1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验五激素对血糖浓度的影响,一、实验目的,1.,掌握,GOD-POD,法测定血糖的原理及方法。,2.,观察胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响。,3.,了解家兔耳缘静脉取血的方法。,二、实验原理,1.,血糖,是指血液中的葡萄糖,。,人体生理血糖水平维持在,3.896.11mol/l,。,2.,血糖的来源与去路,3.,血糖的激素调节,降低血糖,：,胰岛素,升高血糖,：,肾上腺素、胰高血糖素、糖皮质激素和生长素等。,胰岛素,是唯一降低血糖的激素。,胰岛素促进肝脏和肌肉将葡萄糖氧化合成糖原，又加强糖的氧化作用，故可以
2、降低血糖。,升高血糖的激素以,肾上腺素,作用迅速而明显。,肾上腺素通过促进肝糖原分解而升高血糖。,4.,血糖测定的意义,临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的主要依据。,科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。,测定方法,无机化学法：,Folin-Wu,法,有机化学法：邻甲苯胺法,酶法：,葡萄糖氧化酶法,5.,血糖测定的常用方法,（,1,）葡萄糖,O,2,H,2,O,（,2,）,4-,氨基安替吡啉苯酚,H,2,O,2,葡萄糖酸,H,2,O,2,葡萄糖氧化酶（,GOD,）,H,2,O,红色,醌类化合物,过氧化物酶,（,POD,）,505nm,光吸收法测定
3、相对血糖浓度,6.,GOD-POD,法原理,7.,朗,伯,-,比尔定律,当一束平行的单色光通过均匀、无散射的溶液时，在光强度、温度等条件不变的情况下，溶液吸光度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。,=,标准管法测定未知样品含量,A,标,=KC,标,L,A,测,=KC,测,L,C,测,=,A,测,A,标,C,标,722G,型分光光度计的使用,1.,接通电源,，打开开关，,调整,波长,。,2.,比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计,中，,注意,：加入样品量不超过比色杯体积,的,3/4,。,3.,调模式为,“,T,（透射比）”,，对空白对照进行调“,0,”,（开盖）和调“,100,”,（闭
4、盖）。,4.,调模式为,“,A,（吸光度）”，,测定,待测样品的吸光度值。,三、主要,仪器与试剂,试剂：,胰岛素，肾上腺素,酒精，草酸钠，蛋白沉淀剂,酶酚混合试剂，苯甲酸溶液,葡萄糖标准贮存液（,100mmol/L,）,葡萄糖标准应用液（,5mmol/L,）,四、,实验操作,1.,准备,：正常家兔两只，实验前预先饥饿,16h,，称体重,并记录（,kg,）。,兔子抓取方法：一手抓取颈背部皮肤，另一只手托臀部。,2.,制备抗凝管,：在,洁净、干燥,的试管中放入一小勺抗凝剂（草酸钠）。,3.,注射前取血,：一般以,耳缘静脉,取血，拔毛，用乙醇擦洗，使血管充血（弹动几下），在耳缘静脉外侧,远心端,用三
5、棱针扎破放血，将血液滴入抗凝管中，约取,1,2ml,，,边收集边混匀,，以防血液凝固。取血后用干棉球压迫血管止血。,4.,注射激素,：取血后，,一只注射胰岛素，,0.75U/kg,，,60min,。,另一只注射肾上腺素，,0.5mg/kg,，,30min,。,注射方法：皮下注射。肚皮朝上，掂起皮肤，刺入皮下有落空感，回抽无血，缓慢注入激素。,5.,制去蛋白血滤液,：这是注射前的血液。,制备方法：,蛋白沉淀剂,4ml,全血,0.2ml,，混匀，室温放置,7,分钟后，在漏斗上过滤，取滤液，标记为注射前的去蛋白血滤液。,6.,注射后取血并制备血滤液,：方法同前，选择另一只耳朵，注意做好标记。注射胰岛
6、素的家兔，取血后立即腹腔或皮下注射,25%,葡萄糖注射液,10ml,，以免家兔发生胰岛素性休克。,7.GOD-POD,法测血糖,：按下表操作,混匀，置,37,水浴,15min,，调节波长,505nm,，以空白管调零，分别读取,A,测、,A,标,。,读取,6,个,A,值并记录：,A,肾前、,A,肾后、,A,标,A,胰前、,A,胰后、,A,标,加入物,(ml),测定管,(,注射前,),测定管,(,注射后,),标准管,空白管,去蛋白血滤液,0.5,0.5,葡萄糖标准应用液,0.5,蛋白沉淀剂,0.5,酶酚混合试剂,3.0,3.0,3.0,3.0,五、结果与分析,按下式分别计算注射胰岛素或肾上腺素前、后血糖浓度：,A,测,C,测,C,标,（,5 mmol,L,）,A,标,5 mmol,L,为葡萄糖标准应用液的浓度值。,通过计算比较一下家兔注射前后血糖浓度的变化情况。,正常人空腹血糖值：,3.89,6.11,mmol,L,六,、注意事项,1.,采血时用耳缘静脉取血，注意安全，防止动物抓伤。采集时要边采集边混匀。,2.,准确吸取,0.2ml,的全血。,3.,采血后要立即制备去蛋白血滤液。,4.,测定管分胰岛素组和肾上腺素组，应,同时测定,，比较血糖的变化时才有可比性。比色测定应同时进行。,
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