NPN鉴别方法.pptx

一.目前NPN的种类A 铵盐(NH4HCO3、(NH4)2SO4、NH4Cl)、尿素B 尿素的衍生物:缩二脲、磷酸脲、淀粉糊化尿素、脲醛聚合物(蛋白精)、糠醛尿素、糖基化尿素C 叠氮化钙CaN6D 三聚氰胺C3N6H6脲醛聚合物和三聚氰胺是目前最常用的NPN脲醛聚合物(蛋白精)(CP=10元),三聚氰胺(CP=20元)第1页/共29页二.NPN的鉴别(1)-尿素n试剂:1.生黄豆粉。将大豆磨成粉末（注意；切勿加热升温)2.酚红：g/L。称取酚红（苯酚红）0.1g溶于100ml乙醇中。n步骤：取约0.5-2g样品，于50ml比色管内，再加约0.1-0.2g生黄豆粉，35滴酚红，40ml水，塞好塞子，摇动30秒，静止，如溶液变成红色，则样品中掺入尿素 第2页/共29页二.NPN的鉴别(1)-尿素n定量分析:n称样1-3g于碘量瓶内,加生豆粉约1克,准确加入100ml水,在30C摇动1h,过滤,取滤液50ml于蛋白仪内,加NaOH(30%)10ml,用硼酸吸收,再用盐酸滴定,同时做样品和生豆粉空白.nCP=(V-V0-V01)xCx0.014x6.25mx50/100 x100第3页/共29页二.NPN的鉴别(2)-铵盐 试剂1.氢氧化钠溶液,g氢氧化钠加ml水。2.PH 试纸 步骤：取样品3-5g于100ml 烧杯内，表皿内侧沾一条湿的PH试纸，向烧杯内加约5-10ml 氢氧化钠，将表皿迅速盖上，如试纸迅速变蓝，打开表皿有很浓的氨味则含铵盐。第4页/共29页二.NPN的鉴别(3)-脲醛聚合物(蛋白精 试剂：变色酸 2g/L硫酸溶液 称取0.2g变色酸于干燥的烧杯内，加入100 ml浓硫酸，电炉上加热到约70-80，待溶解后，降温，移入120 ml棕色的滴瓶内。步骤：将可疑物从显微镜下夹出数粒于干燥的小烧杯内，滴加约1 ml变色酸，电炉上加热到刚刚产生微烟，取下，加入约30 ml水，若溶液变成稳定的紫色，则样品中有蛋白精。第5页/共29页二.NPN的鉴别(3)-脲醛聚合物(蛋白精1.鱼粉肉骨粉除去伪装方法：任何掺假的鱼粉均要做一番伪装，如直接将经伪装过鱼粉放在显微镜下看很难发现真实情况，因此镜检前应首先要除去伪装，最有效的方法就是脱脂，具体做法如下：第6页/共29页鱼粉肉骨粉除去伪装方法(1)n(1)将少许鱼粉（3-5g）用定性滤纸包好，放入索氏脂肪抽提器内，以石油醚作提取剂，脱脂约30分钟，至石油醚中看不到黄色为止，将纸包取出，水浴上烘干（70-80）。n(2)将少许鱼粉（3-5g）放入烧杯内，加入50ml石油醚，搅拌2分钟，过滤，将滤渣放回烧杯，加50ml石油醚，搅拌2分钟，过滤。将滤渣烘干（70-80）。第7页/共29页鱼粉肉骨粉除去伪装方法(2)n(3)将少许鱼粉（3-5g）放入烧杯内，加丙酮50ml搅拌2分钟，静止5分钟，将上清液弃去，再加50ml石油醚搅拌2分钟，静止5分钟，弃去上清液，将下部分的鱼粉烘干（70-80）。n(4)将少许鱼粉（约3g）放入烧杯内,加3gKOH(NaOH),再150ml水搅拌后在放电炉煮沸2分钟,静止5分钟,倒掉上清液,用水洗残渣3-4次,再用丙酮50ml洗残渣2-3次,残渣用于蛋白精和含大量粗纤维类物质(如锯末、稻草、麦芽根)的检测第8页/共29页鱼粉肉骨粉除去伪装方法(3)n(5)将少许鱼粉（约3-5g）放入分液漏斗中,加四氯化碳50-80ml,轻轻摇动后静止5分钟,把分液漏斗活拴打开将沉淀物放到一小烧杯内,之后将小烧杯内沉淀物过滤出来,此残渣用于蛋白精的检测.n 请请注注意意：乙乙醚醚、丙丙酮酮、石石油油醚醚均均为为易易燃燃品品，请在通风的条件下操作，严禁烟火。请在通风的条件下操作，严禁烟火。第9页/共29页三.其它定性检查的方法A.掺入植物类物质（如小麦麸、稻谷壳、粉丝蛋白粉）试剂：碘-碘化钾溶液 称1g的碘及5g碘化钾于烧杯内，加100ml水搅拌2分钟，待溶解后将其移入120ml棕色的滴瓶内。步骤：取约5g样品放在烧杯内，加约70ml水，在电炉上煮沸，取下静止2分钟，滴加碘碘化钾试剂-2ml，如溶液变成蓝色则掺入植物性的物质 第10页/共29页三.其它定性检查的方法B.掺入植物性物质（含大量粗纤维类物质：如锯末、稻草、麦芽根含大量粗纤维类物质：如锯末、稻草、麦芽根）试剂：1.间苯三酚20g/L 称间苯三酚2g加100ml 95%乙醇，溶解后放入棕色滴瓶 2.浓盐酸 36%分析纯n步骤：称1-2g鱼粉于培养皿内，滴加间苯三酚使样品湿润，放置5-10分钟后，滴加浓盐酸约0.5ml，放置2-3分钟，如样品显现深红色，则样品中含木质素，在显微镜下进一步确认为何物。第11页/共29页三.其它定性检查的方法C.掺入皮革粉试剂:1.稀硫酸2mol/L 将取10ml浓硫酸慢慢加入到90ml水中。2.二苯基卡巴腙2g/L 称0.2g二苯基卡巴腙，加入100ml95%乙醇，溶解后，移入棕色滴瓶内。n步骤：取1-3 g鱼粉于坩埚内，在电炉上炭化，再放在马弗炉内于550-600下灰化2小时，取出，降温后加入稀硫酸10ml搅拌，加二苯基卡巴腙5-10滴，如溶液显紫红色则样品中含皮革粉。第12页/共29页四.目前真蛋白测定中的问题1.真蛋白的测定方法 水洗法 三氯乙酸法 碱性硫酸铜法 重金属盐沉淀法第13页/共29页四.目前真蛋白测定中的问题2.这类方法的特点 能查出水溶性的NPN 如:铵盐、尿素、磷酸脲 对水不溶性的NPN查不出。如:脲醛聚合物(蛋白精)、糠醛尿素、淀粉糊化尿素、缩二脲、糖基尿素、三聚氰胺 花生粕等本身就有3-7个CP是水溶的.检测数据汇总花生粕水溶性蛋白试验.xls 第14页/共29页四.目前真蛋白测定中的问题 不论掺什么NPN都盲目的测真蛋白将会错检、误检、漏检第15页/共29页四.目前真蛋白测定中的问题3.赖氨酸复合饲料的真蛋白?玉米用亚硫酸浸1248h粗粉碎胚芽 玉米皮分离离心分离膜过滤淀粉玉米胚芽 玉米皮 玉米蛋白粉葡萄糖 淀粉酶赖氨酸Lys渣Lys高蛋白Lys98%,65%Lys复合饲料Lys蛋白玉米皮稻谷壳含NH3废水Lys菌种及杂菌赖氨酸菌种NH3第16页/共29页1#2#3#4#1#2#3#4#5#Lys4.954.66 5.823.70NH33.013.003.183.30Met0.360.32 0.320.27CPNH315.515.416.417.0Thr0.470.48 0.410.45CP39.837.436.436.1Cys0.35027 0.280.31CF8.4810.4510.449.07Glu1.701.88 1.441.80EE2.43Ile0.490.44 0.330.40 总能Cal/g382639423916Leu1.201.12 0.841.15 AFB1ppb18.26Ala0.991.00 0.790.94 DONppm4.10.93.0His0.180.35 0.280.36F-2ppm16271552AA16.415.4 14.614.5赖氨酸复合饲料的质量情况汇总第17页/共29页赖氨酸复合饲料的质量特点 游离氨NH3高 3%CPNH3=15-17%,AA=14-16%,CP=36-39%CPNH3 CP 组成:玉米皮+赖氨酸生产过程的含氨废水 霉菌毒素的残留高 F-2=1500-5000ppb DON=1-3ppm AFB1=15-50ppb40%四.目前真蛋白测定中的问题第18页/共29页赖氨酸蛋白(外观:褐色或黑色小球)2种赖氨酸菌体蛋白的对比第19页/共29页3.如何测真蛋白?判断是否掺假(NPN)-镜检、定性分析。根据NPN的种类决定采用什么方法 AA总和最有效的方法 三氯乙酸法、碱性硫酸铜法、重金属盐沉 淀法、水洗法 四.目前真蛋白测定中的问题第20页/共29页3.如何测真蛋白?掺微量的NPN(调蛋白15个百分点),氨基酸分析也难查出,只有用其它方法检测 如:镜检、过筛测定CP、定性分析 测真蛋白要根据具体情况定方法,决不能教条主义四.目前真蛋白测定中的问题第21页/共29页n3.如何测真蛋白nAA法-最有效四.目前真蛋白的测定中的问题第22页/共29页五.鱼粉(1)鱼粉和鱼排粉有下面2个问题 真假的问题 好坏的问题(2)解决问题的方法 真假 镜检、AA、N I R、定性和常规检测分析 上述这些方法已能解决真假的问题第23页/共29页五.鱼粉好坏-是现在碰到最多的问题 鱼粉的好坏与鱼粉的种类有关 白鱼粉蒸汽鱼粉直火鱼粉蒸干鱼粉 (下杂鱼粉,鱼干粉)直火鱼粉常含少部分(10-20%)过热成分 质量差的直火鱼粉有时含40-50%的烧焦鱼粉,也可能是掺入的自燃鱼粉第24页/共29页直火干燥鱼粉。样品经脱脂处理。可见很多颗粒被火燎焦糊了直火干燥鱼粉。样品经脱脂处理。可见被火燎焦糊的颗粒 第25页/共29页五.鱼粉鱼粉的好坏与鱼粉的新鲜度有关 新鲜度指标:感观、气味、VBN、组胺、酸价、过氧化值、TBA 蒸干鱼粉,下杂鱼粉,鱼干粉的新鲜度最差 含鱼溶浆多的鱼粉新鲜度也差一些 感观难看和气味难闻的鱼粉新鲜度很差第26页/共29页五.鱼粉(1)乳猪料用蒸汽鱼粉,禁用蒸干鱼粉(下杂鱼粉,鱼干粉),最好不用直火鱼粉.(2)69月减少国产鱼粉用量,多用进口鱼粉,其它时间增大国产鱼粉用量.(3)进口鱼粉也逐渐象国产鱼粉一样掺假的手段及方法第27页/共29页 谢 谢 大 家第28页/共29页第29页/共29页