检验与临床POCT实验室应用.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,检验与临床 检验及产品,检验一般了解,1,检验科方法简单了解,2PCT,3CRP,4,心脏标准物,5,总结,检验科和实验室区别,检验科：常规工作 量大 临床要求快,临床检验工作最基本要求,及时 方便 准确,临床检验人员对仪器及试剂要求,管用 好用 实用,实验室：特殊项目 科研为主 量少,检验项目：形态学 定性和定量,检验报告形式,一浓度分析,1,定性,2,定量,二形态报告,1,细胞,2,细菌,3,管型,一按反应原理分类（定量）,1,用化学试剂测定方法叫化学法。如蛋白 钙 镁,2,用酶测定方法叫酶法。如葡萄糖 谷丙转氨酶,3,用抗原抗体反应原理方法叫免疫法。,HBsAg,4,用原子吸收方法叫色谱法。钾 钠,5,用电泳分离方法叫电泳法。蛋白电泳 高压液相色谱,6,测定蛋白分子用酶联聚合反应即,PCR,方法。,DNA,7,生物传感器。血气 血糖,二按方法敏感性分类,1,超微量法 微克以下 皮克 纳克 一般用免疫发光法 激素 肿瘤标志物,2,微量法 毫克以下 微克 一般用金标法或胶乳法散射法,RF CRP,3,常量法 克以下 毫克 一般用生化法 白蛋白 甘油三脂,根据反应产物特性分,1,比色 常用生化测定,2,比浊 抗原抗体测定,3,散射 可标记乳胶,4,测定光强度 往往标记,主要反应方式,1,液体反应 生化 免疫等成本低 线性宽 灵敏度高,2,干式反应 干生化 免疫层析 渗滤法 相对灵敏度低 线性窄 成本高 往往单人份包装,标记技术分类,1,放射物质标记,2,荧光物质标记,3,酶物质标记,4,金标记（铁 铜 硒）,5,发光物标记,测定方法,1,决定性方法,2,参考方法,3,常规方法,123,的过程叫正确度传递,321,的过程叫溯源,超微量分析（化学发光）,目前按方法形式分类,1,板式发光（包被在板上）须洗涤和分离 反应手续多 反应 慢,均相发光 分洗涤和无洗涤二种 简单和反应快,发光按反应方式：干式反应和湿反应 仪器分：全自动 半自动,化学,发光,免疫化学发光分：,1,酶底物发光（硷性磷酸酶）贝克曼,2,直接发光（丫叮脂）西门子,3,电发光（钌）罗氏,4,时间分辨荧光（铕）德普,5,微粒荧光 透景,6,无须分离直接发光 博阳,方法学要求,1,精密度 批内 批间 变异系数,CV,表示,2,正确度 和目前公认结果比较 偏差,5,3,稳定性好,4,反应快,5,抗干扰能力强,分析仪器按反应状态分类,1,干式反应 万孚飞测 金标定量,2,湿式反应 生化仪 发光仪,四 按反应方便程度分类,1,手工法,2,半自动,3,全自动,仪器要求,1,精密度好,CV38C,或,90,次,/,每分,3,呼吸频率,20,次,/,每分,4,白细胞,12000/uL,或,4000/uL,SIRS,主要由微生物感染所引起，其他非感染如严重缺氧，烧伤、急性胰腺炎等也可以造成。,炎症诊断试验,1,，体温测量,2,，白细胞计数和分类,3,，血沉,4,，血清蛋白电泳,5,，,CRP,6,，,IL-6 IL-8,PCT,在脓毒血症应用,1,，区分是否细菌感染，越高感染病情越重,2,，肺炎中应用,鉴别细菌性和病毒性,3,，全身性真菌感染应用,4,，脑膜炎鉴别中应用,5,，新生儿感染中应用,PCT,监控具有高度感染的患者应用,1,，重危患者,2,，大手术后,3,，器官移植,PCT,在疗效观察中应用,1,，脓毒症,2,，多器官衰竭,3,，休克,4,，感染后手术治疗,CRP,1,肝脏合成，结构五聚体 是一种急性时相反应蛋白。,2,特点：本地很低，当受到刺激时（一般,6,小时）迅速升高可达,1000,倍。,3,临床应用普遍。,CRP,与,PCT,的应用比较,CRP:,炎症过程的筛选,6,小时后上升,2,天达高峰,CRP,高提示病变存在。,PCT,：诊断和监测细菌性疾病感染一个参数,是严重细菌性和真菌感染特异性标志。也是脓毒症和炎症活动有关多脏器衰竭的可靠指标。患者好转,PCT,比,CRP,反应快，而,CRP,有较长时间才下降。,CRP,和,PCT,的比较,相同：都是急性时相反应蛋白,CRP,是临床运用特点是炎症指标，在感染性炎症和非感染性炎症，组织损伤、局部和全身的轻度 中度 重度的感染和各种轻中度损伤中应用。,PCT,运用在严重细菌感染及脓毒血症,CRP,和,PCT,的比较,PCT,指标在细菌感染方面相对特异,CRP,指标相对特异性差,在病毒感染中,PCT,不升高，,CRP,会轻中度升高，,在细菌感染中,CRP,呈现一般中度以上升高，持续时间长，,PCT,只有在严重细菌感染时才会升高，治疗好转就下降。,检测项目主要临床意义,临床意义：共性有二点,1,，诊断和鉴别诊断,2,，疗效观察,PCT,临床意义,PCT,作为急性时相反应蛋白（,APR),一种，一般认为在持续毒素刺激下，,6,8,小时开始升高,CRP,临床意义,1,主要用于各种损伤、感染、治疗等观察。,2,超敏,CRP,主要用于心血管疾病。,BNP,主要用于慢性心衰的评估,肌钙蛋白,主要用于心肌损伤及梗死,PCT,临床意义总结,PCT,只有在严重细菌、真菌、寄生虫感染及脓毒症和多脏器功能衰竭时测定才有意义。在自身免疫、过敏和病毒感染时不升高。,因此,PCT,在细菌性疾病鉴别、监控细菌性感染及病程预后估计等方面有意义。,检验科发展方向,临床检验发展基本要求：围绕 及时 方便 准确方针,1,整个检验科全自动,2 POCT,（即时检验）,系统化 优点 溯源性 不准确度,4,信息化,提高内涵、把握方向、持续进步,1,做企业或公司：诱惑多 最重要不是选择而是放弃,得到空间更大 坚信基本判断 项目找对 成功一大半,2,生存法则：守住底线、创造空间,3,确定方向：想做什么？能做什么？,4,市场要什么：不是你有我有。而是排他性即唯 一性,5,社会需要什么：可靠、放心、方便、环保,最好创造新产业,目前市场上哪些品牌可以真正实现一步法加样？,PCT/,心标等：明德、乐普、基蛋（金标半定量）,CRP,：迪倍思（金标半定量，加样后需补加缓冲液），其他品牌均需要加样前稀释,/,预处理,国赛,CRP-,散射比浊法,操作步骤：,禾柏,CRP-,散射比浊法,艾克美,CRP-,荧光免疫法,奥普,CRP-,金标法,凯创,CRP-,金标法,热景,CRP-,上转发光法,检验科需要项目和方法,检测简单方便,检测快速，成本低，,高的特异性和敏感性,能够反映疾病的严重程度,早期准确诊断,反映预后和治疗的疗效,全自动 信息化,荧光免疫法干式,(POCT),国内代表万孚,特点：专一激发光及双抗体保证高特异性；信号级联放大保证高灵敏度,光路特异（专一激发光和吸收光），吸收光背景干净，光信号特异性高,荧光微球共价标记：偶联效率高，级联放大荧光信号，灵敏度高，量程大,夹心法：免疫反应特异性较高,常见免疫学检测方法,方法学,/,免疫学,标记物,检测方法,代表厂家举例,POCT,荧光定量,荧光免疫层析,双抗体夹心法,异硫氰酸荧光素,荧光强度,万孚、艾克美,时间分辨免疫层析,双抗体夹心法,镧系元素,时间分辨测量荧光,雷度,微流控,双抗体夹心法,荧光素,荧光强度,博适、微点,比浊法,抗原抗体一步法,/,/,orion,、,国赛、禾柏,金标法,双抗体夹心法,胶体金,胶体金颗粒颜色,奥普、凯创、瑞莱,上转发光,双抗体夹心法,UCP,（稀土颗粒）,发光强度,热景,非,POCT,化学发光,双抗体夹心法,化学发光剂,发光强度,罗氏、新产业,酶联免疫,双抗体夹心法,碱性磷酸酶,底物显色,梅里埃,总结,检验主要检测有方法,检验趋势,POCT,检验方法类型及要求,检验的临床意义,谢谢,