实验一、蛋白质的两性电离及等电点测定.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验一,蛋白质两性电离与等电点,【,教学目标,】,1,、独立操作，一丝不苟地作实验。,2,、仔细观察不同阶段试剂颜色变化及沉淀的出现和消失，通过现象观察能分析蛋白质两性电离的性质，正确填写实验报告。,3,、通过往五支不同,pH,值溶液的试管内加入酪蛋白，观察沉淀出现的情况，确定其等电点。,4,、共同讨论测定等电点的原理。,一、蛋白质的两性电离,多肽链中氨基酸残基中有可解离基团，如：末端,-COO,-,、,-NH,3,+,，酸性氨基酸侧链,-COO,-,，,Lys,的,-NH,3,+,，,Arg,的胍基，,His,的咪唑基。,*,蛋白质的等电点,(pI),当蛋白质溶液处于兼性离子，净电荷为零，此时溶液的,pH,称为,蛋白质的等电点。,NH,3,+,NH,3,+,NH,2,P P P,COOH COO,-,COO,-,正离子 兼性离子 负离子,pH,pI pH=pI pH,pI,+OH,-,+OH,-,+H,+,+H,+,各种蛋白质的氨基酸组成不同，解离情况不同，等电点不同。多数接近,5.0,。,蛋白质的性质之一：两性电离与等电点,【,实验原理,】,蛋白质分子是两性电解质。蛋白质在溶液的,pH,值为等电点时游离为两性离子，溶解度最低，容易沉淀析出。若在大于或小于等电点的溶液中，因蛋白质分子带有同种电荷而相互排斥，不易产生沉淀。,【,试剂,】,1,、,0.5,酪蛋白醋酸钠,2,、,0.01,溴甲酚绿指示剂 变色范围是,pH3.8,5.4,。指示剂的酸色型为黄色，碱色型为蓝色。,3,、,0.02mol,L,盐酸溶液,4,、,0.02mol,L,氢氧化钠溶液,5,、,1.00mol,L,乙酸溶液,6,、,0.10mol,L,乙酸溶液,7,、,0.01mol,L,乙酸溶液,【,操作,】,1,、蛋白质的两性电离,（,1,）取一支试管，加入,0.5,酪蛋白醋酸钠溶液,20,滴和,0.01,溴甲酚绿指示剂,2,滴，摇匀。观察溶液颜色，记录，并分析原因。,（,2,）用细滴管缓慢加入,0.02mol/L,盐酸溶液，、边滴边摇，直至有明显的大量沉淀发生，此时溶液的,pH,值接近酪蛋白的等电点。观察溶液颜色的变化，记录，分析原因。,（,3,）继续滴入,0.02mol,L,盐酸溶液，观察沉淀和溶液颜色的变化，记录，分析原因。,（,4,）再滴入,0.02mol,L,氢氧化钠溶液进行中和，观察是否出现沉淀，记录，解释原因。当继续滴入,0.02mol,L,氢氧化钠溶液时，观察沉淀和溶液颜色的变化。解释其原因。作好记录。,结果及分析,操作,实验结果,简要分析,在酪蛋白溶液中加入,指示剂,滴入,HCL,至出现大量,沉淀,继续滴入,HCL,滴入,NaOH,溶液,继续滴入,NaOH,溶液,至沉淀溶解,2酪蛋白等电点的测定,（,1,）取,5,支试管，编号后按下表的顺序准确地加入各种试剂，然后混合均匀,(,每管加入酪蛋白醋酸钠溶液后，须立即摇匀该管,),。,试剂,(ml),及管号,1,2,3,4,5,蒸馏水（,ml),1.6,_,3.0,1.5,3.4,0.01mol/L,醋酸溶液,_,_,_,2.5,0.6,0.10mol/L,醋酸溶液,_,4.0,1.0,_,_,1.0mol/L,醋酸溶液,2.4,_,_,_,_,酪蛋白醋酸钠溶液,1.0,1.0,1.0,1.0,1.0,溶液的最终,pH,3.2,4.1,4.7,5.3,5.9,沉淀出现的多少,(2),静置约,20 min,，观察每支试管中溶液的混浊度，以,-,，,+,，,+,，,+,，,+,符号表示沉淀的多少，将结果记录于上表中。,（,3,）该实验要求各种试剂的浓度和加入量必须相当准确。除了需要精心配制试剂以外，实验中应严格按照定量分析的操作进行。,思考题,根据实验观察结果，指出哪一支试管的,pH,是酪蛋白的等电点？在等电点时蛋白质的溶解度为什么最低？请结合你的实验结果和蛋白质的胶体性质加以说明。,