第八章革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌鉴定PPT参考课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,微生物检验,微生物学检验,国家卫生和计划生育委员会规划教材,单击此处编辑母版文本样式,#,#,微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,微生物学检验,国家卫生和计划生育委员会规划教材,单击此处编辑母版文本样式,微生物学检验,国家卫生和计划生育委员会规划教材,单击此处编辑母版文本样式,微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,#,微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,#,#,微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,#,#,微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,#,#,微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,#,#微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,#,#,微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,#,#,微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,#,#,微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,#,#,微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,#,#,微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,#,微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,#,微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,#,微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,#,微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,#,微生物学检验,单击此处编辑母版文本样式,#,微生物学检验,第八章,革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌鉴定,返回总目录,本 章 内 容,第一节 肠杆菌科,1,第二节 非发酵革兰阴性杆菌,2,第三节 弧菌科,3,第四节 其他革兰阴性苛养菌,4,学习目标及重点,学习目标：,1,掌握：肠杆菌科的共性及常见细菌的微生物检验；非发酵菌革兰阴性杆菌的共同特性；铜绿假单胞菌生物学性状、微生物学检查及临床意义,;,霍乱弧菌主要生物学特性；临床常见革兰阴性苛养菌的微生物学检验方法,2,熟悉：肠杆菌科细菌的临床意义；不动杆菌属和产碱杆菌属生物学性状、微生物学检查及临床意义；霍乱弧菌微生物常规检验程序和方法,3,了解：莫拉菌属等其他非发酵革兰阴性杆菌生物学性状、微生物学检查及临床意义；副溶血性弧菌的主要生物学特性，微生物学常规检验方法；临床常见革兰阴性苛养菌的生物学特性,1.,肠杆菌科常见菌属的鉴定、血清学诊断，与非发酵菌、弧菌科的鉴别,2.,铜绿假单胞菌、霍乱弧菌鉴定要点,本章重点：,第一节 肠杆菌科,概 述,是栖居在人和动物的肠道内的一大群形态、生物学性状相似的革兰阴性杆菌,通过粪,口途径进行传播，引起肠道感染或肠外感染,广泛分布在自然界中，包括植物、土壤、水以及人和动物的肠道中，多数是正常人肠道菌群的正常菌群，可引起医院感染。条件致病菌临床可查到四十种以上,肠杆菌科细菌包括,：,埃希菌属,志贺菌属,沙门菌属,耶尔森菌属,变形杆菌属,克雷伯菌属,摩根菌属,枸橼酸菌属,肠杆菌属,沙雷菌属等,致病菌,肠道正常菌群,条件致病菌,医院感染,第一节 肠杆菌科,肠杆菌科共同特点,形态结构,G,-,小杆菌，无芽孢，多数有,鞭毛及菌毛,培养特性,需氧或兼性厌氧,营养要求不高，普通培养基可生长，菌落相似，形成灰白色中等大小,S,型菌落，常用,肠道选择培养基,培养,氧化酶阴性，发酵葡萄糖，硝酸盐还原实验阳性,第一节 肠杆菌科,肠杆菌科细菌鞭毛染色及电镜下形态,第一节 肠杆菌科,EMB,（伊红,美兰培养基）,选择,作用,（弱选）,大肠埃希菌,（非致病菌）,乳糖,发酵,产酸,伊红,结合,美兰,形成紫蓝色金属光泽化合物,有色的乳糖发酵菌落,伤寒沙门菌等,（致病菌）,乳糖,不发酵,伊红美兰不能结合,无色的乳糖不发酵菌落,第一节 肠杆菌科,SS,培养基,（沙门志贺培养基）,（含营养物、鉴别乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等抑制剂）,伤寒沙门菌 无色乳糖不发酵菌落,选择,抑制,作用,（强选）,大肠埃希菌 产酸 桃红色乳糖发酵菌落,胆盐、煌绿：抑制大肠埃希菌及,G,+,菌，提高肠道致病菌检出率,乳糖,发酵,中性红,呈红色,乳糖,不发酵,第一节 肠杆菌科,生化反应,:,活跃，常用于鉴别肠道杆菌。发酵葡萄糖产酸或产酸产气，氧化酶（,-,），触媒（,+,），还原硝酸盐,抵抗力：,不强。耐受胆盐，抵抗多种染料的抑菌作用,抗原结构,:,菌体（,O,）抗原,鞭毛（,H,）抗原,表面（,K,、,Vi,）抗原,易出现各种变异：,耐药性（重要）,第一节 肠杆菌科,初步鉴定到科的特征,葡萄糖发酵（,+,）,硝酸盐还原,（,+,）,氧化酶,（,-,）,触酶（,+,）痢疾志贺菌除外,结合血清学鉴定到属、种（型）,硝酸盐还原试验,阳性：红色 阴性：淡黄色,氧化酶试验,阳性：紫红色 阴性：无色,第一节 肠杆菌科,一、埃希菌属（,Escherichia,）,大肠埃希菌镜下形态（上,革兰染色、鞭毛染色，下,电镜观察）,(,一）生物学特性,形态染色：符合肠杆菌特点，周鞭毛菌，有菌毛,培养特性：符合肠杆菌特点,EMB,紫黑色有金属光泽,S-S,桃红色,生化反应：,IMViC,（,+-,）,见教材表格。,抗原,O,抗原（,O,1,-O,173,）,H,抗原（,H,1,-H,56,）K,抗原（,K,1,-K,100,）,血清型表示法：,O,：,K,：,H,20,大肠埃希菌菌落特征（,MAC,）,EMB,平板上的,E.coli,(,一）生物学特性,大肠埃希菌,KIA,（,AA,）,MIU,（）,(,一）生物学特性,大肠埃希菌,IMViC,试验（）右侧为对照（）,(,一）生物学特性,埃希菌属鉴定特征,靛基质（,+,）,甲基红（,+,）,枸橼酸盐（,-,）,尿素（,-,）,发酵多种糖产酸产气,氧化型,发酵型,产碱型,肠杆菌科与其它革兰阴性杆菌区别,（二）临床意义,1.,致病物质,除内毒素、荚膜肠杆菌科共有的毒力因子外，大肠埃希菌具有独特的毒力因子有：,黏附素,具有高度特异性,吸附、定植、致病,外毒素（由,ETEC,产生的肠毒素）,不耐热肠毒素（,heat labile toxin,，,LT,）,，加热,65,、,30,分钟即被破坏；,耐热肠毒素（,heat stable toxin,，,ST,）,，100,、20分钟仍不被破坏，,LT,和,ST,均可使肠道细胞中,cAMP,的水平升高，引起肠液大量分泌而导致腹泻,2.,所致疾病：,肠道外感染（内源性感染）,1.,化脓性感染,定位转移,腹膜炎、阑尾炎、创伤感染、手术刀口感染、肺炎、败血症、新生儿脑膜炎等,2.,泌尿道感染,病原菌来自病人肠道（上行性）,占泌尿道感染首位、女性多见（尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎等）,（二）临床意义,引起肠道感染的大肠埃希菌的主要致病特征,菌株,致病机制,感染类型,主要临床表现,发病年龄,危险因素,ETEC,LT,和,ST,腹泻，旅行者腹泻,大量水样便，腹痛、恶心、脱水,成人、儿童,旅行,EPEC,黏附因子,急性腹泻,水样便、发热、呕吐、黏液便,2,岁婴儿、成人,EIEC,侵入结肠黏膜上皮,志贺样脓血便,脓血便，便中含红、白细胞和黏液，发热、腹痛,成人,旅行,EHEC,类志贺毒素,腹泻、出血性肠炎,腹泻（无,WBC,），腹痛、血便、发热、,HUS,儿童、老人,未熟牛肉,牛奶,EAEC,未明,急、慢性腹泻,水泻、呕吐,所有年龄,耐药性,耐药性越来越严重：产超广谱,-,内酰胺酶（,ESBL),比例增高，对青霉素类和,1,4,代头孢菌素及单环菌素耐药，仅对头霉素类、碳青霉烯类、含酶抑制剂类抗生素敏感。,（三）微生物学检验,肠道外感染,标本涂片、染色分离培养鉴定,尿路感染时每,ml,尿含菌,10,万，有诊断价值,肠道内感染,用弱选择性培养基,分离培养,+,生化反应,+,血清分型,+,毒素测定,+,核酸检测等,大肠埃希菌检验程序,1,）,ETEC,生化反应加血清分型加肠毒素测定,2,）,EPEC,生化反应加血清分型，用多价抗血清检测其,O,抗原,3,）,EIEC,生化反应血清分型加毒素测定,4,）,EHEC,血清分型加生化反应,各个血清型的鉴定,二、沙门菌属,是肠杆菌科中最复杂的菌属，有,2000,种以上血清型，,对人类有致病性。,肠热症,伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌、乙型伤寒沙门菌、丙型伤寒沙门菌,食物中毒,鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌,败血症,猪霍乱沙门菌最常见,（一）生物学性状,形态染色,符合肠杆菌特点，多为周毛菌，有菌毛,伤寒沙门菌菌落特征（,SS,）,培养特点,无色细小菌落。有些能产生硫化氢的菌株，在,SS,琼脂上形成中心黑色的菌落,生化反应,乳糖（,-,），葡萄糖（,+,）,/+,，多数,H,2,S+,，动力,+,，尿素（,-,），甲基红（,+,），枸橼酸盐利用（,+,），赖氨酸脱羧酶（,+,），产酸产气,伤寒沙门菌,KIA,结果,（,K A,）MIU,（）,沙门菌,IMViC,试验（）,（一）生物学性状,抗原结构,O,抗原,特异性低、稳定、分群（组）,H,抗原,特异性高，不稳定，分型,Vi,抗原（毒力抗原）,不稳定，可阻止,“,O,”,凝集,抵抗力：不强,（一）生物学性状,肠热症,临床过程,潜伏期,2,周,发病初期：,第,1W,（第一次菌血症）、高热、肝脾肿大、皮疹、,WBC,等全身中毒症状，此期血液（,80%,）、骨髓,90%,（,+,）有大量细菌,（二）临床意义,菌毛,穿入淋巴液,胸导管,第二次菌血症,迟发型变态反应,肠壁坏死、溃疡,高热、肝脾肿大、玫瑰疹、白细胞等全身中毒症状,肝 脾 肾 淋巴结 胆囊,尿排菌 粪便排菌,发病期,（,1-4W,）,潜伏期,2W,肠热症发病机制,伤寒沙门菌等经口,吸附小肠黏膜细胞上,在肠壁、肠系膜淋巴组织中繁殖（致敏）,血流（第一次菌血症）,肠出血、肠穿孔,胃肠炎（食物中毒）,潜伏期短，,6,24,小时，起病急，病程短,2,4,天，,发热、恶心、呕吐、腹痛、腹泻,败血症,经口感染，经肠道入血，败血症症状明显而,肠道症状不明显,带菌者,健康带菌者，恢复期带菌者,免疫性,肠热症，病后免疫牢固，其它可重复感染,（二）临床意义,（三）微生物学检验,分离培养与鉴定,标本采取,肠热症：第,1,2,周，血；第,2,3,周，粪便、尿；全过程骨髓培养,食物中毒：粪便、呕吐物、可疑食物,败血症：血,带菌者：粪便,分离鉴定,：,增菌（血、骨髓）,EMB,、,SS,生化反应血清鉴定,沙门菌检验程序,、,血清学诊断,肥达反应（,Widal,）,-,原理,用已知伤寒沙门氏菌,O,抗原及,H,抗原，以及引起副伤寒的沙门氏菌,H,抗原与待检血清作凝集试验，测定待检血清中有无相应抗体及其效价。（,TO,、,TH,、,PA,、,PB,）,-,方法：试管凝集法（定量）,-,结果分析：,TO80,，,TH160,，,PA,、,PB,均,80,才有意义,-,动态观察：双份血清抗体四倍升高有诊断意义,-,临床意义,O,抗体（,IgM,），,H,抗体（,IgG,）,O,、,H,抗体均升高，患伤寒的可能性大,O,、,H抗体不升高，患伤寒的可能性小,只有,H,升高，则可能是预防接种过或非特异性回忆反应,只有,O,升高而,H,不高，则可能是感染早期或其他沙门菌的交叉反应,三、志贺菌（痢疾杆菌）,志贺菌形态特征,（一）生物学性状,形态染色,符合肠杆菌特征，有菌毛，,无鞭毛，无动力,是本菌与其它肠道致病菌主要区别点,培养特性,肠道鉴别培养基上的无色透明、,乳糖不发酵菌落,生化反应,葡萄糖（,+,）、乳糖（,-,）（宋内志贺菌迟缓发酵乳糖）、,H,2,S,（,-,）、尿素（,-,）、动力（,-,）,乳糖发酵实验,（一）生物学性状,未发酵,发酵,志贺菌,KIA,结果（,KA,）,MIU,（）,志贺菌,IMViC,试验结果（）,（一）生物学性状,抗原分类,根据,O,抗原分,4,群，,40,余型,A,群,痢疾志贺菌（,10,）,B,群,福氏志贺菌（,13,）,C,群,鲍氏志贺菌（,18,）,D,群,宋氏志贺菌（,1,）,抵抗力 比其它肠杆菌弱，尤其对酸敏感,（一）生物学性状,（二）致病性与免疫性,致病物质,侵袭力,菌毛：黏附肠黏膜上皮细胞,型分泌系统,穿透上皮细胞并扩散、传播,内毒素,强烈内毒素，作用于局部并可吸附入血引起全身症状,外毒素,A,群（,、,型）产生志贺毒素（,ST,），有,3,种生物活性,（,1,）肠毒素：类似,ETEC,毒素、霍乱肠毒素作用,水样泻,（,2,）细胞毒性：对人肝细胞、肠黏膜细胞有毒性，引起变性坏死,（,3,）神经毒性：损伤动物神经系统（麻痹、死亡）,细菌（菌毛）吸附肠黏膜上皮细胞,穿入细胞并扩散周围及深入黏膜下层,释放内毒素、外毒素,肠局部,黏膜炎症,（变性、坏死、脱落）,出血、坏死、溃疡,脓血便,/,黏液血便,刺激肠壁植物神经,肠蠕动,肠肌痉挛,腺体分泌,水分吸收,腹痛、腹泻,刺激直肠肛门括约肌,里急后重,便数增加,吸收入血,发热、白细胞,高热、休克中毒性脑病、,DIC,毒血症,中毒性菌痢,死亡,（二）致病性与免疫性,所致疾病,细菌性痢疾,传染源：病人、带菌者,传播途径：经口,致病机制,临床类型,急性菌痢,中毒性菌痢,慢性菌痢,带菌者,免疫力,:,不牢固，易再感染,二）致病性与免疫性,（三）微生物学检验,在抗生素使用前采集新鲜粪便中脓、血、黏液部分，床边接种或立即送检，不能及时接种者可用卡,-,布运送培养基送检，昏迷不能排便病人可用肛拭取样。,微生物学检查,分离鉴定,毒力实验,快速诊断,志贺菌检验程序,四、克雷伯菌属（,7,个种）,(,一）生物学特性,肺炎克雷伯菌（,3,个亚种）的肺炎亚种，与人类感染有关,G,-,球杆菌，无动力，有较厚的荚膜，多有菌毛,普通平板呈,M,型菌落（易拉成丝）,存在正常人体，目前为除大肠埃希菌以外最重要的条件致病菌,肺炎克雷伯菌革兰染色阴性杆菌，无动力,荚膜肿胀试验阳性,肺炎克雷伯菌的菌落特征（左,血琼脂平板，右,MAC,平板,）,克雷伯菌属鉴别,菌落较大，黏稠，挑取时易拉成丝,肺炎克雷伯菌黏丝试验,肺炎克雷伯菌,KIA,（,A A,）、,MIU,（）,肺炎克雷伯菌黏丝试验,肺炎克雷伯菌,IMViC,试验（）,肺炎克雷伯菌粘丝试验,克雷伯菌属的细菌多感染免疫力低下的人群，是医院感染中最重要的条件致病菌,肺炎克雷伯菌是临床标本中常见的细菌，可引起典型的原发性肺炎,该菌在正常人口咽部的带菌率为,1%,6%,，在住院患者中可高达,20%,，是酒精中毒者、糖尿病和慢性阻塞性肺部疾病患者并发肺部感染的潜在的危险因素,（二）临床意义,所致疾病,肺炎、脑膜炎、腹膜炎、泌尿系统感染、败血症,肺炎克雷伯菌肺炎亚种还能引起各种肺外感染，包括肠炎和脑膜炎（婴儿），泌尿道感染（儿童和成人）及菌血症,近年在一些亚洲地区（特别是台湾和韩国）由肺炎克雷伯菌引起的肝脓肿等严重社区获得性侵袭性感染有上升的趋势,（二）临床意义,耐药性,对氨卞西林和羧卞西林天然耐药,肺炎克雷伯菌易产生超广谱,-,内酰胺酶（,ESBL,）,近年来文献报道我国产酶率已达,30%,左右，产酶株对青霉素类、第,1,、,2,、,3,代头孢菌素及单环,-,内酰胺类抗生素均产生耐药，而仅对头霉素类、碳青霉烯类及酶抑制剂敏感,ESBL,检测现已作为医院细菌室常规检测项目,（二）临床意义,五、变形杆菌属,变形杆菌的周身鞭毛,迁徙生长,革兰阴性杆菌，有多形性，周身鞭毛，运动活泼，在普通培养基上呈扩散性生长，称为迁徙生长现象,变形杆菌,KIA,结果（,K A+,）,MIU,（,+/-+,）,变形杆菌苯丙氨酸脱氨酶试验（）,五、变形杆菌属,迅速分解尿素，尿素（,+,）为本菌特征，乳糖（,-,）,外斐试验（,Weil-Felix,）：,变形杆菌某些特殊菌株如,X,19,、,X,2,、,X,K,的,O,抗原与某些立克次氏体有共同抗原成分，临床上应用,OX,19,、,OX,2,、,OX,K,代替立克次氏体抗原与斑疹伤寒或恙虫病患者血清做凝集试验，以辅助诊断立克次体病,五、变形杆菌属,六、肠杆菌属,产气肠杆菌（,E.aerogenes,）,阴沟肠杆菌（,E.cloacea,日勾维肠杆菌（,E.gergoviae,）,阪崎肠杆菌（,E.sakazakii,）,中间型肠杆菌（,E.intermedium,）,泰洛肠杆菌（,E.taylorac,）,河生肠杆菌（,E.amnigenus,）,阿氏肠杆菌（,E.asburiac,）,致癌肠杆菌（,E.cancerogenus,）,溶解肠杆菌（,E.dissolvens,）,超压肠杆菌（,E.nimipressualis,）,阴沟肠杆菌革兰染色,革兰阴性粗短杆菌，有周身鞭毛，无芽胞，有些菌株有荚膜,（一）生物学特性,阴沟肠杆菌菌落特征,(MAC),兼性厌氧，营养要求不高，在普通培养基上能够生长，形成大而湿润的黏液状菌落在血琼脂上不溶血,在肠道选择培养基上形成乳糖发酵（呈红色）的菌落,（一）生物学特性,生化特征,IMViC,试验,大肠埃希菌为,+-,肠杆菌属细菌大多为,-+,动力和鸟氨酸脱羧酶试验,肺炎克雷伯菌为阴性,肠杆菌属多数为阳性,（二）临床意义,肠杆菌属是肠杆菌科中最常见的环境菌群，医院感染的重要病原菌。在临床微生物室检出率最高的是阴沟肠杆菌和产气肠杆菌，可引起泌尿道感染、呼吸道感染、伤口感染以及败血症,肠杆菌科细菌常产生,AmpC,酶，尤以阴沟肠杆菌最为突出。它是导致革兰阴性菌尤其是阴沟肠杆菌对,1,3,代头孢菌素、单环,-,内酰胺类、头霉素类及含酶抑制剂的复合制剂耐药的重要原因,产,AmpC,酶细菌的治疗，首选,4,代头孢（头孢吡肟）和碳青霉烯类抗生素。近年来已有质粒介导的,AmpC,酶出现,4157,株阴沟肠杆菌对常用抗菌药物的耐药率,耐药率,(%),亚胺培南,头孢哌酮,/,舒巴坦,哌拉西林,/,他唑巴坦,氨苄西林,/,舒巴坦,头孢曲松,环丙沙星,左氧沙星,头孢吡肟,头孢呋辛,头孢唑啉,七、耶尔森菌属,鼠疫耶尔森菌属肠杆菌科耶尔森菌属，俗称鼠疫杆菌，是我国法定烈性传染病鼠疫的病原体,历史：三次世界性大流行,目前：仍有散在及爆发（死亡率,10,30%,）,监控：是我国重点监控的自然疫源性传染病,（一）生物学性状,形态染色：,G,球杆菌，两极浓染，有荚膜，无鞭毛，无芽胞，慢性病灶，陈旧培养物，高盐培养基上呈多形性。,抗原构造,：复杂,F1,抗原,荚膜抗原,V/W,抗原,毒力抗原,外膜蛋白,突破防御、增强致病性,鼠毒素（外毒素）,对鼠类有剧烈毒性,内毒素,发热、休克、,DIC,等,抵抗力,：对理化因素抵抗力弱，但在自然环境中存活时间长,（二）致病性与免疫性,致病物质,F1,、,V/W,、外膜抗原、鼠毒素、内毒素等，实质器官出血性炎症、组织坏死及全身中毒症状。该菌毒力强，少量细菌即可致病,所致疾病,烈性传染病,鼠疫（黑死病）,流行环节,传播媒介,:,鼠蚤,传播途径,:,叮咬伤口、呼吸道,临床类型,腺鼠疫,肺鼠疫,败血症鼠疫,专用实验室检测,警惕生物武器,检测动物鼠疫动态,灭鼠灭蚤,接种疫苗,抗菌素治疗,一旦疑为本菌，应立即向本地区疾病控制中心等部门报告，并将菌种送检验中心或专业实验室作进一步鉴定。诊断确立后除对患者进行隔离治疗外，对疫区及有关人员须采取有效的预防隔离措施，防止疫情扩散,（三）微生物学检验及防治,鼠疫耶氏菌与小肠结肠炎耶氏菌,鉴别,甲基红（,+,），甘露醇（,+,），苯丙氨酸（,-,），丙二酸盐（,-,），,H2S,（,-,），,37,培养动力（,-,）,鼠疫耶氏菌液体培养基中钟乳石样,小肠结肠炎耶氏菌,25,、动力（,+,），嗜冷性，,4,生长，,25,、,VP,（,+,），,37,（,-,）,均不发酵乳糖,小肠结肠炎耶氏菌,440,均能生长，,2028,才能表现其特征,返回章内容,一、概述,1.,概念：非发酵革兰阴性杆菌是一群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌,2.,生物学特性：,氧化酶试验：除不动杆菌和个别假单胞菌外，均为阳性；,O/F,试验：氧化型（开管产酸，闭管不变）,半固体培养基上观察动力不明显,第二节 非发酵革兰阴性杆菌,3.,多为条件致病菌。近年来，由非发酵菌引起的感染日益增多，尤其在医院感染中铜绿假单胞菌、不动杆菌等占有重要地位，同时由于非发酵菌对抗生素的耐药率日益增高，给临床治疗带来困难，已引起临床高度重视,第二节 非发酵革兰阴性杆菌,二、主要菌种,1.,假单胞菌属,2.,不动杆菌属,3.,产碱杆菌属,4.,无色杆菌属,5.,莫拉菌属,6.,金氏杆菌属,7.,黄杆菌属,8.,艾肯菌属,9.,土壤杆菌属,10.,黄单胞菌属,11.,丛毛单胞菌属等,第二节 非发酵革兰阴性杆菌,假单胞菌属,1.,假单胞菌属（,Pseudomonas,）为严格需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验均阳性，是假单胞菌科的代表菌属，包括,200,多个菌种,2.,假单胞菌属是一类无芽胞、散在排列的革兰阴性杆菌，菌体直或微弯，有单鞭毛或丛鞭毛，运动活泼，专性需氧,3.,与人类关系密切的有,铜绿假单胞菌,、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等，是医院感染的主要病原菌,第二节 非发酵革兰阴性杆菌,一、生物学性状,1.,形态染色：革兰阴性细长杆菌，有荚膜，单鞭毛，运动活泼,2.,培养特性：营养要求不高，专性需氧，,4,不生长，,42,可生长,铜绿假单胞菌,革兰染色,鞭毛电镜观察,3.,普通培养基上生长，,80,90,产生各种水溶性色素，如绿脓素和荧光素,铜绿假单胞菌,铜绿假单胞菌荧光素,铜绿假单胞菌绿脓素,铜绿假单胞菌,4.,生化反应,氧化酶阳性,氧化分解葡萄糖、木糖产酸不产气,液化明胶,还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生氮气,吲哚阴性,利用枸橼酸盐,精氨酸双水解酶阳性,铜绿假单胞菌,5.,抗原构造与分型,菌体（,O,）抗原,鞭毛（,H,）抗原,外膜蛋白：具有属的特异性,脂多糖：具有型特异性,铜绿假单胞菌,6.,抵抗力,抵抗力强,对干燥、紫外线有抵抗力,对热抵抗力不强，56 30min 可被杀死,对某些消毒剂敏感，1%石炭酸处理5min 即被杀死,临床分离菌株对多种抗生素不敏感,铜绿假单胞菌,二、微生物学检查,1.,标本采集：血液、痰液、脑脊液、胸（腹）水、尿液、脓液、分泌液、粪便等；医院环境监控，可采集空气、水、物品表面等,2.,直接镜检：涂片、革兰染色,3.,分离培养：直接接种或增菌后接种血平板和,MAC,4.,鉴定：根据菌落特征、色素、菌体形态、生化反应等作出鉴定。对无色素菌株应与其他假单胞菌鉴别,铜绿假单胞菌,三、铜绿假单胞菌鉴定程序,标本,增菌,分离培养,（血平板）,最后鉴定,可疑菌落（性状、色素）,初步鉴定,涂片,染色镜检,血标本,涂片镜检,氧化酶,菌落特征,绿脓素,气味,42,生长,分型,生化鉴定：,O/F,O,枸櫞酸盐利用,精氨酸双水解,乙酰胺酶,明胶液化,铜绿假单胞菌,四、铜绿假单胞菌与其他假单胞菌的鉴别,铜绿假单胞菌,荧光假单胞菌,恶臭假单胞菌,韦龙氏假单,胞菌,产碱假单胞菌,氧化酶,99,97,100,100,96,溴化,-16-,烷基,-3-,甲胺生长,94,89,87,ND,15,6.5%,氯化钠生长,65,43,100,ND,41,42,生长,100,0,0,0,0,硝酸盐还原,98,19,0,100,54,青脓素,65,96,93,100,0,精氨酸双水解酶,100,97,100,100,12,尿素水解,57,52,75,25,0,明胶水解,82,100,0,13,0,葡萄糖产酸,97,100,100,100,0,枸橼酸盐,95,93,100,ND,65,铜绿假单胞菌,五、铜绿假单胞菌鉴定依据,1.,革兰阴性杆菌，动力阳性，单鞭毛,2.,菌落特征、色素、生姜气味,3.4,不生长，,42,生长,4.,氧化酶（,+,）、氧化分解葡萄糖,5.,乙酰胺水解（,+,）、还原硝酸盐生成氮气,6.,精氨酸双水解（,+,）,铜绿假单胞菌,六、临床意义,1.,主要致病物质：铜绿假单胞菌有多种致病因子，包括结构成分、毒素和酶，如粘附素、多糖荚膜样物质、内毒素、外毒素,A,、弹性蛋白酶、磷脂酶,C,等,2.,所致疾病,条件致病菌：免疫力低下者易感染,医院内感染的主要菌之一,临床表现多样，引起化脓性感染，如烧伤感染、呼吸道感染、中耳炎、眼角膜炎等，合并败血症者死亡率高,3.,药物敏感性：对抗假单胞菌青霉素类、氨基糖苷类、环丙沙星、头孢吡肟、头孢他定、美罗培能、亚胺培南敏感。医院获得性铜绿假单胞菌较社区分离株有较高的耐药性，常显示多重耐药,铜绿假单胞菌,七、防治原则,1.,铜绿假单胞菌可由各种途径传播，但主要是通过污染医疗器械、用具及带菌医护人员引起医源性感染,2.,结合临床感染症状，如果无临床症状则为正常菌群,3.,临床治疗严格遵循药敏试验结果用药,铜绿假单胞菌,1.,不动杆菌属为一群不发酵糖类，氧化酶阴性，无动力的革兰阴性杆菌,2.,广泛存在于自然界，是引起医院感染的病原菌之一,3.,已命名的有六个种，即醋酸钙不动杆菌（,A.calcoaceticus,）、洛菲不动杆菌（,A.lwoffi,）、溶血不动杆菌（,A.haemolytius,）、鲍曼不动杆菌（,A.baumanii,）、琼氏不动杆菌（,A.junii,）、约翰逊不动杆菌（,A.johnsonii,）,4.,临床标本中分离到的不动杆菌绝大多数是鲍曼不动杆菌，其他菌种引起的感染相对较少,不动杆菌属,一、生物学性状,1.,形态与染色：革兰阴性杆菌，常成双排列多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛,2.,培养特性：,专性需氧，营养要求不高,最适温度：,35,，鲍曼不动杆菌,42,可生长,不动杆菌属,不动杆菌属,一、生物学性状,3,.菌落：,血平板上菌落圆形凸起，中等大小，光滑、边缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状，不产色素,4,.麦康凯平板上形成粉红色菌落,5.,生化反应：氧化酶阴性，触媒阳性，,O/F,为氧化型，动力阴性，硝酸盐还原试验阴性,不动杆菌属,醋酸钙不动杆菌菌落（,MAC,）,鲍曼不动杆菌菌落（,MAC,）,不动杆菌属,二、微生物学检查,1.,标本采集：血液、尿液、痰液、脓液、脑脊液等,2.,直接镜检：标本涂片革兰染色镜检，为革兰阴性球杆菌，常成双排列,3.,分离培养：血平板和,MAC,4.,初步鉴定：革兰染色阴性球杆菌，成双排列，氧化酶（），,O/F,试验为氧化型，动力（），硝酸盐还原试验（）,5.,符合上述试验结果即可判定为不动杆菌属的细菌，再进行属内细菌鉴别,不动杆菌属,不动杆菌属主要菌种的鉴别要点,醋酸钙不动,杆菌,鲍曼不动,杆菌,溶血不动杆菌,琼氏不动,杆菌,约翰逊不,动杆菌,洛菲不动,杆菌,葡萄糖氧化,木糖氧化,乳糖氧化,精氨酸双水解酶,鸟氨酸脱羧酶,苯丙氨酸脱氨酶,丙二酸盐利用试验,柠檬酸盐利用试验,明胶液化,37,生长,42,生长,不动杆菌属,三、临床意义,致病物质：致病机制尚不完全清楚，未发现不动杆菌能分泌毒素或细胞溶解素，其致病力主要由荚膜、菌毛、产物酶、脂质及载体等组成,2.,所致疾病：本属细菌为条件致病菌，在非发酵菌中本菌的分离率仅次于铜绿假单胞菌，也是医院感染的主要病原菌之一，常引起呼吸道、消化道及泌尿生殖道感染,3.,药物敏感性：对青霉素、氨苄西林和头孢拉啶耐药；多数菌株对氯霉素耐药；对复方新诺明、哌拉西林,/,他唑巴坦、多西环素、和氟喹诺酮类较敏感,产碱杆菌属,1.,产减杆菌属为一群有动力，专性需样，不分解糖类的革兰阴性杆菌,2.,包括粪产碱杆菌（,A.faecalis,）和木糖氧化产碱杆菌两个种,3.,广泛存在于自然界，水、土壤和人体皮肤黏膜均有其存在,4.,典型菌种是粪产碱杆菌,产碱杆菌属,一、生物学特性,1.,形态与染色：革兰阴性短杆菌，成对或链状排列，有周鞭毛，无芽胞，多数无荚膜,2.,培养特性：专性需氧，最适生长温度,25,35,，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，麦康凯和,SS,平板亦可生长,产碱杆菌属,一、生物学特性,3.,生化反应：氧化酶阳性，触酶阳性，不分解糖类，O/F为产碱型，利用枸橼酸盐，部分菌株能还原硝酸盐,产碱杆菌属,二、微生物学检验,1.,标本采集：血液、尿液、痰液、脓汁、脑脊液等,2.,显微镜检查：脑脊液、尿液离心取沉淀涂片，脓汁和痰液可直接涂片革兰染色镜检，为革兰阴性短杆菌，有周鞭毛,3.,分离培养：血平板和,MAC,4.,生化反应：不分解任何糖类，,O/F,不分解糖类呈碱性，氧化酶阳性，触酶阳性，分解胺类产碱,产碱杆菌属,常见产碱杆菌的特性鉴别要点,粪产碱,杆菌,皮乔特,产碱杆菌,粪产碱杆菌型,木糖氧化产碱杆菌,42,生长,亚硝酸盐还原,硝酸盐还原,丙二酸盐,木糖,产碱杆菌属,三、临床意义,1.,致病物质：本属中临床分离最常见的是粪产碱杆菌，大部分感染是条件致病，主要来自潮湿环境，如雾化器、呼吸机和灌洗液等，血、痰、尿、脑脊液等是常见的发现部位，是医院感染的病原菌之一。其致病物质主要是菌体成分如内毒素等,2.,所致疾病：可致抵抗力低下的患者发生菌血症，也可引起呼吸道、泌尿道及中枢神经系统感染,3.,药物敏感性：药物敏感试验的药物选择与假单胞菌相同。临床治疗可用哌拉西林及替卡西林,其他非发酵革兰阴性杆菌,常见的有莫拉菌属、金黄杆菌属、伯克霍尔德菌属、丛毛菌属、食醋菌属、寡养单胞菌属等,莫拉菌属,金黄杆菌属,伯克霍尔德菌属,丛毛菌属,食醋菌属,寡养单胞菌属,氧化酶,100,100,72,100,100,0,麦康凯生长,40,90,91,100,100,100,42,生长,33,50,35,68,50,48,硝酸盐还原,55,33,65,96,100,39,硝酸盐产气,0,0,33,0,33,0,精氨酸双水解酶,0,0,50,0,67,0,赖氨酸脱羧酶,0,0,20,0,0,93,鸟氨酸脱羧酶,0,100,15,0,0,1H,2,S,67,98,v,0,100,95,水解尿素,10,60,60,7,83,3,水解明胶,0,60,70,0,33,93,葡萄糖产酸,0,80,100,0,100,85,乳糖产酸,0,70,67,0,0,60,枸橼酸盐利用,0,60,v,47,33,34,动力,0,0,77,100,100,100,案例分析,【,病例资料,】,患者，男，,50,岁。,12,天前因劳累后突起畏寒、发热,39.7,，伴有咳嗽咯痰，食欲减退，伴乏力。,20,小时前突然咳出大量黄绿色脓痰，伴咯血，立即转院。体格检查：体温,38.7,，发热面容。右下肺扣诊浊音，可闻及罗音。胸片示右中下肺野有一,5cm4cm,空洞，并可见厚液平，空洞四周为浓密的炎症浸润阴影。,【,问题,】,请问该患者可能患何种疾病？可能是什么细菌感染？如何进行微生物检验辅助诊断病情？,返回章内容,一、弧菌科共同特征,1.,革兰阴性菌，短小弯曲弧状,无芽胞，多数有鞭毛，有菌毛，具有一端单鞭毛、运动迅速,2.,需氧或兼性厌氧,3.,氧化酶试验（）,4.,发酵葡萄糖产酸不产气，许多菌株生长需要2%3%氯化钠,5.,弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中最为多见,第三节 弧菌科,二、弧菌科分类,非,O1,群霍乱弧菌,弧菌属,弧菌科,气单胞菌属,邻单胞菌属,发光杆菌属,O1,群霍乱弧菌,副溶血弧菌,拟态弧菌,第三节 弧菌科,三、弧菌科三个属的特性特性,弧菌属,气单胞菌属,邻单胞菌属,氧化酶,葡萄糖发酵,甘露醇产酸,/,明胶液化,鸟氨酸,/,精氨酸,/,O/129,敏感,S,R,S,TCBS,生长,嗜盐性,/,第三节 弧菌科,弧菌属,1.,弧菌属共有36个种，分为四大类：,O1,群霍乱弧菌，不典型,O1,群 霍乱弧菌，非,O1,群霍乱弧菌，其他弧菌,2.,多为非致病菌，但有部份为强致病菌,3.,霍乱弧菌,-,引起霍乱,4.,副溶血弧菌,-,引起食物中毒,概要,1.,霍乱弧菌（,V.cholera,）分为古典生物型和埃尔托（,Eltor,）生物型两个生物型，,2.,引起霍乱的病原体。霍乱为一种烈性肠道传染病，发病急，传染性强，死亡率高。3.1992,年在印度、孟加拉等国发现一个新的流行株,O139,群。,霍乱弧菌,霍乱弧菌,一、生物学特性,1.,形态与染色：革兰阴性，呈弧形、月牙形或逗点状，无芽胞，有菌毛，有单端鞭毛，运动活泼。取患者米泔水样粪便作悬滴观察，可见该菌呈穿梭样或流星状运动,霍乱弧菌,霍乱弧菌,霍乱弧菌,霍乱弧菌在,TCBS,琼脂平板上形成,发酵蔗糖的较大的黄色菌落,一、生物学特性,2.,培养特性：耐碱不耐酸，营养要求不高。生长迅速,pH,8.8,9.0,的碱性蛋白胨水/碱性琼脂平板上生长良好,霍乱弧菌,霍乱弧菌在含亚碲酸钾的琼脂平板上将碲离子还原成原子态的碲，形成有灰褐色中心的菌落,霍乱弧菌,3.,抗原构造与分型：根据,O,抗原的不同将霍乱弧菌分为,155,个血清群，其中,O1,群、,O139,群引起霍乱，,O2,群,O138,群只引起人类胃肠炎，不引起霍乱流行，称之非,O1,群霍乱弧菌,4.,抵抗力：,霍乱弧菌在淡水及海水中存活,1,3,周。对热、干燥、日光、酸、消毒剂敏感，耐碱力较强。,100,，,1,2min,即死亡；在正常胃酸中仅能生存,4min,；,0.5ppm,氯,15min,能杀死；对链霉素、氯霉素和四环素敏感，对庆大霉素耐药,霍乱弧菌,二、微生物学检验,1.,标本采集：,采集粪便标本，采集的标本应及时接种于碱性蛋白胨水增菌。不能及时接种者，应将标本置于文,-,腊二氏保存液或卡,-,布运送培养基中由专人运送,2.,涂片染色镜检：取标本直接涂片革兰染色，油镜下观察到呈鱼群状排列的革兰阴性弧菌可初步报告,3.,动力及制动试验：取患者粪便制成悬滴（或压滴）标本，观察细菌动力，见穿梭或流星样运动，,O1,群霍乱弧菌多价血清制动试验阳性，可早期报告,霍乱弧菌,二、微生物学检验,4.,分离培养：将粪便标本经过碱性蛋白胨水增菌后，用,TCBS,琼脂和碱性琼脂平板分离培养，挑取可疑菌落进行鉴定,5.,鉴定：与01群和,O139,群抗血清(多价和单价）凝集，菌落和菌体形态、氧化酶试验等作出初步报告。根据纯培养后全面生化反应、血清学分群及分型,霍乱弧菌,三、临床意义,1.,致病物质：菌毛定植霍乱肠毒素,2.,所致疾病：引起霍乱，为肠道烈性传染病，主要是通过污染的水源或食物经口摄入。临床表现为剧烈上吐下泻，严重脱水、酸中毒、痉挛、尿闭、休克、死亡,霍乱弧菌,四、免疫性,1.,感染霍乱弧菌后，机体可获得牢固免疫力,2.SIgA,起主要作用,3.O1,群的免疫对,O139,无保护作用,五、防治原则,1.,控制传染源,2.,切断传播途径：改善社区环境，加强水源管理,3.,提高易感者免疫力：疫苗预防接种,4.,治疗：及时补充液体和电解质,副溶血性弧菌,一、生物学性状,1.,形态与染色：为革兰阴性菌、直或微弯的杆菌，在不同培养基上菌体形态差异较大，有卵圆形、棒状、球杆状、梨状、弧形等多种形态。无芽胞、无荚膜,副溶血性弧菌,TCBS,琼脂上显绿色（蔗糖不发酵）菌落,一、生物学性状,2.,培养特性：本菌营养要求不高，需氧或兼性厌氧，具有嗜盐性。在,3.5,NaCl,琼脂平板上呈蔓延生长，菌落边缘不整齐。在,TCBS,琼脂上形成,1,2mm,、不发酵蔗糖而呈蓝绿色的菌落，与霍乱弧菌相区别,副溶血性弧菌,3.,神奈川现象：从粪便中分离的致病菌株能使人或兔红细胞发生溶血，对马红细胞不溶血,4.,抵抗力：本菌抵抗力弱，不耐热，,90,，,1min,即死亡。耐碱不耐酸，在,1,醋酸或,50,食醋中,1min,死亡。在淡水中生存不超过,2,天，但在海水中能存活,47,天以上,副溶血性弧菌,二、微生物学检验,1.,标本采集：可采集患者的粪便、肛门拭子和可疑食物。采集的标本应及时送检，如不能及时送检，应将标本置于,3.5,NaCl,蛋白胨水或卡,-,布运送培养基中送检,2.,增菌培养：取标本,0.5,1ml,接种于,3.5,NaCl,蛋白胨水中，,35,培养，若有本菌存在，一般数,h,后会出现明显混浊，即可分离培养,副溶血性弧菌,二、微生物学检验,3.,分离培养：将标本或增菌培养物接种于,TCBS,平板或,3.5,NaCl,琼脂培养基，,35,培养,18,24h,观察结果。副溶血性弧菌在,TCBS,平板上因不发酵蔗糖，形成,1,2mm,、绿色或蓝绿色、不透明的菌落,4.,鉴定：根据其形