液质联用技术的临床检验应用进展-.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,LC-MS/MS,临床检验应用进展,上海市徐汇区中心医院,李水军,2013.10.29,报告提纲,液质联用技术原理,国内外临床应用进展,在我院的应用情况介绍,同型半胱氨酸,25-,羟基维生素,D,1,5-,脱水葡萄糖醇,问题和展望,质谱技术发展历史,质谱仪组成,由离子源、真空接口、质量分析器和检测器组成。,根据检测器类型可分为磁质谱、四级杆质谱、离子阱质谱、傅里叶回旋共振质谱、飞行时间质谱。,产生带电离子,离子源,真空接口,质量分析器,检测器,引入带电离子,按,m/z,分离和排列,电信号放大,样品引入,数据分析,LC-MS/MS,仪,灵敏度,g/mL,灵敏度,ng/mL,或者,pg/mL,HPLC,$,MS,$,国外,LC-MS/MS,应用,2000,年，,LC-MS/MS,开始应用于药物研发领域，逐步从标准技术成为国际通用技术,2010,年，,LC-MS/MS,广泛应用于欧美临检参考实验室。由于第三方检测机构的推动，,从大型医院临检实验室向中小型、甚至社区医院扩展,Vogeser,Clin Chem Lab Med 2003;41:117-126.,Dooley,Clin Biochem 2003;36:471-481.,Vogeser,Clin Biochem 2008;41:649-662.,LC-MS,在,PubMed,论文发表数量,临检主要应用领域,新生儿筛查：氨基酸、肉毒碱、脂肪酸、有机酸,药物中毒、滥用药物分析、止痛药物分析,治疗药物监测：免疫抑制剂、抗癫痫药物、抗心律失常药,内分泌分析：肾上腺激素、性激素,蛋白鉴定和定量：,C,肽、,PTH,、血管紧张素,功能医学检测,以美国,Mayo,Clinic,为例，,1998,年没有,LC-MS/MS,。,2010,年，,60,台,LC-MS/MS,，,200,万个测试。,Grebe SK,Singh RJ.Clin Biochem Rev.2011 Feb;32(1):5-31.,LC-MS/MS,国内应用现状,在各大医院已普及，主要用于临床药理,但在临检领域尚处于起步阶段,卫生部临检中心,部分医院检验科,第三方检验机构,质谱法常作为参考方法，用于参考测量程序和校准品定值,我院应用简介,2000,年引进,LC-MS/MS,，主要用于临床药理和临床科研。,2002,年开始探索临检应用：同型半胱氨酸、,TDM,、生物标志物（心血管病、糖尿病、前列腺癌）、内分泌（性激素、肾上腺激素）、维生素、氨基酸等。,同型半胱氨酸,(Hcy),：,心血管疾病独立危险因子,H,型高血压增加心脑血管事件,30,倍,0,5,10,15,20,25,30,Reference,Cholesterol,Smoking,Hypertension,No Elevated Fasting Homocysteine,Elevated Fasting Homocysteine,Risk Factors,Relative Risk(Vascular Disease),流行病学研究证明，“,H,型”高血压患者心血管事件发生率较单纯存在高血压的患者高出约,5,倍，较正常人高出约,25-30,倍。,Graham IM,et al.JAMA.1997;277(22):1775-81.,Hcy,代谢,Hcy,Met,AdoMet,AdoHcy,THF,CH3THF,CH2THF,CHOTHF,Cys,B6,BHMT,MTR,B12,B2,蛋氨酸循环,叶酸循环,Refsum H,et al.Clin Chem.2004,;50(1):3-32.,血中,Hcy,形式,Hcy,80%bHcy,20fHcy,正常,tHcy,5-15 mol/L,Hcy,检测方法原理,检测分析流程,临床研究与应用,体检人群血浆,/,血清,Hcy,测定结果,组别,例数,年龄,Hcy,（,mol/L,）,P,值,*,正常对照组,20,39.99.9,13.13.4,心脑血管病高危人群,149,45.07.9,20.212.7,0.01,糖尿病,24,47.25.9,21.312.3,0.01,住院病人血浆,/,血清,Hcy,测定结果,组别,例数,年龄,Hcy,（,mol/L,）,P,值,*,对照组,38,69.212.3,13.96.6,脑梗塞,40,75.09.4,22.014.9,0.01,冠心病,4579.35.8,18.37.9,0.05,高血压,48,71.110.3,16.87.8,0.05,Li S,et al.J Chromatogr B,.2008;870(1):63-,6,7,卫生部临床检验中心,2011,年全国同型半胱氨酸,EQA,循环酶法和,LC-MS/MS,法结果差异明显，,Bias,从,10.64%,至,21.80%,循环酶法的室间差异较大，,CV 9.10-12.61%,。,合作开发检测试剂盒,国内首个获得,SFDA,批准，具有自主知识产权的液相色谱串联质谱,HCY,体外诊断试剂盒,国食药监械（准）字,2007,第,3401206,号,与现有方法比较优势,LC-MS/MS,技术已成为目前生物样品中小分子化合物定性定量测定的金标准方法,高准确性和特异性，直接测定质量,专一、灵敏、通用,高通量：超过,400,测试,/,天,长期运行成本低：使用通用试剂、消耗品成本低廉，大批量测定有优势,25,羟基维生素,D(25OHD),：,维生素,D,营养状况的最佳指标,VITAMIN D,据估计，全球有,10,亿人维生素,D,缺乏或者不足。骨质疏松症只是维生素,D,缺乏的冰山一角，对人体的健康的影响极为广泛。,维生素,D,可降低慢性病，包括癌症、自身免疫性疾病、感染、心血管疾病等发病风险。,20 ng/mL,缺乏,21-29 ng/mL,不足,30-60 ng/mL,充足,25OHD,水平,维生素,D,营养状态,维生素,D,缺乏相当普遍,Holick MF.N Engl J Med.2007;357(3):266-,2,81.,上海的维生素,D,调查情况,25OHD,浓度,维生素,D,状况,比例,150 ng/mL,中毒（,0,）,0%,25,OHD,16.4,5.3 ng/mL,(2.5th-97.5th 7.9-28.8 ng/mL),25OHD,检测市场需求巨大,25OHD,检测方法比较,LC-MS/MS,与,ECLIA,方法比较,y=0.514x+1.269 ng/mL,r=0.590,Sy|x=-11.9 ng/mL(ECLIA for 25OHD3),LC-MS/MS,与,ECLIA,总,25OHD,比较,y=1.364x-1.815 ng/mL,r=0.834,Sy|x=5.22 ng/mL(ECLIA for 25OHD total),LC-MS/MS,与,EIA,总,25OHD,比较,y=1.120 x+7.274 ng/mL,r=0.723,Sy|x=9.06 ng/mL(EIA for 25OHD total),y=0.885x+1.672 ng/mL,r=0.987,Sy|x=-1.88 ng/mL(LC-MS/MS for 25OHD2 and 25OHD3),LC-MS/MS,与美国,CAP,比较,LC-MS/MS,与NIST,的,LC-MS/MS,参考方法比较,y=0.9222x-0.045 ng/mL,r=0.9971,Sy|x=1.47 ng/mL(LC-MS/MS for 25OHD2 and 25OHD3),方法不同导致完全不同的临床判断,1,5-,脱水葡萄糖醇,(1,5-AG),我国糖尿病现状,36,控制糖尿病并发症风险,糖尿病的并发症分为微血管并发症和大血管并发症。,中华医学会糖尿病学分会慢性并发症调查组报告住院,2,型糖尿病并发症患病率分别为：高血压,34.2%,，脑血管病,12.6%,，心血管病,17.1%,，下肢血管病,5.2%,。防治心脑血管疾病所需的医疗支出，占糖尿病医疗费用的最主要部分。,单纯餐后血糖升高者占近,50%,。,37,中国,2,型糖尿病防治指南（,2010,版）,血糖控制不良人群占,63%,Data from NHANES and DCCT,血糖监测指标,1,5AG,果糖胺,10,8,9,7,5,6,4,3,1,2,0,HbA1C,葡萄糖,Weeks before,measurement,1,5-AG,使血糖监控更加严密完整和科学！,1,5-AG,的生理特征,40,组织库存,(500-,1000 mg),肾,饮食摄入,1,5,-,AG,(5-10mg/,天,),尿排泄,1,5,-,AG,(5-10mg/,天,),Buse JB et al.Diab Tech&Ther 2003,5(3):355-363,高血糖,尿排泄,1,5,-,AG,增加,1,5,-,AG,重吸收,血,1,5-AG,下降,1,5-AG,可监测到血糖的细微变化,Yamanouchi T et al.Lancet 1996,2,型糖尿病人治疗过程中考察,1,，,5-AG,的变化,A,组,28,例糖尿病人连续治疗,6,周,B,组,28,例糖尿病人连续治疗,4,周后终止治疗,方法验证,临床应用,Li S et al.J Chromatogr.2008;875(2):459-64.,1,5-AG,与其他指标的相关性,1,5-AG,临床意义,1,5-AG,与血糖控制关系,1,5-AG(g/mL),血糖控制情况,14.0,正常,1013.9,控制良好,69.9,控制一般,25.9,控制差,2,控制非常差,美国糖尿病协会指出预防糖尿病病并发症的重要性在于,严格的血糖控制,。,间歇性的血糖波动,比慢性高血糖对血管内皮细胞的损伤更大。,1,5-AG,测试结果,2,周内发生变化，医生可以利用检测结果及时了解患者血糖控制的改进效果或恶化程度。,1,5-AG,能更准确地反映,餐后血糖,变化情况，有利于监控糖尿病并发症的风险。,优势和潜力,国际认可、国内尚未普及的临检新指标,金标准方法，临床诊断的准确性优势明显,高通量检测，连续测试可超过,300,个,/,天,有效填补临床糖尿病管理的信息数据链缺口,可客观评价病人住院期间的血糖控制情况,其临床应用推广及相关科研价值凸显,质谱技术用于临床问题与瓶颈,技术,操作,政策,技术,方法重现性,通量限制,分析时间,样品处理,和信息系统的连接,内源性物质、同分异构体、代谢物的干扰,基质效应（离子抑制增强）,稳定同位素内标（,ID-MS,）,Vogeser,Clin Chem Lab Med 2003;41:117-126.,Dooley,Clin Biochem 2003;36:471-481.,Vogeser,Clin Biochem 2008;41:649-662.,操作,仪器贵，试剂成本低,初始投资大，长期回报高,技术门槛高，有利自主创新,要求批量分析，报告周期长,配套技术及专用试剂盒有待开发,政策,用于临床检验在国内刚起步,高新技术临床应用社会认同有待提高,缺乏相应的规范性文件和专业组织,没有相应的临检收费标准,未来展望,样品前处理、检测通量和配套试剂的创新,蛋白和多肽定量,高分辨质谱,