小瓜虫省名师优质课获奖课件市赛课一等奖课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。谢谢,小瓜虫病(Ichthyophthiriasis),第1页,小瓜虫病是由多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiis)寄生于各种淡水鱼体表和鳃上引发，最显著症状就是在鱼体表形成白点，所以又叫白点病(white spot disease)。小瓜虫病分布广泛，遍布全世界，不但各种淡水鱼类和观赏鱼能感染，而且两栖动物也能被寄生感染。该病发生最适宜水温为1525，当水温在10 以下或26以上时发病较少。即使该病早在1876年就由法国人Fouquet描述并将病原定名为多子小瓜虫，不过，因为该病能危害许多鱼类，且治疗困难，所以对该病防治至今仍是一个难题。,第2页,一、病原,多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiis)。属于动基片纲、膜口亚纲、膜口目、凹口科、小瓜虫属。成虫普通呈卵圆形或球形，为乳白色，大小为(350800)m(300500)m，肉眼可见，是当前在鱼体上发觉最大寄生原虫。在小瓜虫腹面近前端可见有一“6”字形胞口，螺旋形口缘由58行纤毛组成，纤毛作逆时针方向运动，一直到胞咽。虫体有两个核，大核呈马蹄形，小核呈圆形，紧贴在大核上，胞质外层有很多细小伸缩泡，内含有大量食物粒。,1,2,3,4,5,1、胞口 2、纤毛线 3、大核 4、食物粒 5、伸缩泡（自倪达书等）,第3页,刚从胞囊钻出来幼虫呈圆筒形，很快就变成扁鞋底形，全身除密布短而均匀纤毛外，在虫体后端还有一根粗长鞭毛。一个大伸缩泡位于虫体前半部，大核近圆形，多数位于虫体后方，小核呈球形，位于虫体前半部，“6”字形原始胞口还没有与内部相通。多子小瓜虫繁殖方式为二分裂，当前研究已证实，小瓜虫在鱼体寄生时也能进行分裂生殖，但普通分裂34次后，就不再分裂了。小瓜虫离开鱼体后继续分裂，普通一次能孵化5001 000个幼虫。,第4页,第5页,小瓜虫生活史,小瓜虫生活史可分为以下3个阶段：,1.,滋养体阶段,从小瓜虫掠食体进人鱼皮肤后到小瓜虫成熟并离开鱼体时期。,2.,包囊阶段,从小瓜虫脱离鱼体形成包囊到包囊破裂时期。,3.,掠食体阶段,从包囊破裂后，掠食体自由游动到进入鱼体时期。,该分期可清楚地表明小瓜虫生活史，如滋养体阶段，表明小瓜虫在鱼身上，而成虫期就不能明确到底是哪个时期。,小瓜虫生活史,第6页,小瓜虫超微结构研究,对小瓜虫超微结构研究在国内还未见报道，国外学者对小瓜虫超微结构作了一些研究。,Lobo等对小瓜虫食物泡进行了观察，发觉滋养体阶段食物泡最大，并包含了被吞噬宿主细胞，滋养体离开宿主后，食物泡开始凝聚，然后开始拉长分裂；在掠食体阶段食物泡不显著，但可见含有磷酸盐活性小泡。,Chapman等对小瓜虫细胞壁层和收缩泡超微结构观察表明，小瓜虫与梨形四膜虫非常相同，该发觉为小瓜虫免疫抗原制备开辟了路径。Lobo等对小瓜虫高尔基体进行了观察，发觉在滋养体阶段可见到大量分散高尔基体，并发觉高尔基体与内质网一个可修饰潴泡相关，证实纤毛原生动物厚膜潴泡是高尔基体终极隔，与转运高尔基体网络系统相同。,第7页,小瓜虫人工保留和培养增殖研究,常见方法是让患病鱼在适宜条件下自然生存。Musselius等把感染小瓜虫鲤(1525g)养在水族箱中，每25 L水放养1尾鱼，水温为10l2(改变幅度为23)，pH为6.708.75，NH4 0.06 mgL，溶氧56 mgL，每个月换水一次，在此环境下将小瓜虫保留达两年。但该方法必须要有患病鱼，所以，受到一定限制。Ekless等和Nielsen等都对小瓜虫人工培养进行了一些探讨，他们用EPC(epithelioma papulosum cyprini)细胞对掠食体进行人工培养，发觉能发育成滋养体，而且将小瓜虫保留14 d，但对小瓜虫长久保留还需深入地研究。,第8页,二、小瓜虫病症状及病理改变,症状,：,小瓜虫病症状比较显著，主要是在鱼体表形成小白点，看上去鱼体像洒了一层盐。当病情严重时，躯干、头、鳍、鳃和口腔等处都充满小白点，有时眼角膜上也有小白点，并同时伴有大量粘液，表皮糜烂、脱落，甚至蛀鳍、瞎眼；病鱼体色发黑、消瘦、活动异常，常与水中固体物摩擦，最终病鱼因呼吸困难而死亡。,患小瓜虫病剑尾鱼（吴淑琴）,患小瓜虫病小丑鱼,第9页,病理改变,小瓜虫病主要病理改变在皮肤和鳃上。因为小瓜虫是在鱼上皮细胞下寄生，并不停转动，因而引发上皮细胞增生，形成白色结节，此乃所谓小白点。,据伍惠生报道，小瓜虫能寄生在鱼类鳃丝上，以鳃小片上皮细胞、红细胞、淋巴细胞等为食，小瓜虫还能钻人鳃腔膜并穿过膜进人到胸腺组织内部，以胸腺淋巴细胞和上皮细胞为食，使胸腺正常组织结构紊乱，淋巴细胞显著降低。,Ewing等对多子小瓜虫侵袭鱼鳃上皮进行了观察，当掠食体靠近鳃上皮时，首先是收缩泡打开带有粘性材料密闭纤毛，使其首先连接在宿主上皮上，接着，掠食体依靠前端钻孔器快速钻进鱼上皮，并破坏细胞侵人5 min后，整个寄生虫就能全部侵入鱼上皮。,第10页,Antychowicz等对鲤皮肤进行扫描电镜观察，可见小瓜虫寄生部位有大量白细胞，这些白细胞在宿主损伤部位组织内堆积成簇，此种情况可能与抵制那些造成组织损伤和死亡二次感染机制相关。,Ryzhova等对小瓜虫病血液学进行研究，结果表明，患病鱼淋巴细胞降低，血红蛋白水平降低，单核细胞、嗜中性粒细胞增加，出现嗜酸性细胞，并可见大量不正常白细胞、单核细胞、血栓细胞，嗜酸性细胞和未成熟红细胞，这些可能是机体产生防御性反应。,第11页,小瓜虫致病机理,对小瓜虫致病机理至今还不完全清楚，但依据小瓜虫病症状和病理推测，其致病机理主要有以下几个方面：首先，小瓜虫寄生在鳃上皮细胞，引发鳃上皮细胞增生、肿胀、坏死，影响鱼呼吸；,其次，小瓜虫寄生后，引发鱼电解液、营养物质和体液流失，造成代谢紊乱；,第三，小瓜虫寄生后，造成鱼体表伤口产生继发性感染，从而造成鱼死亡。,第12页,三、小瓜虫病流行情况,一个世界性广泛流行疾病。世界各地都有流行，对宿主无选择性，各种淡水鱼、洄游性鱼类、观赏鱼类均可受其寄生，亦无显著年纪差异，各年纪组鱼类都能寄生，但主要危及鱼种。繁殖适宜水温为15,25,。流行于初冬、夏末。但当水质恶劣、养殖密度高、鱼体抵抗力低时，在冬季和盛夏也有发生；生活史中。无需中间宿主，靠胞囊及其幼虫传输。刚孵出来幼虫侵袭力较强，伴随时间推移而逐步减弱；水温在15,25,时侵袭力最强，孵化后94小时侵袭力较高，36小时后降低。,第13页,小瓜虫病诊疗方法,小瓜虫病与孢子虫病都有呈“白点”症状，极易混同，不易识别。现区分于下，以供参考。,1、借助显微镜：在显微镜下可见小瓜虫体内有一马蹄形或香肠形大核，且能作迟缓游动，孢子虫胞囊内有许多微小泡子虫，不含有活动能力。,第14页,2、无显微镜，野外诊疗时也可凭借经验用肉眼加以区分。,利用小瓜虫含有活动能力而孢子虫无活动能力加以区分.可将有小白点鳍剪下，放在盛水白磁盘中，在光线很好地方，用小针轻轻将白点膜挑破，如能看到有小虫滚出并在水中游动为小瓜虫，不然为孢子虫，也可用一洁净玻璃片，滴加少许水取几粒白点排成三角形、正方形等规则图形，过一会儿观察，图形有改变为小瓜虫，保持原有图形不变为孢子虫。,从病鱼症状上加以区分，病鱼死后白点消失为小瓜虫病，不然为孢子虫病;小瓜虫白点呈球形，大小较一致而孢子虫白点形态不规则，大小不一;患小瓜虫病病鱼，体表分泌粘液较多，严重时鱼体筱盖着厚厚一层白色粘液，而孢子虫病病鱼体表普通无或少有粘液。,第15页,四小瓜虫病免疫学研究,因为小瓜虫病对鱼危害严重，防治困难，所以有很多学者开始对小瓜虫病免疫进行研究。,黄琪琰从病鱼鳃组织切片上观察到，当鱼体抵抗力强时，即使小瓜虫寄生上去后，虫体也会发生中途夭折，不引发发病。,Beckert等也进行过类似研究，并采取免疫电泳方法，证实了病鱼血清和黏液中存在抗多子小瓜虫抗体，从而证实小瓜虫病免疫研究可能性。不少学者也证实，鱼体接触小瓜虫后，在其血清和皮肤黏液中出现了抗该虫抗体，这种抗体在体外能显著抑制小瓜虫运动，从而杀死虫体。小瓜虫纤毛膜和细胞膜中含有一些蛋白质，当特异性抗体与这些蛋白质结合时，会使小瓜虫失去游动能力且聚集成团，故将这种存在于小瓜虫纤毛膜和细胞膜中多肽蛋白称为阻动抗原。,第16页,Cross等经过研究发觉，用亲和层析法能将这种蛋白提纯制成鼠单克隆抗体(MAbs)，给鱼体注射后，发觉对鱼有很强保护力。,Clark等用搜集提纯小瓜虫阻动抗原注射到小白鼠腹腔内，再用小白鼠脾脏细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞进行培养，搜集含有单克隆抗体细胞培养液，用这种单克隆抗体对小瓜虫进行处理，发觉能使小瓜虫幼虫失去游动能力。所以，推测小瓜虫纤毛膜和细胞膜中含有阻动抗原，能刺激鱼体产生免疫反应。,Wang等也证实，被小瓜虫感染后斑点叉尾鮰取得了免疫抗体，用纤毛幼虫攻毒，发觉血清中产生特异性抗体能固定虫体，由此提出，虫体表面蛋白抗原是刺激鱼类产生对应抗体主要原因；将虫体阻动抗原用免疫亲和力层析法纯化后，给鱼类注射，结果在鱼血清中产生了高水平抗体，从而证实阻动抗原在诱导保护性免疫反应中起直接作用，也说明用这些虫体表面蛋白能够制作抗小瓜虫病亚单位疫苗。,第17页,疫苗,对小瓜虫病免疫研究，当前仍处于试验室阶段所用疫苗主要有两种：,一个是用冰冻和福尔马林处理过死疫苗,另一个是直接用于免疫接种小瓜虫活疫苗。试验研究结果证实，死疫苗效果没有活疫苗好，且腹腔注射效果比肌肉注射好，但活疫苗应用有一定风险，假如使用不妥，疫苗有可能再成为病原。,第18页,五、小瓜虫病防治,预防办法：,（1）加强喂养管理，保持良好环境，增强鱼体抵抗力，是预防小瓜虫病关键。,（2）去除池底过多淤泥，水泥池壁要进行洗刷，并用生石灰或漂白粉进行消毒。,（3）鱼下塘前进行抽样检验，如发觉有小瓜虫病寄生，应采取药品药浴。,（4）投喂洁净新鲜饵料，增强鱼体对小瓜虫免疫能力，严格做到“四消、五防”。,第19页,治疗方法,关于小瓜虫病防治，倪达书在20世纪60年代就筛选出用醋酸亚汞治疗小瓜虫病，并对醋酸亚汞治疗机理和治疗浓度都做了阐述。但因为醋酸亚汞毒性强，早已被禁止在食用鱼上使用。,一样，对小瓜虫病疗效很好孔雀石绿、硝酸亚汞，也因为对人体有致癌性和毒性，已被禁止在食用鱼上使用。,现在，国内对小瓜虫病治疗研究也比较多，如用辣椒和生姜、五倍子、食盐、生石灰等治疗小瓜虫，但这些药品大多数对掠食体阶段有一定效果，而对滋养体阶段效果不显著。,第20页,国外用于防治小瓜虫病药品和方法也较多，如硫酸铜、高锰酸钾、氯化钠、福尔马林、孔雀石绿、硝酸亚汞、硝酸银、氯氨-T、超声波、紫外线、增加水温等，但这些药品和方法都受到一定限制，硝酸亚汞、孔雀石绿已被禁用；硫酸铜、高锰酸钾、氯化钠、福尔马林对小瓜虫滋养体阶段效果不显著；超声波、紫外线、增加水温等方法不适合在大水体中应用，但有条件能够考虑使用紫外线，试验证实，多子小瓜虫对紫外线十分敏感，紫外线对掠食体最小致死剂量约为100 000 m(cm2s)。,第21页,从上述研究能够看出，寻找一个能有效治疗小瓜虫病药品已成为当务之急。不过，对小瓜虫病防治最大难题就是普通杀虫药品都不能有效渗透到小瓜虫寄生部位。,小爪虫病是比较令人头疼鱼病，尤其对食用鱼来说，还需要考虑成本、禁用药品、操作难度等问题，治疗上还没有太好方法。中草药含有一定作用。大黄、五倍子、水辣蓼、菖蒲、黄芩、苦参等中草药提取有效成份能够防治各种鱼类细菌性和寄生虫等疾病，甚至还有大蒜、以及辣椒、生姜等都有效果。,对于观赏鱼来说，治疗就轻易多。除了没有禁用药品以外，成本也不会太高，因为规模小，成本高点也能够，而且技术操作也较轻易，就小瓜虫来说，利用小瓜虫不耐高温弱点，提升水温到2830，再配置药品治疗，若治疗及时，治愈率还是很高，据称可到达100。不过提升水温对于养殖食用鱼来说不太现实，成本太高。,第22页,六、小瓜虫病研究趋势,当前，对小瓜虫病研究主要集中在两个方面：一是免疫学方面研究，即研制出有效小瓜虫疫苗；二是对药品筛选上，即找到能替换硝酸亚汞和孔雀石绿药品。,所以对小瓜虫病应加强以下几个方面研究：,1)加强对小瓜虫病基础研究,2)加强对小瓜虫病治疗方面研究应开拓思绪，不要盲目地专注于对常规药品筛选，如能够引入人医透皮剂技术，看能否在普通药品里加一些促渗剂，促进药品渗透功效，使更多药品抵达小瓜虫寄生部位。,3)加强对小瓜虫免疫方面研究，制作疫苗。,第23页,谢谢！,第24页,