动物实验基本技术和方法-(NXPowerLite)优秀PPT.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第八章 动物实验基本技术和方法,1,2,一、实验前准备,理论准备：了解动物实验基础知识,制定研究计划和方案,查阅关于实验方法的参考文献,条件准备：仪器、器械、药品,运输,实验和饲养场所,3,二、抓取和固定,小鼠,4,5,大鼠,6,豚鼠,7,8,家兔,9,10,犬,11,猫的抓取,12,猴,13,三、性别、发情、配种与怀孕鉴定,14,15,四、编号和标记,1、染色法：浅色动物,3.5-5苦味酸溶液（黄色）,0.5%中性红或碱性品红溶液（红色）,2硝酸银溶液（咖啡色，涂后光照10分钟）,煤焦油酒精溶液（黑色）龙胆紫溶液（紫色）,16,17,2、打耳孔法：小型动物,18,3、剪趾法：小型动物,19,4、剪尾法：大、小鼠，仅限与两组间区分,5、烙印法：刺号钳，中、大型动物,6、针刺法：中、大型动物,7、号牌法：耳标签、项圈、腿圈，中、大型动物,8、剪毛法：大动物,9、笼子标号,20,五、分组,随机化分组：避免人为影响,例：将,14,只小鼠随机分成两组。,先将小鼠编为,I,14,号，,在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄12个随机数字。编排如下；,21,动物编号,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14,随机数日,16 22 77 94 39 49 54 43 54 82 17 37 93 23,归 组,B B A B A A B A B B A A A A,奇数代表,A,织，偶数代表,B,组,A,组：,3 5 6 8 11 12 13 14,B,组：,1 2 4 7 9 10,调整分组：接刚才随机数字,23,继续抄表得随机数字,78,，用,78,除以,8,（因为需要把,C,组的,8,个数字调整掉一个），得余数,6,，所以把,A,组的第,6,个动物，即,12,号动物调整到,B,组,22,最终分组,A,组：,3 5 6 8 11 13 14,B,组：,1 2 4 7 9 10 12,23,例：12只大鼠随机分为,3,组,大鼠编号112,在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄12个随机数字。,每个数分别用3除，记录余数，,根据余数分组,大鼠编号：1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12,随机数字：08，27，01，50，15，29，39，39，43，79，69，10,余数：2，0，1，2，0，2，0，0，1，1，0，1,组别：,B，C，A，B，C，B，C，C，A，A，C，A,24,A：3，9，10，12,B；1，4，6,C：2，5，7，8，11,调整分组：接刚才随机数字10继续抄表得随机数字61，用61除以5（因为需要把,C,组的5个数字调整掉一个），得余数1，所以把,C,组的第1个动物，即2号动物调整到,B,组。,最终分组,A：3，9，10，12,B；1，2，4，6,C：5，7，8，11,25,六、去毛,1、剪毛：弯头剪毛剪,2、拔毛：大小鼠尾静脉、家兔耳缘静脉注射,3、剃毛：将剃毛部位先用剪刀粗剪一遍，蘸温肥皂水润湿，用剃刀顺着被毛方向剃毛，用电动剃毛推剪，则逆被毛向剃毛。,26,4、化学脱毛：,常用脱毛剂,8%硫化钠水溶液,硫化钠3份，洗衣粉1份、淀粉7份，加水调成糊状,硫化钡50克，氧化锌25克，淀粉25克，加水100毫升调成糊状,硫化钠10克，生石灰15克，加水到100毫升，适合犬和其他大动物。,27,七、给药,1、自动口服：加入饲料或饮水,2、投喂药片：掰开口，放到舌根部,3、灌胃（,i.g)：,28,29,4、直肠给药,5、呼吸道给药,6、滴鼻,7、点眼,8、经皮肤给药：常用于检测药物、毒物、化妆品等的透皮吸收、局部作用、至敏作用等。家兔和豚鼠选择脊柱两侧皮肤，大小鼠常采取浸尾方式。,9、皮内注射(,i.d)：,一般用于接种或过敏实验。将药液注射在真皮和表皮之间。,30,10、皮下注射(,s.c)：,颈背部、腋下、腿、侧腹,11、肌肉注射(,i.m)：,股部肌肉,31,12、腹腔注射(,i.p)：,下腹部腹中线两侧,13、静脉注射(,i.v)：,小鼠：尾静脉,大鼠：尾静脉、,阴茎静脉、,舌下静脉、,浅背侧跖静脉,32,尾静脉注射：,大小鼠有上、左、右,3根尾静脉,阴茎静脉注射,33,34,舌下静脉注射,浅背侧跖静脉注射,猴的后肢皮下静脉注射,35,豚鼠：浅背侧跖静脉、耳静脉注射,家兔：耳静脉注射,猪：耳缘静脉,猴：前肢桡静脉、后肢隐静脉注射,36,37,猫、狗：前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉注射,狗前肢内侧头静脉 狗后肢外侧小隐静脉,38,14、脑腔注射：,（,1,）小鼠,小指夹鼠尾，拇指和是指置小鼠头两侧固定，中指和无名指压住鼠身，在注射处消毒后，右手持注射器，以食指固定针芯，垂直刺入针头深度约,5,7mm,（,2,）兔,将兔用固定器固定好，剃去头顶的被毛，左手将头皮绷紧，消毒后，右手持锥子，自头顶正中稍偏一侧部位，锥穿头骨，即换以左手固定锥子，右手持注射器，使针头沿锥尖刺入，慢慢拔出锥子，即刻将针头刺入约,10,20mm,，即可推液,39,15、关节腔注射：,16、椎管内注射：注射入蛛网膜下腔,17、淋巴囊内注射：蛙和蟾蜍,40,1,8,、小脑延髓池注射：,41,八、采血,1、大小鼠：,眶静脉丛（窦）：,少量多次采大小鼠血。,小鼠0.20.3,ml，,大鼠0.40.6,ml,摘眼球：用于一次大量采小鼠血，可得到45体重的血量,尾静脉：用于少量多次采大小鼠血,42,43,剪头：用于一次性大量采小鼠血，可得到0.51.0,ml,的血量,大血管：包括颈动脉（静脉），股动脉（静脉），腋下动脉（静脉），腹主动脉。此方法不常用于小鼠采血，而多用于大鼠一次性大量采血。可得5,ml,左右血量。,心脏采血：小鼠少用，可用于大鼠一次性（开胸）或多次采血（不开胸）。,44,2、家兔：,耳缘静脉：可反复采血，每次510,ml。,耳中央静脉：可反复采血，每次1015,ml。,45,心脏采血：可用于,一次性（开胸）或,多次采血（不开胸）。,一次性开胸采血可,得到80100,ml,血量,颈动静脉采血：用于一次性采血，需要手术，可得血量8010,ml。,46,3、豚鼠：,心脏采血：可用于一次性（开胸）或多次采血（不开胸）。一次性开胸采血可得到510,ml,血量。,背跖静脉采血：用于少量反复采血。,47,4、犬猫：和静脉注射部位相同，前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉。也可颈静脉（动脉）或心脏采血5、猪：心脏采血或耳大静脉采血,6、羊：颈静脉采血,7、猴：前肢头静脉、,后肢皮下静脉,或耳缘静脉等。,8、禽类：翼下静脉,48,49,50,常用抗凝剂：,肝素：抑制凝血酶活力，阻止血小板凝集。纯品肝素1,mg125U，10U20U,抗1,ml,血凝集，但通常应用23倍剂量。,用法：可配成1%肝素溶液，用时取0.1,ml,于试管内，100烘干，每管可抗凝510,ml,血。或用1%肝素溶液湿润采血注射器。,肝素可改变蛋白质等电点，当用盐析法分离蛋白作分类测定时，不可用肝素抗凝。,51,枸橼酸钠：使凝血必需的钙离子失活。常用35%水溶液，碱性较强。,草酸盐合剂：草酸铵1.2,g，,草酸钾0.8,g，,福尔马林1.0,ml，,加蒸馏水至100,ml。,使凝血必需的钙离子失活。每毫升血加草酸盐合剂0.1,ml。,氟化钠：每毫升血加6,mg。,52,九、其他体液采集,1、胸水、腹水采集：穿刺,2、消化液采集：唾液，胃液，胰液，胆汁,3、精液采集：中、大动物用假阴道，小动物穿刺附睾来采集精液。,4、脑脊液采集：手术或小脑延髓池抽取,5、骨髓采集：大动物活体穿刺，小动物处死后取股骨或胸骨骨髓,53,6、尿液采集：,代谢笼收集,导尿管采集,膀胱穿刺,压迫排尿,54,十、麻醉,1、麻醉方法,：,全麻,吸入麻醉，静脉注射、腹腔注射。,局麻,浸润麻醉。根据手术，按皮下、筋膜、肌肉、腹膜、骨膜等顺序逐步深入注射到术野周围。,55,56,2、麻醉前准备：,禁食812,h，,防止呕吐，可饮水,根据实验部位和种类，给动物脱毛。,犬、猪、猴等大动物可在麻醉前给予一些药物以减少动物紧张，减少支气管分泌,57,阿托品：减少支气管和唾液腺分泌，防止气管阻塞。副作用：加快心率。用量：肌肉或皮下注射0.04,mg/kg,安定：产生镇静作用，加强麻醉效果，使骨骼肌松弛。用量：2.55,mg/kg,吗啡：产生镇静作用。副作用：抑制呼吸中枢。用量：皮下注射,12mg/kg，,肌肉注射1020,mg/kg.,58,3、麻醉药物：,全麻药物,乙醚：强挥发性、易燃。乙醚是最常用的吸入麻醉剂，各种动物适用。,机制：抑制中枢神经系统。,特点：安全范围大，肌肉完全松弛，对肝肾毒性小，麻醉诱导期和苏醒期较长。副作用：局部刺激大，引起上呼吸道黏膜分泌增加，导致呼吸道阻塞，可用阿托品对抗解救。,59,60,巴比妥类：种类很多，有巴比妥钠，戊巴比妥钠，硫喷妥那，苯巴比妥钠等。适用于各种动物。,特点；安全范围广，毒性小，麻醉潜伏期短，麻醉维持时间长。可腹腔或静脉给药。机理：阻断神经冲动传递到大脑。,副作用：过量使用可导致呼吸肌麻痹而死亡，同时抑制末梢循环，导致血压降低，并影响基础代谢，导致体温降低,61,氯胺酮：常用其盐酸盐。,特点：麻醉潜伏期短，麻醉维持期仅1020,min，,麻醉浅，安全性高，可重复给药。,机制：阻断大脑联络途径。,副作用：兴奋心血管系统，使血压升高，心率加快，偶尔引起呕吐。,水合氯醛：作用特点和巴比妥类相似。但安全范围小，麻醉剂量和中毒剂量接近，对皮肤和黏膜有较强刺激。,62,63,64,局麻药物,普鲁卡因：是无刺激性的局麻药物。,特点：麻醉速度快，注射后13分钟就可产生麻醉。可以维持3045分钟。对皮肤和黏膜穿透力很弱，需要注射给药才能产生局麻效果。它可以使血管舒张，易被吸收入血液而失去效果。在其溶液中加入肾上腺素（每100,ml,加入0.1%肾上腺素0.20.5,ml）,可以使麻醉时间延长12小时。,65,利多卡因：效力和穿透力比普鲁卡因强,的卡因：化学结构和普鲁卡因类似，效力和穿透力比普鲁卡因强。,66,4,、实验动物的急救,呼吸停止：,人工呼吸,尼可刹米：适用于各种原因的中枢性呼吸衰竭，每次0.25,g0.5g，,静脉注射。,戊四氮：对抗巴比妥类和氯丙嗪过量导致的呼吸衰竭，每次0.1,g，,静脉注射或心内注射,美解眠：对抗巴比妥类和水合氯醛中毒，每次50,mg，,静脉缓慢注射,67,心跳停止：,心脏按摩,针刺或脉冲电刺激,肾上腺素：用于心脏骤停的急救。每次0.51.0,ml,静脉注射,碳酸氢钠：纠正急性酸中毒。可注射肾上腺素后立即静脉注射5%碳酸氢钠12,ml/kg,68,十一、处死,1、颈椎脱臼法：小鼠、大鼠,2、空气栓塞法：兔、猫、犬等大动物,3、放血法：心脏放血或大血管放血,4、断头法：小鼠、大鼠,5、吸入二氧化碳,6、注射巴比妥类药物,69,十二、,动物的大体解剖和脏器识别,（,1,）切面术语,矢状面：是与动物体长轴平行面与地面垂直的切面。其中把动物体等分成左、右对称两半的叫正中矢面；与正中矢面相平行的所有切面均称为矢状面。,横断面：是与动物体长轴相垂直的切面，把动物体分成前、后两部分。与器官长轴相垂直的切面也叫横断面。,额切面（水平面）：与地面平行面与矢状面和横断面相垂直的切面，可把动物体分成背、腹两部分。,70,横切面,2,、矢状面,3,、额切面,4,、颅侧,(,前侧,)5,、尾侧,(,后侧,)6,、背侧,7,、腹侧,8,、内侧,9,、外侧,10,、口侧,11,、远口侧,12,、背侧,13,、掌侧、,14,、跖侧,15,、近端,16,、远端,17,、轴侧,18,、远轴侧,71,狗躯体各部名称,72,73,74,75,小鼠的淋巴系统,76,小鼠乳腺区域,77,外科手术,78,大鼠无创血压测量,79,，尸体剖检等,略,尸体需要做无害化处理：高压、焚烧、深埋等,80,