紫外可见分光光度计的使用.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,紫外可见分光光度计,1,主要内容,1,、工作原理及仪器组成,2,、分光光度计的使用,波长扫描,定量测定,3,、,注意事项,2,3,物质的颜色与吸收光的关系：,当白光照射到物质上时，如果物质对白光中某种颜色的光产生了选择性的吸收，则物质就会显示出一定的颜色。物质所显示的颜色是吸收光的互补色。,一、工作原理及仪器组成,4,互,补,色,原,理,植物叶子呈现绿色是因为植物中存在一种吸收蓝紫光和红光的载体,叶绿素,颜色的产生,5,完全吸收,完全透过,吸收黄色光,光谱示意,表观现象示意,复合光,6,利用一定频率的紫外,-,可见光照射分析物，它将有选择地被吸收。吸收光谱可以反映出物质的特征。,溶液对光的作用示意图,物质对光的选择性吸收溶液对光的作用,7,I,0,入射光辐射强度,I,透射光辐射强度,T,透射比,a,吸光系数,摩尔吸光系数,光吸收遵循朗伯,-,比尔定律：,溶液对光吸收过程,8,0.575,光源,单色器,吸收池,检测器,显示,仪器组成,-,单光束分光光度计,9,双光束分光光度计,比值,光源,单色器,吸收池,检测器,显示,光束分裂器,10,组成：,光源、单色器、样品池、检测器,1,光源：,能提供连续的辐射；光强度足够大；在整个光谱区内光谱强度不随波长有明显变化；光谱范围宽；使用寿命长，价格低。钨灯,可见光区,320,2500nm,氢灯或氘灯,紫外光区,195,375nm,U3010,（碘钨灯、氘灯）波长范围,190-900nm,11,2,单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件,单色器是分光光度计的心脏部分，它的作用是把来自光源的混合光分解为单色光并能随意改变波长。它的主要组成部件和作用是：,入射狭缝,限制杂散光进入。,色散元件,即棱镜或光栅，是核心部件，可将混合光分解为单色光。准直镜,把来自入射狭缝的光束转化为平等光，并把来自色散元件的平等光聚焦于出射狭缝上。,出射狭缝,只让特定波长的光射出单色器。,12,3.,吸收池,玻璃,由于吸收紫外,UV,光，仅适用于可见光区；,石英,适用于紫外和可见光区,4,检测器：将光信号转变为电信号的装置,光电管,光电倍增管,二极管阵列检测器,5,记录装置：讯号处理和显示系统,13,14,Slit 1,不存在，,Mirror,取代了光栅,grating 1,Grating2,variable-pitch aberration-corrected diffraction grating旋转镜将光分成两束，分别通过参比池和样品池，然后聚集在,PMT,15,16,开始,程序启动,按,方法设定,按钮,扫描范围,读数方式,扫描速度,按,样品名输入,按钮,或,将空白样品分别放入参比池和样品池,进行用户基线校正,按,按钮,将样品放入样品池,开始测量,按,按钮,开始测量,打印数据,按,按钮,打开数据处理界面,数据检索,峰值检出,图谱平滑、求导,二 分光光度计的使用,-,波长扫描,17,启动,UV Solution,软件,打开仪器主机电源。用鼠标点击,Windows,开始菜单中的,Hitachi Applications,选项中的,UV Solutions 2.0,选项。或者直接在桌面上双击,UV Solution,图标。,18,2,运行,UV,Solution,软件。软件将自动配置计算机的串行口（,RS 232 Port,）见图,19,仪器在初始化过程中进行如下自检工作：,ROM,检测,RAM,检测,波长步进电机运转检测,氘灯点亮检测,钨灯点亮检测,仪器波长校正,20,3,仪器主机开始初始化。见图,21,4,仪器主机初始化完毕，进入工作状态。,22,5,测量参数设置,1,在,E,dit,菜单中选择,M,ethod,选项，或按按钮。出现下列窗口。,23,General:,总体设置页面,Measurement,测量,:,Wavelength scan,波长扫描,Time scan,时间扫描,Photometry,定波长测量,Operator,操作者,:,输入操作者的姓名,Instrument,仪器,:,仪器型号由软件自动从仪器主机获得。,Use Sample Table,使用样品表,:,选择是否使用样品表。,Comments,备注,:,填写一些备注信息。,Load,按钮,:,用于装载原来保存的方法文件。,Save,按钮,:,保存当前的设置参数。,Save As,按钮,:,将当前设置参数另存为一个方法文件。,24,Instrument,仪器参数设置页面,25,Data mode,读数显示方式，选择,Abs,吸光度，波长扫描的起止范围一般为,190-800,，狭缝值一般为,2,Light,一般选择“,Auto”,26,Monitor,显示页面,27,Processing,数据处理页面,28,Report,报告结果页面,29,样品名设置，备注信息及文件名输入,30,基线校正,用户基线校正方法：可将,scan speed,设小一些；进行样品扫描时，可设大一些。将空白样品分别放入样品室的参比光路和样品光路。按按钮,系统基线校正方法。,使用空气作为参比和样品。按按钮 出对话框见图，选择,System,后按,OK,按钮，进行系统基线校正。,31,测量,有两种方法可以开始测量：,使用菜单方式,选择,S,pectrophotometer,菜单下,S,tart,选项开始测量使用按钮方式：按按钮 开始测量,如果要终止扫描按按钮 。,32,开始,程序启动,按,方法设定,按钮,按,样品名输入,按钮,或,将空白样品分别放入参比池和样品池,将样品放入样品池,开始测量,按,按钮,开始测量,打印数据,按,按钮,打开数据处理界面,进行用户基线校正,按,按钮,定量测量,设置波长,输入标样,二 分光光度计的使用,-,光度法,33,测量参数设置,在,E,dit,菜单中选择,M,ethod,选项。出现下列设置窗口,.,34,具体操作程序,Method:,general,:,Measurement,测量方式选择,Photometry,（光度计测量）,Quantitation,定量参数设置页面：,35,在,measure,中选择波长,wavelength,，在,Calibration,中选择“,1st order”,，“,2st order”,，“,3st order”,，也可以不校准。在,concertration,中键入标准浓度单位。,3.,Instrument,36,4,standards,标准参数设置,键入标系的样品浓度及名称,37,5,吸光度自动校零,在开始测试前，需要进行吸光度校零。在样品室参比和样品光路中分别放入空白样品。按按钮 进行吸光度校零。,6,在,wavelength,中设定扫描的最大吸收波长，,7,放入标样，选中第一个标样，点,measure,依次测定完成 后自动给出标准曲线。,8,选择,SAMPLE,进行样品测定，全部测定完后点击,END,，此 时自动生成一个文件，打开此文件，另存为所需的文件名。,9,关机时，先退出,UVsolution,，再关电脑，最后关光度计上的,power,。,38,三 注意事项,1.,开机预热,15,分钟左右。,2.,测定时应注意：,参照池和吸收池应是一对经校正好的匹配的吸收池，材料和规格一致。,使用前后应将洗手池洗净，测量时不能用手接触窗口。,已匹配好的比色皿不能用炉子和火焰干燥，不能加热，以免引起光程长度上的改变。,39,3.,测量条件的选择：,选择适宜波长的入射光,:,由于有色物质对光有选择性吸收,为了使测定结果有较高的灵敏度,必须选择溶液最大吸收波长的入射光。,控制吸光度,A,的准确的读数范围,:,由朗伯,-,比耳定律可知,吸光度只有控制在,0.20.7,读数范围内时,测量的准确度较高,.,选择参比溶液：参比溶液是用来调节仪器工作零点的。若样品溶液，试剂，显色剂无色可用蒸馏水作参比溶液；反之应采用不加显色剂的样品液作参比溶液。,4.,用完后先关程序，再关仪器开关，关电源，关闭计算机。,5.,正确登记，将仪器及实验台擦干净。,40,思考题,分光光度计由哪几部分组成？设计其光路图。,紫外可见分光光度计对光源的要求是什么？一般采用哪几种光源，各光源的波长范围是什么？,比色皿一般由什么材料制成？有哪几种规格？做实验时，你是如何选择比色杯的规格及材料的？,为什么测定时使用参比池？参比溶液怎么选择？,在进行波长扫描与光度测定时需要设置哪些参数？,41,谢谢大家,42,