微生物实验操作基本要求专家讲座.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,0,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,0,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,0,微生物试验操作基本要求,无菌操作,微生物实验操作基本要求专家讲座,第1页,无菌,指在环境中一切有生命活动微生物,营养细胞,及其芽孢或,孢子,都不存在状态。,无菌操作,在微生物分离、接种、培养操作过程中,预防,培养物被其它微生物,污染,操作技术称为无菌操作技术。,无菌操作,创造无菌培养环境,预防在操作过程中其它微生物侵入,微生物实验操作基本要求专家讲座,第2页,无菌环境,一,无菌器具、培养基,二,无菌操作技术,三,基本规则,四,一、无菌操作技术,微生物实验操作基本要求专家讲座,第3页,无菌环境,一,1,、无菌室,2,、超净工作台,3,、生物安全柜,4,、火焰周围,微生物实验操作基本要求专家讲座,第4页,1,、无菌室,无菌环境,一,标准无菌室要求：,房间,设置（外面有缓冲室）、空气过滤、墙面、墙角、微生物操作相关设备、紫外灯,等。,微生物实验操作基本要求专家讲座,第5页,无菌环境,一,如条件有限，可在微生物试验室内专辟一个小房间作为无菌室。能够用板材和玻璃,建造，面积,4-5,平方米即可。,板材和玻璃隔出无菌室,微生物实验操作基本要求专家讲座,第6页,无菌环境,一,2,、超净工作台,超净工作台是一个提供,局部无尘无菌,工作环境垂直,单向流,型空气净化设备。,超净工作台,微生物实验操作基本要求专家讲座,第7页,3,、生物安全柜,无菌环境,一,生物安全柜外形与超净台,类似,，也提供,局部无尘无菌,工作环境。但它设置,了风槽，气流不会吹向使用者，能够有效,保护使用者,。,微生物实验操作基本要求专家讲座,第8页,一,无菌环境,4,、火焰周围,通常使用,酒精灯、煤气灯，其,火焰周围,是无菌区域（直径,10cm,左右）。,首先，利用高温杀死细菌，而后利用酒精燃烧时,向上形成单向气流,形成一个无菌区域。,火焰周围是无菌区域,微生物实验操作基本要求专家讲座,第9页,无菌器具、培养基,二,1,、玻璃、金属等,器具,干热灭菌,法,2,、玻璃、,金属,、,含水物品,高压,蒸汽灭菌法,3,、金属,、玻璃,器具,火焰,灭菌法,4,、液体,或水溶性,物质,过滤除菌,法,微生物实验操作基本要求专家讲座,第10页,1,、玻璃、金属等,器具,-,干热灭菌,法,设备：,电烘箱,用途：用于玻璃器皿、金属器具等耐热物品烤干和灭菌。,条件：,160-165,，灭菌,1-2,小时,。,微生物实验操作基本要求专家讲座,第11页,2,、玻璃、金属、含水物品,等,-,高压,蒸汽灭菌,法,设备：,高压蒸汽灭菌锅,用途：培养基、生理盐水、废弃物、采样器、纱布、衣物灭菌。,条件：,121,水蒸气,2030,分钟,培养基普通使用高压蒸汽灭菌法,微生物实验操作基本要求专家讲座,第12页,3,、一些金属、玻璃,器具,-,火焰,灭菌,法,即,在,火焰,外焰上,灼烧进行灭菌。,用途：接种环、接种针；涂布器；试管管口、锥形瓶,瓶口等灭菌。,微生物实验操作基本要求专家讲座,第13页,4,、,液体,或水溶性,物质,-,过滤除菌法,器具,：,细菌,过滤器,用途：不,耐高温,液体、水溶性物质,除,菌。,细菌过滤器,微生物实验操作基本要求专家讲座,第14页,无菌操作技术,三,我们,经过一定技术来确保目标微生物、培养基不被环境微生物污染，这些,技术就是,无菌操作技术,。包含手部清洁消毒，用,接种针、接种环、吸量管、涂布棒等工具,进行各种操作等等。,微生物实验操作基本要求专家讲座,第15页,1,、手,部清洁消毒,洗手,：手部有可见灰尘时、饭前、便后，用,水和肥皂,洗手；,Handrub,（揉手）：手部较清洁时，,75%,乙醇或者醇基消毒剂,揉,手。,微生物实验操作基本要求专家讲座,第16页,动作：手掌,-,手背,-,指缝,-,手指,-,拇指,-,指尖,-,手腕,微生物实验操作基本要求专家讲座,第17页,2,、,培养皿,操作,培养皿开合：,单,手打开和,盖上皿盖，,包含,持皿法,和,皿加法,两种。,此,操作用于制作培养基平板、接种等,。,持皿法,微生物实验操作基本要求专家讲座,第18页,皿加法,微生物实验操作基本要求专家讲座,第19页,3,、,接种环操作,包含灼烧接种环、接种、,划线等。,微生物实验操作基本要求专家讲座,第20页,灼烧接种环,先斜放外焰灼烧接种环，然后垂直放置后继续灼烧，再斜烧金属杆。,现在红外接种环灭菌器使用也比较广泛。,微生物实验操作基本要求专家讲座,第21页,用接种环进行接种,微生物实验操作基本要求专家讲座,第22页,用接种环进行划线,微生物实验操作基本要求专家讲座,第23页,4,、,涂布棒操作,灼烧灭菌,：,能够沾酒精然后,灼烧，灼烧范围,要包含其杆部。,微生物实验操作基本要求专家讲座,第24页,涂布,：,将,菌液滴,在培养基表面,中央。右手拿涂布,棒将,菌液沿,一条,直线往返推进，然后沿,一垂直线,来,回,推进，平板边缘,处可改变,方向再,涂几,次。,微生物实验操作基本要求专家讲座,第25页,5,、,试管操作,单试管操作,（,注意左右手使用）,微生物实验操作基本要求专家讲座,第26页,双试管操作,5,、,试管操作,无菌操作视频,微生物实验操作基本要求专家讲座,第27页,操作前,准备,1,必须明确物品无菌区和非无菌区。,工作人员需先戴帽子、口罩及洗手，并将手擦干，注意空气和环境清洁。,操作中,2,夹取无菌物品，必须使用无菌持物钳。,进行无菌操作时，凡未经消毒手、臂，均不可直接接触无菌物品或超出无菌区取物。,无菌物品管理,3,无菌物品必须保留在无菌包或灭菌容器内，不可暴露在空气中过久。,无菌物品和非无菌物应分开放置。,无菌包一经打开即不能视为绝对无菌，应尽早使用。,凡已取出无菌物品虽未使用也不可再放回无菌容器内。,无菌操作标准,微生物实验操作基本要求专家讲座,第28页,二、微生物试验室要求,（,1,）试验室内要经常保持清洁卫生。,（,2,）试验室应井然有序，不得存放试验室外,及个人物品、仪器等。,（,3,）测试用过废弃物要倒在固定箱筒内，,并及时处理。,（,4,）试验室应含有优良采光条件和照明设备。,（,5,）试验室工作台面应保持水平和无渗漏，墙,壁和地面应该光滑和轻易清洗。,（,6,）试验室布局要合理，普通应有准备间和无菌室。,微生物实验操作基本要求专家讲座,第29页,三、微生物试验安全要求,（一）普通要求,（,1,）进入试验室工作时，衣、帽、鞋必须穿戴整齐。,（,2,）在进行高压、干燥、消毒等工作时，不得私自离开现场，认真观察温度、,时间。蒸馏易挥发、易燃液体时，不准直接加热，应置水浴锅上进行。,（,3,）禁止用口直接吸收药品和菌液，按无菌操作进行，如发生菌液溅出容器外,时，应马上用有效消毒剂进行彻底消毒，安全处理后方可离开现场。,（,4,）工作完成，两手用肥皂洗净，必要时可用新洁尔灭、过氧乙酸泡手，然后,用水冲洗。工作服要经常清洗，保持整齐，必要时高压消毒。,（,5,）试验完成及时清理现场和试验用具，对染菌物品进行消毒灭菌处理。,（,6,）试验结束后认真检验水、电和正在使用得仪器设备，关好门窗，方可离去。,微生物实验操作基本要求专家讲座,第30页,三、微生物试验安全要求,（二）消防安全要求,（,1,）注意预防供电线路老化造成漏电着火。,（,2,）注意设备原因造成失火。,设备超出正常使用寿命；,设备出现故障未及时发觉和维修。,需过夜而无人看管恒温培养箱和干,燥鼓风箱等。,仪器操作不妥，温度设置过高，引发失火。,恒温干燥鼓风箱,（,3,）预防未关电源引发失火。,（,4,）预防操作不慎，使火源接触易燃物质，引发着火。,（,5,）防止出现爆炸事故。,灭菌锅,微生物实验操作基本要求专家讲座,第31页,三、微生物试验安全要求,（三）药品使用安全,擦拭显微镜镜头二甲苯,易挥发,吸入过多影响健康；,芽孢染色孔雀石绿,致癌；,惯用于显微镜镜头香柏油,剧毒；,浓硫酸、苯酚等,腐蚀试验仪器，伤害皮肤，眼睛等。,微生物实验操作基本要求专家讲座,第32页,三、微生物试验安全要求,（四）细菌感染和污染,细菌易发生变异，在一些特定条件下由非致病菌转变为致病菌。所以应注意防范，不可麻痹大意。,（五）辐射损伤,无菌操作前用紫外灯照射消毒，,强紫外线对人体有害，应防止接触。,微生物实验操作基本要求专家讲座,第33页,四、试验室意外事故处理,见书本第,20,页。,微生物实验操作基本要求专家讲座,第34页,课后作业,1.,怎样实现无菌操作？,2.,请自拟一套微生物试验室仪器设备采购计划。,微生物实验操作基本要求专家讲座,第35页,