临床微生物检验的标准化-吴文娟[].ppt

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,临床微生物检验的标准化,-,ISO15189,医学实验室,认可关键技术要素,吴文娟,上海市东方医院南院检验科,wwj1210,临床微生物检验相关认可准则,ISO 15189,4.,管理要求,4.1,组织和管理,4.2,质量管理体系,4.3,文件,控制,4.4,合同评审,4.5,委托实验室检验,4.6,外部,服务和供应,4.7,咨询服务,4.8,投诉的处理,4.9,不符合,的识别和控制,4.10,纠,正措施,4.11,预防措施,4.12,持续改进,4.13,质量和技术记录,4.14,內部,审核,4.15,管理,评审,5.,技术,要求,5.1,人员,5.2,设施和环境条件,5.3,实验室的设备,5.4,检验前程序,5.5,检验,程序,5.6,检验程序的质量保证,5.7,检验后程序,5.8,结果报告,Medical Diagnosis,临床诊断,Choice of Appropriate Tests,选择合适的测试,Patient Preparation,病人准备,Sample Collection/Transport,样本采集和运输,Sample Reception/Preparation,样本收集/制备,Analysis/Test Results,分析/获得结果,Clinical Test Result Validation,临床实验结果确认,Interpretation /Reporting,结果解释/报告,Use of Laboratory Data,实验室数据使用,Equipment Maintenance,&Calibration,设备的维护和校准,Internal Q.C.,室内质控,Process of Medical Testing,医学检验流程,Proficiency Testing,能力验证,ISO 15189,CNAS-GL23:2008,医学实验室质量和能力认可准则在微生物学检验领域的指南,CNAS-CL42:2008,医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用说明,（,2012,年,09,月,13,日发布，,2013,年,04,月,01,日实施,）,ISO 15189,4.6,外部服务和供应,新批号及每一货次的试剂、纸片，如吲哚试剂，杆菌肽，奥普托辛，,X,、,V,、,XV,因子纸片等应使用阴性和阳性质控进行验证；,新批号及每一货次的药敏试验纸片或试剂使用前应以质控菌株进行验证；,新批号及每一货次的染色剂（革兰染色、特殊染色和荧光染色），应用已知阳性和阴性（适用时）的质控菌株进行验证；,符合,CLSI,质控范围,4.6,外部服务和供应,直接抗原检测试剂（无论是否含内质控），新批号及每一货次应用阴性和阳性外质控进行验证,;,培养基外观宜良好（平滑、水分适宜、无污染、适当的颜色和厚度，试管培养基湿度适宜）,;,新批号及每一货次的商品或自配培养基应检测相应的性能，包括,无菌试验、生长试验或与旧批号平行试验,、,生长抑制试验（适用时）、生化反应（适用时）等，应以质控菌株进行验证,;,一次性定量接种环每批次应抽样验证。,定量接种环没有微量移液器准确，但仍不失为半定量培养或者稀释的一种很好的方法，在允许,20,误差存在时可以使用定量接种环。,钻头法,仅适用于重复使用金属环,浸染法,适用于重复使用金属环和一次性接种环。,600nm,波长 分光光度计,Evans blue,染液,1:500,1:1000,1:2000,1:4000,系列稀释,1ul,环取,10,环,EBD,原液至,10ml,蒸馏水,吸光度应与,1:1000,稀释液相符,(10ul,环,-10 EBD-100ml DH,2,O),重复,4,次,平均误差须,20%.,定量接种环的校准,5.1.1 有颜色视觉障碍的人员不应从事涉及到辨色的微生物学检验。,5.1.4 临床微生物学实验室（以下简称“实验室”）负责人至少应具有以下资格：,中级技术职称，医学、医学检验专业背景，或相关专业背景经过医学检验培训，3年临床微生物工作经验。,认可的授权签字人应至少具有中级以上专业技术职称，从事申请认可授权签字领域专业技术工作至少3年。,5.1,人员,5.1.11,应制定员工能力评审的内容和方法，每年评审员工的工作能力；,对新进员工在,最初,2,个月内应至少进行,2,次能力评审（间隔为,30,天），,保存评审记录。,当职责变更时，或离岗,6,个月以上再上岗时，或政策、程序、技术有变更时，应对员工进行再培训和再评审。,没有通过评审的人员需经再培训和再评审，合格后才可继续上岗，并记录。,5.1,人员,5.2,设施和环境条件,5.2.2,应定期根据工作流程及性质实施,安全风险评估,，根据生物安全理论和技术的新进展制定、修订相应的生物安全操作和防护规程并进行培训，以减小职业暴露的危险。,当工作流程及性质发生变动时，应及时实施再评估。,5.2,设施和环境条件,确定本实验室的生物安全防护水平，根据,GB19489,实验室生物安全通用要求,配备相应的设施和设备。,依据,人间传染的病原微生物名录,医院临床微生物实验室通常为,BSL-2,。,Biosafety Level 2,Facility Design(Secondary Barriers),2.4,5.3,实验室设备,无菌体液的显微镜检查应配备细胞离心机,生物安全柜的类型,II,级,A1,、,A2,、,B1,、,B2,?,YY 0569,生物安全柜,孵育箱的数量和种类,温度？气体？5.3,实验室设备,检定和校准,至少,半年,检定或校准：,浊度仪,至少,每年,检定或校准：,生物安全柜,（高效过滤器、气流、负压等参数）,CO2,浓度检测仪,细胞离心机,压力灭菌、游标卡尺、培养箱、温度计、移液器、微量滴定管或自动分配器,满足制造商要求：,自动化鉴定仪、血培养仪,5.3,实验室设备,5.3.4,所有试剂应标注或能追溯的信息包括：名称、浓度或滴度，存放条件，失效期。,若试剂启封，改变了有效期和储存条件，应记录新的有效期。试剂的储存条件应遵循生产商的建议，并在标明的有效期内使用。,培养基标签应包含生产日期（批号）、保质期（或失效期），适用时包括配方、质量控制、贮存条件等信息。,53,实验室设备,5.3.4,药敏用标准菌株种类和数量应满足实验室工作要求，并保存其来源、传代等记录，并有证据表明,标准菌株性能满足要求,。,5.3.7,如果设备故障影响了方法学性能，在设备修复、校准后，实验室应对,设备性能进行验证，例如检测质控菌株或已知结果的标本,。,5.4,检验前程序,5.4.1,申请单,标本来源，,感染类型，目标微生物,5.4.3,标本采集及运送指南,医护版,患者版,a-g,：不同部位；合格类型标本送检次、量、运送时间；培基；贮存；运送方法；标识,运送时间的控制,?!,5.5,检验程序,分枝杆菌,标本应置密闭的防渗漏容器内；某些标本（如：尿液、脑脊液）抗酸染色应浓缩，所有标本培养前应浓缩。应以密闭试管置密封的离心机内离心,。,真菌培养,宜,使用含和不含抗菌药物的两类培养基。如果在室温下培养，应每天监测并记录室温（,22-26,）。经空气传播有高度感染性的真菌标本、含菌丝体的真菌应在生物安全柜内处理。若采用平皿培养，应封口。,5.5,检验程序,5.5,检验程序,病毒培养,应详细记录细胞类型、传代数、细胞来源、培养基及生长状况；,应检测并记录培养基和稀释剂的无菌试验和,pH,；,应监测细胞病变效应，以优化培养的最佳时间,;,应比较未经接种或接种无菌物质的单层细胞与接种临床标本的培养物。,5.5,检验程序,5.5.2,应制定程序验证检验程序符合预期用途,方法学验证两个易混淆的概念,Verification,验证,Establishes test performance parameters are satisfactory for new or revised test,Does the test work?,Validation,确认,Continuous,ongoing,process that provides assurance of satisfactory test performance with routine use,Does the test still work?,检验程序,检验程序的质量保证,Verification of unmodified FDA-Cleared Tests,Diagnostic Tests,Microbial Identification Tests,Blood Culture Systems,Verification of unmodified FDA-Cleared Tests,Diagnostic Tests,新方法与参考方法平行检测至少,20,个样本,分为阴性和阳性组,包含弱阳性和强阳性标本,弱阳性样本可通过稀释获得,正确度,/,符合率应,90,保留一份说明书,验证方法,参考方法,阳性,阴性,阳性,9,1,阴性,1,9,精密度,/,重复性,批间、批内、不同人员间,批内：,2,个已知阳性和,2,个已知阴性,至少重复,2,次,批间和不同人员间,由另一实验员在另一批重复检测上述样本,每次检测结果应相同,记录实验过程,Verification of unmodified FDA-Cleared Tests,微生物鉴定试验,至少,20,个菌株,尽量覆盖临床常分离病原菌,大型医院应结合临床选择更多类型菌株,包括合适的质控菌株,正确度,/,符合率应,90,对于某些方法（棒状杆菌鉴定）可接受属水平或部分鉴定,Verification of unmodified FDA-Cleared Tests,血培养,难以执行的原因,采集病人双份血液？,阳性率低（,8,15,）,污染率（,1,3,）,病原种类有限,Verification of unmodified FDA-Cleared Tests,验证的动因,该血培养系统能否,满足,医院或本地区常见病原菌检出？,酵母？厌氧菌？苛养菌？慢生长菌？。,该血培养系统能否,及时,检出病原菌？,两种方法,Seeded BC studies,Parallel BC studies,Verification of unmodified FDA-Cleared Tests,Seeded BC studies,至少,20,株代表菌株,使用临床病人分离株,接种量,5-30CFU/,瓶,或使用病人血液,菌量约,0.1CFU/ml,血液,符合标准,所有菌株均在文献或临床需求时间范围内检出,95,的临床细菌和酵母均在,3,天内检出,Verification of unmodified FDA-Cleared Tests,Parallel BC studies,验证系统和参考系统采用同等血液量的双份血培养,至少,20,例常见菌株的阳性血培养,灵敏度应,95%,报阳时间与参考方法无显著差异,Verification of unmodified FDA-Cleared Tests,适用于大型医院,Validation Components,人员培训和能力评估,能力验证,PT,质控菌株,质控分析,多种方法或检测点的结果比较,仪器校准,历史实验数据的分析,病人信息的保密性,样本识别及保存,抱怨调查,沟通,5.6,检验程序的质量保证,分析前、中、后,人员培训和能力评估,应至少每,6,个月对人员进行胜任该岗位的考核，没有通过岗位考核人员应再培训和再考核，并记录。,考核方法,直接观察,记录报告调阅,室内质控、室间质评及预防、维护情况,解决问题的技能,5.6,检验程序的质量保证,5.6,检验程序的质量保证,5.6.1,室内质控,使用中的染色剂（革兰染色、特殊染色和荧光染色），至少每周（若频率小于每周,1,次，则实验当日）用已知阳性和阴性（适用时）的质控菌株检测染色程序,定性试验试剂每次检测时应至少包括阳性和阴性质控菌株或样本。,实验室常规采用的药敏试验方法应以标准菌株连续检测,20,30,天，每一组药物,/,微生物超出参考范围（抑菌圈直径或,MIC,）的频率需小于,1/20,或,2/30,。此后，应每周使用标准菌株对药敏试验进行质控。,5.6,检验程序的质量保证,厌氧菌,应以有效的方法检测厌氧培养环境（如以亚甲兰试条、厌氧菌或适当的程序检测厌氧系统的厌氧条件）。,分枝杆菌,抗酸染色应在实验当日用适当的阴性和阳性质控验证；荧光染色应每次实验以阴性和阳性质控验证。,真菌,直接染色（如：抗酸染色，,PAS,，吉姆萨染色，墨汁染色）检查患者标本时，应每天做阴性和阳性质控（某些染色如吉姆萨染色，玻片本身作为阴性质控。,KOH,制备的玻片不需要质控）。,病毒,连续细胞传代时应定期监测支原体污染（宜监测阴性未传代的质控株，而不是培养支原体）；应监测用于细胞生长培养液的动物血清的细胞毒性；应具备相应的细胞株用于病毒培养。,5.6,检验程序的质量保证,5.6.4,实验室应按照,CNAS-RL02,能力验证规则,的要求参加相应的能力验证活动。,能力验证要求,样本与临床标本同样处理,结果上报前不得实验室间沟通,不满意：,PT,80,失败：连续两次不满意或,3,次连续活动中,2,次不满意,5.6,检验程序的质量保证,5.6,检验程序的质量保证,5.6,检验程序的质量保证,5.6.5,无,CNAS,承认的能力验证（室间质量评价）的项目，需至少,每,6,个月进行一次性能评估,5.6.6,应至少,每年进行,工作人员的能力比对，至少包括显微镜检查、培养结果判读、抑菌圈测量、结果报告。,MIC.11027,实验室使用多种设备用于同一检测项目，至少每年进行,2,次比对。,如不同细菌鉴定仪，手工与仪器药敏,5.8,结果报告,5.8.3,结果报告应与检验的内容一致，如粪便沙门、志贺菌培养，报告“未检出沙门、志贺菌”。血培养阴性结果报告应注明培养时间。,5.8.7,危急值至少应包括血培养阳性结果、脑脊液显微镜检查及培养阳性结果、国家规定立即上报的法定传染病等。,5.8,结果报告,5.8.9,血液、脑脊液标本的培养鉴定应及时发送分级报告,;,无菌部位来源标本宜报告直接涂片镜检的阳性结果。,5.8.11,应在收到标本,24,小时内报告分枝杆菌抗酸或荧光染色结果。,申请认可的微生物学检验项目要求,上呼吸道标本培养和鉴定（普通细菌），应同时申报,A,组链球菌（,6B070,）和流感嗜血杆菌（,6BXXX,）。,下呼吸道标本培养和鉴定（普通细菌），应同时申报肺炎链球菌（,6B075,）、流感嗜血杆菌（,6BXXX,）。,粪便培养和鉴定（普通细菌），应同时申报沙门菌鉴定（,6B085,）,+,血清型分类（,6B820,）；志贺菌鉴定（,6BXXX,）,+,血清型分类（,6B825,）；霍乱弧菌鉴定（,6BXXX,）,+,血清型分类（,6B890,）,申请认可的微生物学检验项目要求,脑脊液培养和鉴定（普通细菌），应同时申报肺炎链球菌（,6B075,）、脑膜炎奈瑟菌（,6B080,）和流感嗜血杆菌（,6BXXX,）。,普通细菌药敏试验自动化仪器检测法应与纸片扩散法和,/,或药敏试验（最低抑菌浓度）（,6C205,）同时申请；纸片扩散法应与药敏试验（最低抑菌浓度）（,6C205,）同时申请,Thank you,！,