胞培养室前需更换工作服,换鞋并洗净、消毒双手。,注意无菌室内的紫外灯,室内常规用品不准随意拿出室外，所有物品不得挪作它用,冰箱内的培养液要注明姓名、配制日期，不随便使用他人的培养液，以免交叉污染,注意各类设备运行状态，发现问题及时报告,实验完毕，及时清洁工作台面，将使用过的实验用品移出无菌室,定期对无菌室进行消毒灭菌,谢谢,