微生物的实验室培养经典版.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,课题,1,微生物的实验室培养,(2),专题,2,微生物的培养与应用,1.,提供营养和条件,2.,防止污染,1000ml,牛肉膏蛋白胨培养基的配方,H,2,O,定容至,1000ml,Nacl 5g,蛋白胨,10g,牛肉膏,5g,琼脂,20.0g,实验操作,大肠杆菌的纯化培养：,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ：原则,1.,计算：,培养基用量,依配方计算各成分的用量,2.,称量：,3.,溶化：,牛肉膏黏稠，用称量纸称取,牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖,牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解,取纸,蛋白胨、,NaCl,琼脂补水定容,4.,调,pH,、分装、封口：,5.,灭菌：,6.,倒平板：,培养基、培养皿,分散成单个细胞,形成单个菌落,倒平板,约,50,防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染,灼烧灭菌，,防止瓶口的微生物污染培养基,答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。,2.,为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,问题讨论,1.,培养基灭菌后，需要冷却到,50,左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？,3.,平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,4.,在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,答：,平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以,防止皿盖上的水珠落入培养基,，造成污染。,答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。,二,.,大肠杆菌的纯化培养：,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,纯化大肠杆菌：,平板划线法：,菌种,划,3,个平板,1,个不划线,1.,接种：,接种环,防止划破培养基,（重复实验）,（空白对照）,问题讨论,为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,避免接种环上可能存在的微生物污染培养物,杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。,及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,6,支试管，分别加入,9ml,无菌水,1ml,10,1,1ml,10,2,1ml,10,3,1ml,10,4,1ml,10,5,1ml,10,6,稀释涂布平板法：,a.,梯度稀释菌液：,菌液,1.,移液管要经过灭菌。,2.,操作时，在酒精灯火焰附近进行。,稀释涂布平板法：,a.,梯度稀释菌液：,b.,涂布平板：,不超过,0.1ml,各梯度分别涂布,3,个平板,1,个不涂布作空白对照,滴,灼,涂,稀释,10,3,倍,稀释,10,4,倍,稀释,10,5,倍,浸,平板划线法：,二,.,大肠杆菌的纯化培养：,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,纯化大肠杆菌：,1.,接种：,稀释涂布平板法：,2.,培养：,将,接种后,的培养基和一个,未接种,的培养基,放入,37,恒温箱中培养,12h,24h,后，,观察并记录,三,.,菌种的保藏：,1.,临时保藏：,试管固体斜面培养基上,4,2.,长期保存：,菌种易被污染、变异,甘油管藏,1ml,甘油,1ml,菌液,20,三,.,结果分析与评价,.,培养基的制作是否合格,如果未接种的培养基在恒温箱中保温,1,2d,后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。,.,接种操作是否符合无菌要求,如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。,.,是否进行了及时细致的观察与记录,培养,12h,与,24h,后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。,【,典例解析,】,例,:,关于微生物营养物质的叙述中，正确的是,(),A.,是碳源的物质不可能同时是氮源,B.,凡碳源都提供能量,C.,除水以外的无机物只提供无机盐,D.,无机氮源也能提供能量,解析：,不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于,A,、,B,选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如,NH,4,HCO,3,；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于,C,选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；,NaHCO,3,，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而,NaCl,则只能提供无机盐。对于,D,选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如,NH,3,可为硝化细菌提供能量和氮源。,D,例,2,：下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是,(),A.,防止杂菌污染,B.,消灭杂菌,C.,培养基和发酵设备都必须灭菌,D.,灭菌必须在接种前,解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。,A,说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；,B,是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。,C,是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。,B,本课题知识小结,:,