实验六土壤中微生物的分离和专家讲座.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,一 试验目标,1 学习掌握倒平板方法和几个分离纯化微生物基本操作技术,2 了解不一样微生物在液体,半固体,固体培养基上培养特征,3 学习并掌握各种无菌操作接种技术,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第1页,二 试验原理,1 微生物分离纯化原理,自然条件下微生物往往是不一样种类微生物混合体。为了研究某种微生物特征或者要大量培养和使用某种微生物，必须从这些混杂微生物群落中取得纯培养，这种取得纯培养方法称为微生物分离与纯化。,在自然界中，上壤是微生物生活良好环境，其中生活微生物数量和种类都是极其丰富。土壤中微生物数量与种类非常多,在通气良好花园土中，好气性微生物占有绝对优势。本试验以花园土为材料分离土壤中好气性细菌.,分离微生物惯用方法有稀释平板分离法和划线分离法，依据不一样材料，能够采取不一样方法，其最终目标是要在培养基上出现欲分离微生物单个菌落，必要时再对单菌落深入分离纯化。在用稀释平板法分离微生物时，还能够同时测定待分离微生物数量。,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第2页,倒平板方法,倒平板（a）皿架法；（b）手持法,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第3页,稀释平板计数法中样品稀释和稀释后取样培养,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第4页,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第5页,平板涂布法,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第6页,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第7页,平板划线分离法（a）交叉划线法。（l、2、3、4为依次划线起点）；（b）连续划线法（1、2力依次划线起点）；（c）划线操作,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第8页,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第9页,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第10页,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第11页,2 微生物培养特征原理,1)微生物菌落特征,在固体平板培养基上，单个微生物细胞或孢子生长繁殖能够形成一个含有特定形状菌落。在一定培养基上和一定培养条件下，微生物菌落特征是稳定，所以经过菌落观察能够识别细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等几大类微生物。菌落基本特征包含菌落形状、大小、边缘、隆起度和颜色等。,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第12页,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第13页,2)微生物培养特征是指微生物培养在培养基上所表现出来群体形态和生长情况.普通可用斜面,液体,和半固体培养基来检验不一样微生物培养特征.它们培养在斜面培养基上,能够呈丝线状,刺毛状,串珠状,舒展状,树枝状或假根状.生长在液体培养基内,能够呈浑浊,絮状,黏液状,形成菌膜,上层清楚而底部显沉淀状.穿刺接种在半固体培养基中,能够沿穿刺线向四面蔓延,或仅沿穿刺线生长,也可上层生长得好,甚至连成一片,底部极少生长;或底部长好,上层甚至不生长.,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第14页,固体斜面培养特征,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第15页,液体培养特征,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第16页,半固体穿刺培养特征,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第17页,3 微生物无菌操作接种原理,1)斜面接种,菌种管和待接试管在手中拿法,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第18页,试管拔塞后灭菌,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第19页,试管拔塞后取菌,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第20页,2)穿刺接种,穿刺接种,（a）水平穿刺接种；（b）垂直穿刺接种,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第21页,三 试验器材,1 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基,倒平板,斜面,液体,半固体培养基.,2 器材：花园土，99mL无菌水1瓶，9mL无菌水4支，1mL枪头,0.1mL,直径9cm无菌平皿，天平，试管架，无菌称量纸，酒精灯，火柴，接种环，涂布棒，记号笔等.,3 菌种:金黄色葡萄球菌,变形杆菌,枯草杆菌.,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第22页,四 试验方法,1 倒平板:,在微波炉中将三角瓶内培养基熔化,取灭菌培养皿,每组倒12个平板.,2 土壤稀释液制备,称取1g花园土，无菌操作倒入99mL无菌生理盐水中,在震荡器中振荡20分钟,使微生物细胞分散，静置2030s，即成10,-2,稀释液；再用 lmL移液器，吸收10-,2,稀释液lmL，移入装有9mL无菌水试管中，振荡，让菌液混合均匀，即成10,-3,稀释液；再换一支无菌吸头吸收10,-3,稀释液lmL，移入装有9mL无菌水试管中，振荡，即成10,-4,稀释液；以这类推，连续稀释，制成 10,-2,、10,-3,、10,-4,、10,-5,等一系列稀释菌液。,3 平板涂布,将培养基平板编号，然后用移液枪吸收10,-3,、10,-4,、10,-5,等一系列稀释菌液各0lmL对号接种在不一样稀释度编号琼脂平板上（每个编号设两个重复）。再用无菌涂布棒将菌液在平板上涂布均匀，每个稀释度用一个灭菌涂布棒；更换稀释度时需将涂布棒灼烧灭菌。,4 培养,将涂布好平板平放于桌上1020min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转。恒温37培养,两天后观察.,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第23页,5 连续划线分离:,用灭菌接种环蘸取10,-2,稀释液一环于已凝固平板上进行划线。划线可按以下两种方式进行：一个为交叉划线法，是在平板一边做第一次“Z”字形划线。转动培养皿约70角，将接种环在火上烧过并冷却后，经过第二次划线部分，做第二次“Z”字形划线。同法进行第三次、第四次划线。另一个为连续划线法，是从平板边缘一点开始连续作紧密波浪式划线，直至平板中央。转动培养皿 180，再从平板另一边（不烧接种环）一样划线至平板中央。6 培养 将平板倒转,恒温37培养两天后观察.,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第24页,7 培养特征观察接种,分别取斜面,半固体和液体培养基,作好标识,分别按要求接种金黄色葡萄球菌,变形杆菌,枯草杆菌.,8 将接好培养基置于37培养两天后观察.,9 环境中微生物,取一个平板移取皿盖,使培养基暴露在空气中;将另一个平板移取皿盖,放在一个较洁净环境,半小时后将两个皿盖该上,将平板倒转,恒温37培养两天后观察.,10 体表不一样部位微生物,取一个平板,用记号笔在平板后面化分为几部分,每部分标识好要检测部位,如手,头发,衣服等,可将洗手前后分别检测.然后用不一样人体部位按在标识好平板部位上,将平板倒转,恒温37培养两天后观察.,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第25页,五 试验汇报与思索题,1 在平板划线法中，为何每次都需将接种环上剩下物烧掉？,2 为何要将培养皿倒置培养？,3 怎样确定你所得到单菌落是否是纯种.,4 见书本第53页六。,实验六土壤中微生物的分离和专家讲座,第26页,