克隆技术-PPT.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1,克隆技术,分子水平,细胞水平,个体水平,植物的克隆,动物的克隆,原理：,植物细胞的全能性,技术,原理,动物细胞核的全能性,技术,植物组织培养,原生质体培养,动物细胞培养,克隆培养法,动物体细胞核移植,2,基因克隆,（分子水平）,细胞克隆（细胞水平）,个体克隆（植物克隆和动物克隆）,一、克隆概念的发展（三个水平）,3,单克隆抗体制备过程,注射抗原,B,淋巴细胞,骨髓瘤细胞,细胞融合、筛选,杂交瘤细胞,细胞培养,筛选，继续培养,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,体外培养,注射到小鼠腹腔,单克隆抗体,细胞水平的克隆,4,二、克隆技术的发展,1,、微生物克隆（细胞克隆）,2,、遗传工程克隆（,DNA,克隆）,3,、个体水平克隆,5,三、动物克隆的条件,1,、理论条件,2,、基本条件,具有包含物种完整基因组的细胞核的活性细胞,；,能有效调控细胞核发育的细胞质物质,；,完成胚胎发育的必要的环境条件,。,细胞,(,主要是包含遗传物质的细胞核,),具有的发育全能性。,6,理论基础,植物组织培养,核心概念,植物细胞工程,7,植物细胞的全能性,细胞具有发育成完整植株的潜能。,这种潜能植物细胞的全能性。,植物体的每个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因,。,不同种类、不同个体的植物细胞全能性相同吗？,8,大家有疑问的，可以询问和交流,可以互相讨论下，但要小声点,9,离体的植物器官或组织或细胞（外植体）,愈伤组织,细胞分裂和脱分化,胚状体,或,不定芽,植物幼体,继续发育,（单细胞）,分散,一棵完整的植株,细胞分裂和再分化,需要适宜的环境条件,10,离体的植物器官或组织或细胞（外植体）,愈伤组织,细胞分裂和脱分化,胚状体,或,不定芽,植物幼体,继续发育,（单细胞）,分散,一棵完整的植株,细胞分裂和再分化,光照问题,:,形成愈伤组织不需要光照而愈伤组织的再分化需要光照,愈伤组织细胞中有,叶绿体,吗？,适当调整植物激素的比例,生长素,与,细胞分裂素的浓度及其比例不同调控脱分化和根与芽的再分化,11,是将离体的植物器官,(,根、茎、叶、花、果实、种子等,),、组织,(,形成层、花药组织、胚乳、皮层,等,),、细胞,(,体细胞、生殖细胞等,),、胚,(,成熟和未成熟的胚,),、胚乳、原生质体，在无菌条件下培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱发产生愈伤组织、胚状体或不定芽等，再长成完整的植株，统称为植物组织培养。,根据外植体来源和培养对象的不同，又分为器官培养、组织培养、胚培养、原生质体培养等。,植物组织培养,:,12,愈伤组织：,胡萝卜的愈伤组织,细胞排列疏松而无规则，是相对未分化的薄壁细胞群。,脱分化,：,由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化。,实质是指,已经分化的细胞,失去其特有的结构和功能变成具有未分化细胞（胚性细胞）特征的过程。,13,无毒植物,抗毒植物,再分化,:,脱分化产生的愈伤组织继续进行培养又可以重新分化成根或芽等器官，这一过程称为植物细胞的再分化。,实质是指已去分化的胚性细胞在某种诱导因素的激活下，再出现程序化的分化。,14,用于植物性药物生产,植物组织培养技术在,科学研究,和,生产实践,上具有多方面的用途,用于器官分化、形态建成、物质代谢以及细胞遗传、病毒学等方面的研究。,用于快速繁殖,用于培养无病毒植株,用于改良植物品种,15,培养植物细胞（包括原生质体），借助基因工程的方法，将外源遗传物质（）导入受体细胞（包括原生质体受体）中，或通过细胞融合，显微注射等将不同来源的遗传物质重新组合，再通过对这些转基因细胞或重组细胞进行培养，获得具有特定性状的新植株,植物细胞工程概念,16,高度分化了的体细胞的,细胞核,具有全能性；,细胞质对细胞核的发育具有调控作用,。,对生物遗传病的治疗,对优良品种的培育和扩群,对濒危动物的种质保护,对转基因动物的扩群,直接意义：,体细胞克隆的深远意义：,动物克隆成功的意义？,17,体细胞克隆,胚胎细胞克隆,指用,胚胎细胞核移植的方法,，包括胚胎细胞和胚胎干细胞的核移植，以,克隆出新的个体,，是动物克隆技术的主要方法之一。,动物核移植是将动物的一个体细胞,的,细胞核,（供体核）,移入一个已经,去掉细胞核的次级卵母细胞,中，形成一个,重建的,“,合子,”,，并发育成一个,重组胚胎,这个新的胚胎最终发育为,动物个体,。,18,肠上皮细胞,囊胚,实验证明：胚胎细胞核移植的成功率远高于成体细胞。,1,2,50,为什么动物要比植物难以克隆？,细胞核全能性表达需要什么条件？,19,细胞核移植,动物细胞培养,20,21,动物体内一部分组织,分散的单个细胞,机械消化 或 胰酶消化,原代培养,传代培养,分散成单个细胞后容易培养，细胞所需的营养容易供应，其代谢废物容易排出；同时，分散成单个细胞培养，可使得在细胞水平操作的其他技术得以实现。,用酶消化的是细胞间基质，细胞间基质主要成分有胶原蛋白、层粘连蛋白、纤粘连蛋白、弹性蛋白等成分。用胰蛋白酶可使其消化，从而使细胞相互分离。,为什么动物细胞要分散成单个细胞培养？用酶消化的是什么物质？,22,动物体内一部分组织,分散的单个细胞,机械消化 或 胰酶消化,原代培养,传代培养,原代培养到一定时期，细胞会因为密度过大和代谢消耗引起营养枯竭，有害代谢产物积累，导致细胞不能正常生长，贴壁生长还会出现接触抑制现象，所以需要进行传代培养。,?,23,动物体内一部分组织,分散的单个细胞,机械消化 或 胰酶消化,原代培养,传代培养,分瓶前的培养是原代培养，分瓶后的培养为传代培养。,24,细胞系：,原代培养物开始第一次传代培养后的,细胞,称之为细胞系。,其中，能够连续传代的细胞叫做,连续细胞系,或,无限细胞系,，不能连续培养的细胞称为,有限细胞系,。,大多数,二倍体细胞,为有限细胞系。无限细胞本质上已是发生,转化,（遗传物质改变）的细胞系，如肿瘤细胞。,细胞株：,用单细胞分离法或通过筛选的方法，由,单细胞,增殖形成的,细胞群,，称细胞株。,25,动物体内一部分组织,分散的单个细胞,机械消化 或 胰酶消化,原代培养,传代培养,动物血清,使用,CO,2,培养箱,把,一个单细胞,从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的,技术叫做克隆培养法,（,细胞克隆,）。,克隆培养法,（细胞克隆）,95%,空气,5%,CO,2,。,O,2,是,细胞代谢,所必需的，,CO,2,的主要作用是,维持培养液的,pH,。,26,