生化检验常见问题及处理方法课件.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/3/13,#,生化检验常见问题及处理方法,黑龙江中医药大学附属第一医院,艾民,2025/5/10 周六,1,病人准备,标本核收,标本分发与处理,分析测定,结果报告,结果发布,检验后标本的保存,检验后废弃物处理,检验申请,标本采集,标本运输与保存,检验前过程,检验过程,检验后过程,生化检验的操作流程,2025/5/10 周六,2,生化检验常见的问题,一、检验前常见问题,1,、患者的准备问题；,2,、标本的采集、运输、验收等问题。,二、,检验过程常见问题,1,、标本处理问题；,2,、水质问题；,3,、交叉污染问题；,4,、校准问题；,5,、试剂问题；,6,、仪器问题；,7,、参数问题；,8,、质控问题,9,、干扰物质,三、检验后常见问题,1,、检验报告基本信息问题；,2,、检验报告签发问题。,2025/5/10 周六,3,一、检验前常见问题及处理,2025/5/10 周六,4,检验前的质量管理是检验质量管理中最薄弱、最易出现问题、最难控制的环节，标本质量不符合要求占,60%-80%,。,按时间顺序包括：,检验申请,患者准备,和识别,原始样本采集、运送,和实验室内传递。,2025/5/10 周六,5,检验前常见问题及处理,1,、患者的准备的常见问题及处理,:,（,1,）饮食,：餐后、饮料、烟酒等，,影响患者的检测结果。,处理方法：,患者,空腹（,8-1,2,小时）。,（,2,）药物等其他因素的影响,:,如含,VC,、抗肿瘤药物、,降脂药物、输液等。,处理方法：,尽量停止使用药物。超过药物的半衰期。,2025/5/10 周六,6,（,3,）运动：剧烈的运动可使血中的一些酶类、离子等结果发生变化。,处理方法：,检查前一天不要做剧烈运动。短期休息，平稳,10,分钟以上。,（,4,）情绪：情绪激动，影响神经内分泌系统，使一些检验结果偏高。,（,5,）体位：从立位到卧位使一些结果下降。,（,6,）特定时间采血：因人体生物节律的变化，不同时间采血检验结果也会随着变化。如激素、糖耐量等。,2025/5/10 周六,7,检验前常见问题及处理,2,、标本的采集、运输、验收等问题及处理。,（,1,）,标本的采集：,止血带压迫时间过长、标本混有气泡、,溶血、污染、输液时采血、标本量不足等。,（,2,）,标本运输：时间过长、过度震荡、污染、高温变质、,冷冻溶血、,阳光照射等。,处理方法：,及时送检、用标本转运箱，外委标本要求要严格避免上述情况。,2025/5/10 周六,8,（,3,）标本验收：标本错误、标本外观溶血、脂血、样本留取时间过长等。,处理方法：,严格核对标本、拒收严重溶血、脂血、标本不足,留取,时间过长的标本。,2025/5/10 周六,9,二、检验过程常见问题,2025/5/10 周六,10,检验过程有三种说法：,实验室接收标本开始，直至获得检测结果的过程。,自仪器检测开始至获得检测结果。,标本开始处理至,获得检测结果。,2025/5/10 周六,11,基本概念,检测系统：一个检验项目所涉的,仪器、试剂、校准品、测量程序,（操作程序、质控程序、维护保养程序、检测用水）,、操作人员、消耗品、质控品,等组合。,2025/5/10 周六,12,量值溯源：是通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果能够与规定的参考标准联系起来的一种特性。,（通常是国家计量基准或国际计量基准）,2025/5/10 周六,13,基质效应：处于分析物周围的基质（粘度、表面张力、离子强度等对分析物测定结果的影响。,摩尔消光系数,(,),：在特定条件下，一定波长的光，光径1cm时，通过所含吸光物质的浓度为1mol/L时的吸光度。,2025/5/10 周六,14,自动化分析仪概述,:,自动分析仪的主要部件,加样系统,比色系统,分光系统,供排水系统,清洗系统,操作控制与数据处理系统,2025/5/10 周六,15,生化分析仪结构组成,加样系统,比色系统,分光系统,试剂仓,进样架系统,样品取样单元,试剂取样单元,混合部件,光源,比色杯,(,分立式比色转盘,),恒温装置,(,水浴、空气浴、恒温液循环间接加热,),光栅分光式,(,无相差蚀刻凹面光栅,),后分光集束式,光路系统,2025/5/10 周六,16,自动生化分析仪的工作程序,计算机进行计算,按仪器设定标准曲线,打印机打印结果,比色杯,光电感应器检测,吸光度变化,样,本,比色杯,试,剂,1,比色杯,搅,拌,混匀,试,剂,2,比色杯,比色杯,搅,拌,反应,比,色,传,输,传输,人工编程,机械臂代替手工,2025/5/10 周六,17,自动分析仪的基本分析方法,终点法：,1,点终点法,2,点终点法,多点终点法,速率法：,速率法,2,点速率法（固定时间法）,2025/5/10 周六,18,定标方法,对于终点法和两点速率法，必须通过使用标准液，建立一条标准曲线。,速率法检测的酶类可以采用理论因数法（,K,因数），但多数,实验室对酶类（速率法）测试采用标准液校正Factor的方式，以消除仪器和试剂的系统误差。,2025/5/10 周六,19,2,点定标,两点定标：以水作为零点，标准液作为另一点，建立标准曲线。,对于一些特殊试剂如：,K,，,Na,，,CL,，因线性范围限制等，一般不以水作为零点，采用定值的高、低两个标准液，建立标准曲线。,2025/5/10 周六,20,多点定标,多点定标：采用两个以上的标准液来建立一条标准曲线。该曲线的特征一般为非线性，即吸光度与浓度的变化不是直线关系。免疫比浊法,（,胶乳增强）,测定的试剂，多为此方法。因为抗原抗体反应形成的浊度的线性范围较窄。,2025/5/10 周六,21,生化试剂的分类,NAD,（,P,）,H,系统指示反应,苯衍生物指示反应,H,2,O,2,偶联的指示系统,抗原抗体反应指示系统,其它显色反应,2025/5/10 周六,22,NAD,（,P,）,H,系统指示反应,NADH,和,NADPH,在,340nm,有最,大吸收峰，而,NAD,+,和,NADP,+,在,340nm,无吸收峰，利用其偶联的,脱氢酶,(,工具酶,),反应，根据,340nm,吸光度的变化，可以测定,物质的浓度或活性。,常见检验项目：,ALT,、,AST,、,CK,、,LDH,、,-HBDH,、,UREA,、,NH,4,+,CO2,、,Glu,（己糖激酶法）等,2025/5/10 周六,23,NAD,+,-,NADH系统,ALT,（,GPT,）的测定原理：,R1,：,NADH,、,LDH,；,R2,：,L-,丙氨酸、,-,酮戊二酸,试剂,化学反应,ALT,L-,丙氨酸,+-,酮戊二酸,丙酮酸,+L-,谷氨酸,LDH,丙酮酸,+,NADH,+H,+,L-,乳酸,+,NAD,+,+H,2,O,酸,计算,ALT,(U/L)=,A,R,min/,A,S,minC,=,A,R,minF,AR:,样本,A,变化率；,AS,：标准,A,变化率,;,C,：标准品示值；,F:,校准因素或用理论因素值（,F,）（,F,）,=10,6,/,TV/SV,2025/5/10 周六,24,苯衍生物指示反应,如：,p-NP(磷酸对硝基苯酚,）和,p-NA(硝基苯酚),指示系统：,p-NP,和,p-NA,在,405nm,有特征性吸收峰，根据,405nm,吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。,临床项目有,ALP,、,r-GT,、等。,2025/5/10 周六,25,ALP,（,AKP,）的测定原理,试剂,R1,：,AMP,缓冲液、,MgCl,2,；,R2,：对硝基苯磷酸盐,化学反应,ALP,磷酸对硝基苯酚,+H,2,O,对硝基苯酚,+,磷酸盐,计算,ALP,(U/L)=,A,R,min/,A,S,minC,=,A,R/,minF,2025/5/10 周六,26,H,2,O,2,偶联的指示系统（Trinder反应）,H,2,O,2,在过氧化物酶的作用下，可使无色色素原氧化成有色的色素，导致某一波长吸光度的增加，因此可用来测定物质的浓度或活性。,临床项目有,TC,、,TG,、,HDL-C,、,LDL-C,、,Glu,（氧化酶法）,Cr,、,UA,等。,2025/5/10 周六,27,GLU,的测定原理,（氧化酶法）,试剂,R1,：,4-,氨基安替吡啉、抗坏血酸氧化酶,R2,：葡萄糖氧化酶（,GOD,）、过氧化物酶（,POD,）酚,化学反应,GOD,葡萄糖,+O,2,+H,2,O,葡萄糖酸,+H,2,O,2,计算,GLU(mmol/L)=A,R,/A,S,C,POD,2H,2,O,2,+4-,氨基安替吡啉,+,酚,醌亚胺,+4H,2,O,2025/5/10 周六,28,抗原抗体反应指示系统,特异性抗体与抗原,(,待测物质,),在相应的缓冲环境下反应生成抗原抗体复合物，形成一定的浊度，导致特定波长透光率的改变。在抗体过剩的前提下，改变程度与抗原浓度成正比,临床项目有,apoAI,、,apoB,、,Lp(a),、,IgG,、,IgA,、,IgM,、,C3,、,C4,、,CRP,等,2025/5/10 周六,29,免疫透射比浊法，抗原抗体免疫复合物形成的浊度的,大小在合适的抗体浓度下与抗原含量成正比,试剂,R1:,磷酸盐缓冲液、聚乙二醇、表面活性剂等,R2,（抗血清）,:,羊抗人,apoA,l,或,apoB,化学反应,抗原,(,血清中的,apoA,l,或,apoB)+,抗体,(,抗血清试剂,),缓冲环境,抗原抗体免疫复合物,计算,吸光度,-,浓度曲线,2025/5/10 周六,30,其它显色反应（,TP,）,测定原理：蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子,作用产生紫红色络合物，导致,540nm,吸光度的增加，增加,的程度与蛋白质的含量成正比。,碱性条件,酞键,+Cu,2,+,紫红色络合物,蛋白含量（,g/L,）,=A,R,/A,S,C=A,R,F,A,R,:,测定吸光度；,A,S,：标准吸光度,C,：标准值,F:,仪器自动换算的因数,2025/5/10 周六,31,其它显色反应（,Ca,2,+,）,Ca,2,+,测定原理：,甲基麝香草酚兰,(MTB),在碱性条件下可与,Ca,2,+,形,成红色络合物，引起,612nm,吸光度的上升，上升程,度与,Ca,浓度成正比。,碱性条件,MTB+Ca,2,+,红色络合物,2025/5/10 周六,32,二、检验过程常见问题及处理,1,、标本处理问题及处理：,放置时间过长、离心不充分、血清剥离不当等。,处理方法：,应在2h内分离血清/血浆，尽量缩短时间；,离心时间一般,5-10,分钟,/3000,转；,新采集标本,应室温（2225）放置3060分钟，使其自行,凝集后离心。不能及时做的标本分离出血清，室,温放置不超过4小时，2-,4保存不超过8小时，在,-20条件下可保存较长时间。,2025/5/10 周六,33,二、检验过程常见问题及处理,2,、水质问题及处理：,生化用水不合格。常影响血清中离子及其他生化项目的检测，常被忽略。,处理方法：,纯水分级(GB6682-2008水标准)与应用领域,三级水：电阻率,0.2M/cm,，主要用于冲洗玻璃器皿，水浴等；,二级水：电阻率,1M/cm,，用于制备常用试剂、缓冲液、仪器管道和比色杯清洗,等；,一级水：电阻率,18.25M/cm,，常用于,HPLC,、原子吸收、分子生物学、细胞和细,菌培养等。,生化用水：电阻率,2M/cm,，细菌,10clu/ml,或参考仪器说明书规定。,电导率s/cm（微西门子厘米）1/电阻率。,2025/5/10 周六,34,二、检验过程常见问题及处理,3,、交叉污染问题及处理：,（,1,）样品针、试剂针、搅拌棒、反应杯、管路系统等清洗不干净，导致交叉污染。,处理方法：,按仪器说明书要求进行保养、按要求及时更换零部件定期对仪器校准。,如：每日用无水乙醇擦拭样品针、试剂针、搅拌棒，进行日保养、周保养、月保养、年保养等。,2025/5/10 周六,35,（,2,）检验项目间的交叉污染,相邻检验项目的干扰，,A,项目试剂或产物中含有,B,项目的测定物质或影响,B,项目反应，而导致,B,试验结果的改变。,如：Mg放在ALP项目后面测定，可能会使检测结果偏高或重复性差。因ALP试剂中含有,Mgcl,2,，使测定结果偏高等。,处理方法：,调整实验的前后顺序来消除这种影响；,在两个项目之间设定其他项目或设置清洗剂并设定清洗次数。,2025/5/10 周六,36,二、检验过程常见问题及处理,4,、校准问题及处理；,仪器不定期仪器校准、检测系统不校准、校准品失效或适用不当、校准品不匹配、更换试剂批号或仪器维修后不校准，导致结果不良。,校准的分类：,仪器校准,/,产品校准：由仪器工程师在仪器安装使用后定期进行，主,要校准仪器的光路系统、温控系统、加注系统（样品针、试剂针位置）等，通常是发给校准证书或校准报告。,检测系统的校准,/,功能校准：由检验人员使用校准物进行的分析校准。,2025/5/10 周六,37,处理方法：,定期进行仪器校准，当仪器维修、生化试剂批号或质控出现异常时进行校准，正确选择和使用校准品，（试剂生产厂家校准品），有良好的溯源性，注意质控品的分装和保存。,2025/5/10 周六,38,5,、试剂常见问题及处理：,（,1,）试剂质量问题：,（,2,）试剂是否在有效期内及开瓶稳定性：,（,3,）不同试剂批号混合、新旧试剂混使用,（,4,）试剂瓶长期不清洗使新倒入试剂被污染,（,5,）,试剂空白,（,6,）底物耗尽：,2025/5/10 周六,39,5,、试剂常见问题及处理：,（,1,）试剂质量问题：,试剂有效成分含量不足，导致线性范围窄，高值测定不高；,试剂底物浓度不足。反应曲线斜率下降，灵敏度变低；,试剂自身不稳定，自行分解，工具酶纯度不够，杂酶含量过,多，测定结果变化。,2025/5/10 周六,40,（,2,）试剂的有效期及开瓶稳定性：,试剂是否在有效期内；,试剂开瓶时间过长，超过说明书中开瓶期或接近开瓶期，使试剂变质、挥发、,PH,改变等影响该项目的化学反应。,2025/5/10 周六,41,（,4,）不同试剂批号混合、新旧试剂混使用；,试剂稳定的情况下，进行该项目校准得到一个,F(,校准因素,),值，在稳定的期内，反应的吸光度变化乘以,F,值等于测定结果。如果试剂的成分含量发生变化，再校准后F,值就会发生变化，如果还用上述的,F,值得出的结果不准确。,（,5,）试剂瓶长期不清洗使新倒入试剂被污染。,灰尘、细菌、大量杂质、盐类含量高等影响测定结果。,2025/5/10 周六,42,（,6,）试剂空白,试剂空白吸光度是反映试剂质量的指标之一。每种试剂都有一定的空白吸光度范围，提示该试剂是否变质；如：,利用Trinder反应（,H,2,O,2,偶联）为原理的检测试剂会因含酚类物质被氧化为醌而变为红色。空白吸光度会超过说明书限值。,ALP,、r,-GT,等检测试剂会因基质分解出硝基酚或酚基苯胺而变黄。空白吸光度会超过说明书限值。,ALT,、,AST,负反应，在放置过程中试剂空白吸光度会因NADH自行氧化为NAD+而下降。因此，试剂空白吸光度超出试剂说明书的限值时，仪器会自动报警，提示更换试剂。,2025/5/10 周六,43,2025/5/10 周六,44,2025/5/10 周六,45,二、检验过程常见问题及处理,（,7,）底物耗尽：,使用连续监测法、两点法测定酶活性时，若酶活性非常,高，底物接近被耗尽，吸光度上升或下降会超过某一吸光度,变化范围，监测期的吸光度将偏离线性，使测定结果不可靠,上述等试剂原因可导致测定结果不良。,2025/5/10 周六,46,二、检验过程常见问题及处理,处理方法：,（,1,）购买质量好的试剂：精密度高、线性范围宽、开瓶稳定期长、批间差小、偏倚小、抗干扰能力强等,（,2,）试剂瓶在仪器内使用时间不要过长，及时更换或清洗。,（,3,）,不同批号试剂或新旧试剂建议不要混用，如果混用最好重新定标；,（,4,）清洗好试剂针、定期维护和保养等,2025/5/10 周六,47,二、检验过程常见问题及处理,6,、仪器常见问题及处理,（,1,）加注系统,（,2,）温控系统,（,3,）光路系统,（,4,）搅拌系统,（,5,）清洗系统,2025/5/10 周六,48,6,、仪器常见问题及处理,（,1,）加注系统常见问题导致结果不良：,加样针、试剂针脏污、堵塞；密封垫老化、磨损；位置偏移；针变形、注射器密封不良有气泡、管路漏气等。,解决方法：,每日擦拭样本针（试剂针）并经常通透，避免取样不准和残留；按说明书要求及时更换密封垫和注射器；定期进行仪器校准。,2025/5/10 周六,49,2025/5/10 周六,50,（,2,）温控系统常见问题导致结果不良：,试剂仓制冷故障，试剂仓温度超标；反应槽水温变化（加热故障、环境温度过高）等。,处理方法：,定期进行仪器校准；发现制冷和加温故障时立即维修，并检查试剂是否失效；改善环境温度。,2025/5/10 周六,51,（,3,）光路因素导致结果不良,:,光源灯老化、透光窗脏污（灰尘、污物）、反应槽水质脏污、反应杯脏污或划痕、电压变化、分光纯度等。,处理方法：,购买正规的光源灯（该仪器厂家生产）按说明书要求的使用时间或根据光度计检查情况及时更换；定期检定光路系统；定期擦洗和反应槽换水、更换反应杯、保持光路清洁、无灰尘等。,2025/5/10 周六,52,（,4,）搅拌系统导致结果不良：,搅拌棒污染、纤维蛋白缠绕、搅拌位置偏移、旋转不良等影响结果,处理方法：,每日擦拭搅拌棒，防止纤维缠绕等。,（,5,）清洗机构导致结果不良：,管路真空不良使废液吸不干净；液路故障（管路堵塞漏水）、清洗液失效等。,处理方法：,定期的维护和保养、防止结晶形成及掉落等,2025/5/10 周六,53,二、检验过程常见问题及处理,7,、参数常见的问题及处理：,（,1,）方法学选择错误,（,2,）样本加入量、试剂量输入错误、样本量和试剂量（,S,、,R1,、,R2,）未要求的比例输入；反应总体积不足；校准品浓度值输入错误；,（,3,）反应方向、量程点、测光点输入错误。,处理方法：,按试剂说明书输入或请试剂供应商应用工程师输入。,2025/5/10 周六,54,二、检验过程常见问题及处理,8,、质控问题及处理,（,1,）不做质控、做质控不认真分析、质控规则选择不当、控制限选择不合理、质控品保存不当、稀释不准确等。,处理方法：,应每日做室内质控，最好两个水平以上，认真进行质控分析（月小结、失控分析等）确定合理的质控限，选择瓶间差小、稳定性好的质控品，在,-20,度冰箱保存。按正确的方法稀释和溶解质控品，稀释的量具要准确等。,参加省内或卫生部室间质评，不合格应详细查找原因，更正。,2025/5/10 周六,55,二、检验过程常见问题及处理,9,、干扰物质,（,1,）溶血、脂血、高胆红素血；,（,2,）患者治疗的药物、摄入的物质（酒精、饮料等）；,（,3,）患者的病理代谢产物；,（,4,）样本处理过程的添加物（抗凝剂、防腐剂等）；,（,5,）样本处理过程中操作者引入的污染物；,（,6,）样本基质本身变化（与新鲜血清不同的理化特性）,（,7,）,检测过程携带的,污染；,（,8,）试剂的质量、气泡等。,2025/5/10 周六,56,干扰机制：,（,1,）物理作用：颜色、光散射、电极响应等,（,2,）化学作用：干扰物可以竞争试剂、抑制指示反应、改变分析物性质等,（,3,）酶抑制作用：,干扰物可以螯合酶活化所必需的金属离子、结合酶的催化部位、氧化酶分子内所必须的巯基等,（,4,）非特异性：干扰物质与分析物以相同的方式与试剂反应，在免疫化学方法中干扰物能和抗体发生交叉反应,（,5,）水的取代：样本中非水溶性物质（蛋白质、脂质等）取代水溶性血浆的体积。,（,6,）基质效应：改变样本基质的物理特性等,2025/5/10 周六,57,三、检验后常见问题及处理,2025/5/10 周六,58,三、检验后常见问题及处理,正常情况下，检验报告单应包括以下信息：,医院名称、实验室名称、仪器名称、实验室联系方式；,患者的标识：姓名、性别、年龄、科别、民族、唯一标识、,临,床诊断,等；,检验申请者姓名或唯一标识；,标本的识别：标本种类、,标本状态、采集时间、接收时间,；,检验项目名称,、结果、单位、参考区间、异常提示；,检验科者、审核者标识、报告时间,。,2025/5/10 周六,59,三、检验后常见问题及处理,1,、检验报告基本信息常见问题及处理：,（,1,）多数临床医生不标注临床症断；,处理方法：,建议医生标注临床诊断或简单症状等。,（,2,）在标本状态有改变时不标注标本状态；,处理方法：,标本状态改变时标注。如：脂血、溶血、黄疸等。,（,3,）不标注或标注不全的标本采集、接收、,报告的日期和时间；,处理方法：,时间应标注到分钟，如：,2017-11-7,：,53,（,4,）检验项目名称不规范；,处理方法：,规范。如：谷丙转氨酶谷氨酸氨基转移酶等。,2025/5/10 周六,60,三、检验后常见问题及处理,2,、检验报告签发问题,检验者和审核者不进行手签字或签字不全,处理方法：,手签字，最好是双签字（急诊除外）具有法律效力。,2025/5/10 周六,61,小结,1,、患者的准备问题；,2,、标本的采集、运输、验收等问题。,3,、标本处理、水质、交叉污染问题,4,、仪器、试剂、校准等问题,5,、检验报告基本信息问题；,6,、检验报告签发问题。,2025/5/10 周六,62,谢谢！,2025/5/10 周六,63,2025/5/10 周六,64,