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实验四细菌质粒的接合转移课件.ppt

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2、本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,.,*,

3、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,.,*,实验四 细菌质粒的接合转移,李晓华 程国军,1,.,一:目的要求,了解在自然条件下微生物遗传信息传递的方式;,掌握细菌质粒转移的原理和流程。,2,.,二:基本原理,在质粒转移过程中,供体菌与受体菌细胞通过结合作用紧密接触,质粒从供体细胞向受体转移,同时进行质粒复制,这就是结合转移的过程。按能否自主转移,将天然存在的质粒分为两大类。,3,.,4,.,1,转移型质粒,:多为低拷贝的大质粒,含有完整的转移操纵子

4、基因(,tra,)和转移起始位点。能在同种或亲缘关系近的菌体细胞间进行转移。例如:,大肠杆菌:,F,因子、,R1,、,R100,、,R6K,、,RP4,天蓝色链霉菌:致育性因子,pSCP1,、,pSCP2,2,非转移型质粒,:多为高拷贝的小质粒,如大肠杆菌的,ColE1,、,RSF1010,等。由于缺少转移基因(,tra,),不能自主转移,但由于含有与,F,质粒类似的,bom,(或,nic,)位点或诱动基因,mob,(,mobilization,),因而能被带有,tra,基因的转移性质粒诱动而发生转移,。,5,.,6,.,7,.,转移子的筛选,筛选培养基为:,基本培养基,+,抗生素,;,供体和

5、辅助大肠杆菌均营养缺陷型,不能在基本培养基上生长;,未转化成功的受体菌不能在有抗生素的平板上生长。,8,.,THANK YOU,SUCCESS,2025/5/10 周六,9,.,三:实验菌株,供体菌:,E.coli,DH5(pTR102)(Tc,R,),,含有,mob,基因,;,受体菌,:,紫云英根瘤菌,(Tc,S,),;,辅助菌,:,E.coli,MM294(pPK2073),(,Spe,R,),含有,tra,基因。,10,.,四:实验内容,准备,将受体、供体、辅助菌分别培养到对数期:,供体菌:,E.coli,DH5(pTR102)(TcR),,,LB+Tc 20g/ml,,,37,震荡培养

6、1,夜;,受体菌,:,Sinorhizobium fredii,(TcS),,,TY,28,震荡培养,2,天;,辅助菌,:,E.coli,MM294(pPK2073),(,SpeR,),,LB+Spe 50 g/ml 37,震荡培养,1,夜,11,.,用可调定量移液器吸取供体、辅助菌各,0.4ml,,吸受体菌,0.6ml,,都加入同一,eppdorf,管内(每个同学做,1,管),放入离心机内,,10000,转,/min,离心,1,分钟。,倒上清,向沉淀加,1ml,的,TY,液体,用,tip,上下抽吸,洗涤菌体,再,10000,转,/min,离心,1,分钟,倒上清,留,100l,左右用于悬浮菌

7、体。,倒,TY,平板,然后用镊子取灭菌滤纸片贴于已准备好的,TY,平板上(,每,2,个同学,1,片,,2-3,片,/,平板,)。用,200l,的,tip,抽吸,eppdorf,管内沉淀的菌体,打散成浓菌液,将之加到滤纸片中央(切勿倾斜平板,以免菌液流出滤纸片以外),吹干。,28,培养,2,天。,操作步骤(第一天),12,.,倒,SM,平板,将基本培养基(,SM,)溶化,加千分之一的维生素混合液,然后加相应量的四环素(,15U/ml,),每,2,人,1,皿。,另准备,1,瓶基本培养基,不加抗生素,用于对照。,将倒好的平板用报纸包好后放入,4,冰箱,备用。(,注:四环素在强光下易分解,),13,.

8、向灭菌青霉素瓶中加,3ml,无菌水,将已培养的,TY,平板上的滤纸片用无菌镊子放入水中,在震荡混匀器上洗菌体,充分打散,。,向,1ml,的,ep,管加,0.9mL,无菌水,取,0.1ml,菌液,混匀。,吸取,200L,涂皿。,少数同学另取稀释液,涂,1,板不加,Tc,的,SM,做对照。,平板放,28,培养,4-6,天后看结果。,操作步骤(第三天),14,.,五:实验报告内容,转移频率,=SM+Tc,平板的单菌落数,/,纯,SM,平板的单菌落数,SM+Tc,平板的单菌落数为:,纯,SM,平板的单菌落数为:,15,.,六:思考题,你认为本次实验方法适合哪些方面的研究工作?,16,.,THANK YOU,SUCCESS,2025/5/10 周六,17,.,

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