尿素测定试剂盒(尿素酶谷氨酸脱氢酶法).docx

尿素测定试剂盒（尿素酶-谷氨酸脱氢酶法）
标准化操作规程
1目的
规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。
2授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。
3适用范围：本试剂适用于体外定量检测人血清、血浆或尿液中尿素的浓度。
4检验方法
本试剂盒采用酶法测定尿素的浓度。
5检验原理
样品中的尿素在试剂中脲酶的催化下与水反应生成氨和二氧化碳，生成的氨
与试剂中的a-酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶（GLDH ）的催化下产生谷氨酸，同时NADH
被氧化为NAD+,从而使340nm处的光吸收值下降。通过监测340nm处光吸收值下
降的速率，可以测定计算出样品中尿素的浓度。
尿素+ H2O腺酶2NH3 + CO2
NH3+ a-酮戊二酸 + NADH gldh 谷氨酸 + NAD +
6标本要求
6.1血清或血浆样本应及时离心分离，不得使用溶血或被污染的样本。血浆样本
应采用肝素钠或EDTA抗凝。请勿使用氟化物防腐的血清和肝素铵抗凝的血浆样
本。
6.2尿液样本应用无氨污染的去离子水1:20稀释后再测试，结果乘以稀释倍数。
6.3样本应于2C8C保存，以免细菌分解尿素。
7试剂及配套品
7.1试剂来源
长春迪瑞医疗科技股份有限公司尿素试剂盒（酶法）
7.2试剂组成
试剂盒
主要组成成份
浓度/范围
试剂1 (R1)
a-酮戊二酸
7.5mmol/L
谷氨酸脱氢酶
> 8U/L
还原型辅酶I
0.35mmol/L
二磷酸腺苷
1.5mmol/L
Tris缓冲液
115mmol/L
试剂2(R2)
Tris缓冲液
115mmol/L
尿素酶
> 4U/L
a-酮戊二酸
7.5mmol/L
含非反应性填充物及稳定剂
/
7.3试剂的稳定性与贮存
7.3. 1试剂在2C8C条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为18个月。
试剂开封后在2C8C条件下可稳定30天。
7.4试剂的变质指示
若试剂混浊，或以水为空白在340 nm处吸光度值低于1.1A时，则不能使
用。
8实验仪器及性能指标
8.1实验仪器
迪瑞CS系列全自动生化分析仪
8.2试剂性能指标
试剂空白：
试剂空白吸光度：A21.1。
试剂空白吸光度变化率：△A/min<0.04/min。
分析灵敏度:测试1mmol/L被测物时，吸光度变化率（^A/min）〈-0.5。
8.2.3 线性范围为0.2mmol/L〜35.7mmol/L;线性相关系数r> 0.99; [0.2, 7]
mmol/L范围内，线性绝对偏差应不超过±1.3mmol/L; （ 7, 35.7] mmol/L范围内，
相对偏差不超过±15%。
准确度：相对偏差应在士 15%范围内。
测量精密度：
重复性：CV<5.0%O
批间差：R<6.0%。
9校准程序
9.1校准品来源
长春迪瑞医疗科技股份有限公司生产的临床化学校准血清
9.2校准品的组成：人血清
9.3校准品的存贮：
未复溶的校准血清在避光条件下，2〜8C可稳定至标签失效期。
复溶后校准血清在避光条件下，2〜8C可稳定7天；15〜25C可稳定1天;
-20C可稳定30天。
9.4校准品使用注意事项
若该复溶血清受细菌污染，将会降低许多成分的稳定性。
不同批号的校准血清不能交叉使用，因为批号于批号之间的赋值不同。
请勿用嘴直接吸取试剂，避免接触皮肤、眼睛及粘膜，一旦接触，应立即
用大量水冲洗。
9.5 校准程序
建议使用试剂盒配套的校准品，以纯化水和校准品进行2点校准测定。仪器
自动拟合成校准曲线。当试剂批号更换或质控失控时，需要重新校准。
10质量控制
10.1质控品来源
长春迪瑞医疗科技股份有限公司生产的临床化学质控血清（水平I和水平II）
10.2质控品组成：人血清
10.3质控品存贮
未复溶的校准血清在避光条件下，2〜8C可稳定至标签失效期。
复溶后校准血清在避光条件下，2〜8C可稳定7天；15〜25C可稳定1天;
-20C可稳定30天。
10.4质控品使用注意事项
若该复溶血清受细菌污染，将会降低许多成分的稳定性。
请勿用嘴直接吸取试剂，避免接触皮肤、眼睛及粘膜，一旦接触应立
即用大量水冲洗。
因批与批之间的质控血清赋值不同，所以不同批号的质控血清不能当做
校准血清使用。
10.5质量控制
建议使用迪瑞公司的质控品，进行质量控制。实验室应自行建立质控区间和
限值。若质控值失控，每个实验室应采取纠正措施。
11操作程序
11.1试剂准备：试剂1、试剂2均为液体试剂，可直接使用。
11.2项目参数：
测定温度
37C
R1用量
240 pL
主波长
340nm
R2用量
60pL
副波长
405nm
样本用量
3 L
比色杯光径
1.0cm
延迟时间
30s
吸光度范围
0A2A
反应时间
60s
测定模式
两点速率法
反应方向
负反应
11.3样本检测步骤:

副波长：405nm

记录吸光度A1 记录吸光度A2
3s
—30s
60s -

1F 1
F 1
¥ *
r 1
r
温度：37°C
主波长：340nm
样本用量：3pL
试剂R1用量：240 ML
加试剂R2:60ML
11.4计算方法:
尿素浓度（mmol /L ）样本管A /m：n校准液浓度（mmol /L ）
校准管 A /min
单位换算：
尿素 mmol/L x 6.02 =尿素 mg/dL
尿素 mmol/L x 2.802 =尿素氮 mg/dL

11.5注意事项：
本品仅用于体外诊断。
避免测试中途添加试剂。
试剂和样本用量可根据不同仪器的要求按比例改变。
11.5.4 4份试剂1与1份试剂2混合后，可作为单试剂使用。混合后的试剂溶
液在2C8C可稳定7天。
若试剂混浊，或以水为空白在340nm处吸光度值低于1.1A时，则不能
使用。
12结果判断
12.1尿素浓度＞35mmol/L（尿素氮＞98mg/dL）时，样本应先用无氨污染的去离
子水稀释后再测试，结果乘以稀释倍数。
12.2人血清、血浆或尿液中尿素浓度的检测只是临床医师对患者进行诊断的指
标之一，临床医师还要根据患者的体症、病史以及其它的诊断项目、诊断手段进
行综合判断。
13参考区间
2.82 〜8.2 mmol/L
引用的参考值范围代表本法的期望值，仅供参考，建议各实验室验证这一参考范
围或建立自己的参考值范围。
14临床意义
尿素（UREA ）是人体内蛋白氮代谢的主要终产物，它构成了血液中绝大部分
的非蛋白氮。尿素产生于肝脏，经过肾脏排泄至尿中，因此尿素的含量取决于蛋
白的摄入量、蛋白质分解代谢和肾功能。尿素水平增加可发生于饮食改变、肾功
能损伤的疾病、肝脏疾病、充血性心力衰竭、糖尿病和感染。
15复检操作程序
按仪器使用说明书进行复查操作。
16方法局限性
16.1检验结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
16.2当样本中黄疸＞ 1368 ^mol/L、血红蛋白〉10g/L、甘油三脂〉50mmol/L、
抗坏血酸＞5.7mmol/L时可能会影响检测结果。
17注意事项
样本、废液等有潜在生物传染性，操作者应遵守实验室安全操作规定，并按
当地医疗废弃物、感染性废弃物、产业废弃物等规定处理废液。
18个人防护
18.1请把标本当作可能感染HIV、HBV、HCV等的危险物质处置。为了避免或减
少相关的传染风险，请使用一次性手套。
18.2若误入眼内或中、或接触到皮肤时，请迅速用水充分冲洗，必要时请接
受医生治疗。
19当检测系统不能工作时，所采取的补救措施
当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
20参考文献
20.1 Bergmeyer.Methods of Enzymatic Analysis.Third Edition.Vol VIII:
444449.
20.2 Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. Third
Edition. 1990; 21:5.
20.3 NCCLS.Interference Testing in Clinical Chemistry;Approved
Guideline,25.