1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,血清,碱性磷酸酶活性测定,磷酸本二钠法,酶活力测定与酶法分析,酶活力测定,酶活力：即是酶活性，是表示催化某一特定反应的能力。可以用在一定条件下所催化的某一特定化学速度表示。,酶催化反应速度越快，酶活性 ，反之则愈低。,底物减少量或生成物增加量,酶促反应速度=,单位时间,影响酶促反应速度的因素包括底物浓度、酶浓度、ph值、温度、激活剂、抑制剂等。,酶活力单位指：在特定条件下1分钟能将1微摩尔底物转化为底物所需酶量，或转化底物中1微摩尔的有关基团的酶数。,酶的比活力：单位质量酶蛋白或单位体积酶制剂所含有
2、酶活力单位数。,方法：,1.终止测定法（定时法或终点法）,2.动力学分析法（连续监测法或速率法）,3.物质含量的测定方法,酶法分析,！指应用酶作为工具定量测定某种物质含量的分析方法。,（,一）单酶反应定量法,1、直接测定底物的含量,2、由辅酶变化量测定底物量,（二）偶联酶反应定量法,E,1,E,2,A B C,酶活力测定和酶法分析在医学上的应用,实验目的,1.,熟悉酶活性测定方法的一般原理,2.,掌握血清ALP测定原理与临床意义,3.,熟悉终止法和动力学测定法,实验操作,取试管4支，按下表操作,：,立即混匀。用510nm波长比色，以蒸馏水调零点，读取各管吸光度。,计算,ALP活性=（A测定A对
3、照）/（A标准A空白）*0.05*100(金氏单位）,临床意义,在临床上，血清ALP测定常作为肝胆疾病和骨骼疾病的临床辅助诊断指标。,1,血清ALP活性升高,：肝胆疾病：阻塞性黄疸、急性或慢性黄疸性肝炎、肝癌等；骨骼疾病：由于骨的损伤或疾病使成骨细胞内所含高浓度的ALP释放进入血液中，引起血清ALP活性增高，如纤维性骨炎、成骨不全症、佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复愈合期等。,2,血清ALP活性降低,：比较少见，主要见于呆小病，ALP过少症，维生素C缺乏症,。,注意事项,1底物溶液中不应含有游离酚，如有酚则空白管显红色，说明磷酸苯二钠已经开始分解，应弃去不用。,2铁氰化钾溶液中加入硼酸有稳
4、定显色作用。该液应避光保存，如出现蓝绿色即应废弃。,3加入铁氰化钾溶液后必须立即混匀，否则显色不完全。,4黄疸血清及溶血血清应分别作对照管，一般血清标本可以共用对照管,标准曲线法,制备如下：取试管6支，分别加酚标准液(1ml=01mg)，0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4ml，各管依次加复合基质液3.1、3.05、3.0、2.9、2.8、2.7ml。混匀后37水浴保温5分钟，各管加入1.0ml碱性溶液，再加0.5铁氰化钾2.0ml，立即混匀。静置10分钟，510nm波长下比色。将以上各管所得读数与其相应的碱性磷酸酶单位(依次为0.5、10、20、30、40单位)在坐标纸上作图，绘制成标准曲线。,
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