实验二培养基的制备.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验二 培养基的制备,一、目的要求,1.,掌握培养基制备的原则；,2.,掌握培养基的制备方法。,二、实验原理,1,、培养基的概念？,培养基是指由人工方法配合而成的营养基质，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存菌种用的混合营养物制品。,2,、必须具备五个条件,:,含有细菌生长所需的物质,：,如：水分、养分（氮源、碳源、矿物质）等,适宜的酸碱性：,多数为,pH7.2-7.6,，有的为,pH5.6-6.8,。,不含抑制细菌生长的物质；,均质透明,：,便于观察细菌生长性状和引起培养基的变化，,严格灭菌，保证无菌。配好,立即,高压灭菌，并保证,新鲜,。,3,、培养基的分类,根据对培养基组成物质的,化学成分,是否完全了解来区分：,天然培养基,合成培养基,半合成培养基。,根据培养基的,物理状态,来区分：,固体培养基,液体培养基,半固体培养基,根据培养基的,用途,来区分：,增菌培养基,选择培养基,鉴别培养基,中国农业出版社,陈天寿主编,一些物质在培养基中的应用原理,3.,具有生化反应作用的,硫羟代乙酸钠（硫乙醇酸钠）、半胱氨酸、葡萄糖、肝块、肉渣、还原铁等还原剂,生化反应,一些物质在培养基中的应用原理,4.,具有缓冲作用的,磷酸盐,碳酸盐,一些物质在培养基中的应用原理,5.,具有,PH,指示作用的,中性红指示液,变色范围,pH6.8,8.0,（红,黄）,孔雀绿指示液 变色范围,pH0.0,2.0,（黄,绿）；,11.0,13.5(,绿,无色,),石蕊指示液,变色范围,pH4.5,8.0,（红,蓝）,甲基红指示液 变色范围,pH4.2,6.3,（红,黄）,刚果红指示液 变色范围,pH3.0,5.0,（蓝,红）,亮绿指示液,变色范围,pH0.0,2.6,（黄,绿）,结晶紫指示液,pH,值,0.15,（黄）,0.32,（绿），,pH,值,1.0,（绿）,1.5,（蓝），,pH,值,2.0,（蓝）,3.0,（紫）。,溴甲酚紫指示液变色范围,pH5.2,6.8,（黄,紫）,溴麝香草酚蓝指示液 变色范围,pH6.0,7.6,（黄,蓝）,一些物质在培养基中的应用原理,6.,其它,硫酸亚铁,色氨酸,脲酶,培养特性,（一）体外培养的要求,营养、温度、,PH,、气体、培养时间,（二）培养性状,1.,液体培养基,需氧菌：菌膜,兼性厌氧菌：均匀浑浊,厌氧菌：沉淀,2.,固体培养基,菌落特点,:,大小、颜色、边缘、湿润程度,3.,色素,脂溶性：菌体有颜色（如金黄色葡萄球菌）,水溶性：菌体和培养基都有颜色（如绿脓杆菌）,4,、培养基制备的基本方法,培养基配方的选定,培养基的制备记录,培养基成分的称取,培养基各成份的混合和溶化,培养基,pH,的调正,培养基的过滤,培养基的分装,培养基的灭菌,培养基的质量测试,培养基的保存,同一种培养基的配方在不同文献中常存在某些差别。,因此应尽量收集有关资料，加以比较核对，再依据自己的使用目的，加以选用，记录其来源。,4,、培养基制备的基本方法,培养基配方的选定,培养基的制备记录,培养基成分的称取,培养基各成份的混合和溶化,培养基,pH,的调正,培养基的过滤,培养基的分装,培养基的灭菌,培养基的质量测试,培养基的保存,每次制备培养基均应有记录,:,包括名称、配方及其来源、,pH,值、消毒的温度和时间、制备的日期和制备者等，以防发生混乱。,4,、培养基制备的基本方法,培养基配方的选定,培养基的制备记录,培养基成分的称取,培养基各成份的混合和溶化,培养基,pH,的调正,培养基的过滤,培养基的分装,培养基的灭菌,培养基的质量测试,培养基的保存,必须精确称取，并注意防止错乱。,可将配方置于傍侧，每称好一种成分即在配方上做出记号,最后还应进行一次检查。,4,、培养基制备的基本方法,培养基配方的选定,培养基的制备记录,培养基成分的称取,培养基各成份的混合和溶化,培养基,pH,的调正,培养基的过滤,培养基的分装,培养基的灭菌,培养基的质量测试,培养基的保存,可先用温水加热并随时搅动、以防焦化。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化，直至煮沸。,在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。,4,、培养基制备的基本方法,培养基配方的选定,培养基的制备记录,培养基成分的称取,培养基各成份的混合和溶化,培养基,pH,的调正,培养基的过滤,培养基的分装,培养基的灭菌,培养基的质量测试,培养基的保存,经加热煮沸，培养基各成分完全溶解,待冷却接近室温时,应进行,pH,的调正。,4,、培养基制备的基本方法,培养基配方的选定,培养基的制备记录,培养基成分的称取,培养基各成份的混合和溶化,培养基,pH,的调正,培养基的过滤,培养基的分装,培养基的灭菌,培养基的质量测试,培养基的保存,培养基必须均质透明。,通常采用过滤以达到此项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法。,4,、培养基制备的基本方法,培养基配方的选定,培养基的制备记录,培养基成分的称取,培养基各成份的混合和溶化,培养基,pH,的调正,培养基的过滤,培养基的分装,培养基的灭菌,培养基的质量测试,培养基的保存,应按使用的目的和要求，分装于适当容器内。,分装量一般超过容器装盛量的,2/3,。,4,、培养基制备的基本方法,培养基配方的选定,培养基的制备记录,培养基成分的称取,培养基各成份的混合和溶化,培养基,pH,的调正,培养基的过滤,培养基的分装,培养基的灭菌,培养基的质量测试,培养基的保存,一般采用高压蒸汽灭菌方法（,121,，,15min,）。,某些畏热成分，如糖类、血清等，一般以过滤方法除菌，以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。,4,、培养基制备的基本方法,培养基配方的选定,培养基的制备记录,培养基成分的称取,培养基各成份的混合和溶化,培养基,pH,的调正,培养基的过滤,培养基的分装,培养基的灭菌,培养基的质量测试,培养基的保存,灭菌以后，应仔细检查，如发现破裂、水分浸入、色泽异常等、均应挑出弃去。,将全部培养基放入,37,恒温箱培养过夜，如发现有细菌生长，即弃去。,用已知菌株接种部分培养基,培养,2448h,。如无菌生长或生长不良，应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去。,4,、培养基制备的基本方法,培养基配方的选定,培养基的制备记录,培养基成分的称取,培养基各成份的混合和溶化,培养基,pH,的调正,培养基的过滤,培养基的分装,培养基的灭菌,培养基的质量测试,培养基的保存,应存放于冷暗处，最好放于普通冰箱内；,平板培养基不宜超过,3,天；,必须附有明显标签。,三、实验材料,量杯（,1000mL,和,500mL,各,1,个）、玻璃棒、漏斗、三角瓶、试管、玻璃瓶（,500mL,）等；,pH,试纸、纱布、脱脂棉、滤纸、包装纸、扎线等；,牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、琼脂、葡萄糖、牛肉渣、蜡块、蒸馏水、,l mo1/L NaOH,溶液和,1 mo1/L HCl,溶液等。,四、实验内容,普通肉汤的制备,：,（,1,）常用配方,:,牛肉浸膏,3-5g,蛋白胨,10g,氯化钠,5g,磷酸氢二钾,0.5g,蒸馏水,1000m,L,四、实验内容普通肉汤的制备,：,（,2,）配制方法,:,取水,600700mL,，加热；,按照配方称取各物品加入水中，,边加热边搅拌，快沸时注意不要溢出，,沸腾后停止,加热,；冷却至室温；,用pH试纸,测定,pH,并调至,7.2-7.,6,。,若pH,7.6,，,则用0.1mo1,/,L HCl调低,;,若pH,7.6,，,则用0.1mo1,/,L HCl调低,;,若pH,7.2,，,则用0.1mol/L NaOH调高,.,4,.,调好pH值后，,各自再,补足水量，再测pH值。,将,6,支做厌氧培养基（共约,30ml,），,200ml,装入小盐水瓶；取,20ml,再配,0.4%,琼脂的半固体培养基,6,支；余下,500ml,加,2%,（,10g,琼脂）继续加热至充分融化，固体培养基中倒,6,支斜面，其余加入盐水瓶。,今天实验内容,/,每组,：,