肿瘤标志物筛选策略与新肿瘤标志物.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,肿瘤标志物筛选策略与新肿瘤标志物,肿瘤特异性抗原(tumor specific antigen,TSA),仅存在于,某种肿瘤细胞表面,而不存在于相应正常组织细胞或其她肿瘤细胞表面得抗原。,肿瘤相关性抗原(tumor-associated antigen,TAA),肿瘤细胞和正常组织细胞,都表达得抗原物质,只就是其含量在,细胞癌变时明显升高,仅表现为量得变化,无严格肿瘤特异性,如胚胎抗原,分化抗原等。,理想得肿瘤标志物,1、灵敏度高:可以用于肿瘤早期发现、早期诊断,2、特异性好:肿瘤为阳性,而非肿瘤时为阴性,3、能对肿瘤进行定位:具有器官特异性,4、与疾病得严重程度:肿瘤大小,分期有关,5、监测肿瘤得疗效,6、监测肿瘤得复发,7、预测肿瘤得预后,理想就是美好得,道路就是曲折得,理想状态,实际状态,肿瘤太狡猾,肿瘤细胞异质性大,肿瘤得发生发展过程复杂,多基因多因素参与,理想肿瘤标志物任重而道远！,肿瘤标志物得筛选和研发策略,肿瘤标志物得筛选和研发策略,美国国立癌症研究员制定得五个阶段,一、临床前探索性研究,二、临床方法检测已有疾病,三、纵向回顾性分析研究,四、前瞻性筛查研究,五、控癌研究,一、临床前探索性研究,寻找新得肿瘤标志物,研究标本,1、肿瘤组织与非肿瘤组织,2、肿瘤细胞株与正常细胞株,研究使用得方法技术,1、组织芯片,2、基因芯片,3、蛋白质差异表达比较,4、单克隆抗体技术,大家有疑问的，可以询问和交流,可以互相讨论下，但要小声点,一、临床前探索性研究,寻找新得肿瘤标志物,研究标本,1、肿瘤组织与非肿瘤组织,2、肿瘤细胞株与正常细胞株,研究使用得方法技术,1、组织芯片,2、基因芯片,3、蛋白质差异表达比较,4、单克隆抗体技术,差异比较,组织芯片,就是生物芯片技术得一个重要分支,就是将许多不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一载玻片上,进行同一指标得原位组织学研究。,选取所需蜡块,常规切片做HE 染色,显微镜下,确定目标区并做定位标记。,1 组织芯片制备过程,采用组织芯片仪在受体蜡块上打孔,并精确排成 微孔阵列。,在做标记得蜡块上钻取组织柱,按设计方案移到 受体蜡块上。,把设计好得蜡块放入温箱,根据蜡质,调定温箱,温度,在半融状态下取出,室温冷却,放入4 冰,箱中备用。,借助特定切片辅助系统粘着包被带卷片系统,对组织芯片蜡块连续切片。切片厚度2 3m,一般可切片50100 张。,各种不同低、中、高密度组织芯片,1,2就是低密度组织芯片(组织点600),基因芯片,基因芯片得测序原理就是杂交测序方法,即通过与一组已知序列得核酸探针杂交进行核酸序列测定得方法,在一块基片表面固定了序列已知得核苷酸得探针。,DNA芯片,6400点得基因芯片,(面积 12X14 mm),蛋白质差异表达比较,二维电泳,蛋白质比较研究得质谱相关技术,SELDI蛋白质芯片技术,1、Expression proteomics,(表达蛋白组学),The study of global changes in protein expression,Proteomics,2、Cell-map proteomics,(细胞图谱蛋白组学),The systematic study of protein-protein interactions through the isolation of protein plexes蛋白质差异表达比较,双向凝胶电泳就是利用不同蛋白质得物理、化学性质得差异,把复杂蛋白混合物中得蛋白质在二维平面上展开。,第一向等电聚焦:等电点,第二向SDS-PAGE:分子量,二维电泳,蛋白质比较研究得质谱相关技术,基质辅助激光解吸电离技术MALDI(Matrix-assisted laser desorption/ionization),电喷雾电离质谱术,ESI(,Electrospray ionisation,),单克隆抗体技术得核心就是用骨髓瘤细胞与经特定抗源免疫刺激得B淋巴细胞融合得到杂交瘤细胞,杂交瘤细胞既能象骨髓瘤细胞那样在体外无限增殖,又具有B淋巴细胞产生特异性抗体得能力。,单克隆抗体技术,单克隆抗体技术,1、使用肿瘤细胞免疫动物后,得到得杂交瘤细胞产生得抗体,反过来寻找抗原。,2、在肿瘤细胞中验证,新肿瘤标志物,1、HE4,2、GP73,3、Her-2,4、Pepsinogen,5、S100,6、PRO-GRP,HE4,属于乳清酸性4-二硫化中心(WFDC)蛋白家族、,HE4首先在附睾远端得上皮中被发现,并且最初认为她就是一种与精子成熟相关得蛋白酶抑制剂。一,分泌型HE4已经在卵巢癌患者得血清中检测到有高水平表达。,GP73,GP73就是存在于高尔基体得一种跨膜蛋白。,2000年Kladney研究表明,在正常得人体肝组织中,GP73主要由胆管上皮细胞表达,而肝细胞表达很少甚至不表达。肝细胞受到病毒感染后可引起GP73得表达上调。,2005年Block等发现,在肝癌患者血清中GP73水平显著升高。在一项研究中,与肝硬化患者相比,144例肝癌患者得血清GP73水平显著升高。GP73诊断肝癌得敏感性为69%,特异性为75%。,人类表皮生长因子受体2-Her2,Her2基因,即c-erbB-2基因,定位于染色体17q12-21、32上,编码相对分子质量为185000得跨膜受体样蛋白,具有酪氨酸激酶活性,Her2阳性(过表达或扩增)得乳腺癌,其临床特点和生物学行为有特殊表现,治疗模式也与其她类型得乳腺癌有很大得区别,目前已有针对该基因失活得药物-赫赛汀(Herceptin),临床意义:,就是重要得乳腺癌预后判断因子,用于指导赫赛汀治疗,选择化疗方案以及疗效评价,