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1、显微镜的使用操作流程及评分标准 项目 内容 分值 扣分标准 扣分 目的 掌握显微镜的使用方法及注意事项 用物 光学显微镜、载玻片、擦镜纸、香柏油、脱油剂 准备 素质 让学生能够熟练使用显微镜 要求 操 作 1. 安放：把显微镜放在自己前面略偏左的桌面上，这样便于用左眼观察物像，用右眼看着画图。安放时镜筒向前，镜臂向后。 2. 对光：转动转换器，使低倍物镜正对通光孔，并使物镜前端与载物台有两厘米左右的距离。然后把反光镜对着光源，但是反光镜不能直接对着太阳.只要视野的光亮程度合适，光就对好了。
2、3. 观察：对好光后，把显微镜玻片标本放在载物台上，并使玻片上的标本对着通光孔的中心，再用压片夹夹住。然后慢慢地转动调焦螺旋，直到接近玻片为止。接着，用左眼向目镜内注视，同时反方向转动调焦螺旋，直到看清物像为止. 4. 再放大：选好一个放大目标，再把要放大的部分移到视野正中心，如果物像不清楚，再转动调焦螺旋。如果还观察不清楚，就必须换用高倍物镜.用高倍物镜观察时，高倍物镜顶端离玻片很近，稍不小心，镜头就会压到玻片，所以要特别小心。 5. 在显微镜里看到的物像是倒像，因此,要使物像向上移动，就要向下移动玻片；要使物像向左移动，就要向右移动玻 步 骤 片。
3、注意事项 1.先用低倍镜观察，用低倍镜能看清的，就不再用高倍镜。 2.必须保护好镜头。 3. 载物台要保持清洁干燥. 4. 转动调焦螺旋不要用力过猛，以防损伤机件。 5.取用显微镜要轻拿轻放，要用右手握镜臂,左手托镜座。 6. 使用完毕，要把显微镜外表擦干净，并把镜筒旋下至最低处。最后把显微镜放入镜箱，送回原处保存. 细菌的形态学检验操作流程及评分标准 项目 内容 分值 扣分标准 扣分 目的 掌握革兰染色的基本原理和操作方法 用物 革兰染色液、生理盐水、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、 准备 香柏油、蜡笔、擦镜纸、脱油
4、剂 素质 能够熟练对细菌标本进行染色，观察结果，对细菌进行分类 要求 操 作 （1）涂片:取清洁无油迹的载玻片1张,用蜡笔划线将其分成左右两格。用接种环先挑取生理盐水1〜2环于载玻片每格中央，再分别挑取大肠杆菌和葡萄球菌少许菌落与生理盐水研匀，涂成直径约1.5cm的菌膜。 （2）干燥：让涂片自然干燥，也可在酒精灯火焰较远处微微加热烘干，但切勿靠近火焰。 （3）固定：干燥后的标本片在酒精灯火焰上来回通过3次（以钟摆的速度），冷却后染色。固定的目的在于杀死细菌，并使菌膜与玻片牢固粘附，避免染色过程中被水冲洗掉，通过固定还可凝固细胞质，改变细菌
5、对染料的通透性，使细菌易与染料结合而着色. （4 ）染色：结晶紫 卢戈碘液 95%乙醇稀释石 炭酸复红待干、镜检（初染）（媒染）（脱 色）（复染） 步 骤 1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色时间。 注 2.染色过程中勿使染色液干涸。 意 3.选用幼龄的细菌.G+菌培养12h-16h，E。coli培养24h。 事 项 基础培养基的制备与灭菌操作流程及评分标准 项目 内容 分值 扣分标准 扣分 目的 掌握基础基础培养基的配制流程、灭菌的方法
6、及注意事项 用物 准备 牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉、1mol/L NaOH、1mol/LHCl试管、吸管、平皿、锥形瓶、量筒、吸管、精密PH试纸、天平、滤纸 素质 要求 要求熟练操作培养基的配制和灭菌 一、培养基的配制 1.配制溶液 2.调节pH值 3. 过滤 4. 分装 操 作 二、培养基的灭菌 1. 开盖 2. 通电 3. 加水 4. 放样 5. 设定温度和时间 步 骤 注意事项 1. 调节PH值时，要边滴氢氧化钠边搅拌，不能一次加太多 2.
7、加热时间控制好，否则培养基会煮糊。 3. 灭菌是要注意将灭菌锅里的空气排干净. 4. 注意灭菌的时间和温度的控制。 细菌的接种培养法操作流程及评分标准 项目 内容 分值 扣分标准 扣分 目的 掌握细菌的接种方法及操作流程 用物 温箱、酒精灯、接种环、接种针、L形玻棒、打火机、记号笔 准备 素质 能够熟练操作各种接种方法 要求 操 （一）平板划线接种法（又称分离培养法） 烧灼接种环，杀灭环上残留细菌，待冷，从薄膜处取菌作连续平行划线，约占平板表面1/5左右，再次烧灼接种环，等三次
8、平行划线……以同样方法作第四次，第五次划线，将平板表面划完。划线完毕，盖上平皿盖，底面向上，用标签或腊笔注明菌名检验号码，接种者信息等，置37P孵育培养24小时后观察结果。 （二）斜面培养基接种法 试管部于火焰上往返通过2〜3次灭菌，将灭菌白金环伸入有菌试管中，取少量细菌，然后移至准备接种的试管中。 接种方法是自管底向上连续平划线，若以保存菌为目的时可自管底上划一粗直线即可。 取出接种环，将试管上部再经火焰灭菌，塞好棉塞，接种环灭菌后放回原处。 （三）半固体培养基穿刺培养法 灭菌穿刺针沾取细菌后，垂直刺入半固体培养基中央直达近管底处，再沿原穿刺线抽出即可。 作
9、 步 骤 1.选择适合其生长需要的培养基 注 2.防止污染.培养基和一切用具必须彻底灭菌;操作时必须靠 意 近火焰；操作完毕后，禁止再让培养基接触外界空气。 事 3.防止接种器械过热，很容易杀死分离培养的细菌。 项 细菌的分布操作流程及评分标准 项目 内容 分值 扣分标准 扣分 目的 熟悉细菌在自然界和人体的分布，了解外界因素对细菌的影 响 用物 待测水样、泥土、无菌吸管，平皿，无菌生理盐水 准备 素质
10、让学生熟悉细菌在自然界和人体的分布情况 要求 操 作 步 1. 空气中细菌的检查 （1）方法：取普通平板（或血平板）1个，选室内或室外的一处空间，在离地面1m左右高度的桌面（或台面）上，打开平板盖，让培养基暴露于空气中，10min之后，迅速盖好盖子，在底部写上标记，放35P培养18〜24h，观察结果。 （2 ）结果观察 2. 水中细菌检查 （1）方法： 1）用无菌三角烧瓶以无菌的方法采集水样. 2）用无菌吸管吸取1ml水样以无菌技术加入无菌平皿中。 3）趁热（不烫手为宜），倾注约15ml的普通琼脂，立即在台面上轻轻转动平皿使其混匀.待琼脂凝固
11、后，将其放入35.。，培养18〜24h。 （2）结果观察报告。 3. 人体咽喉部细菌检查 （1）方法： 1）采样 持无菌棉拭1根，待受试者张大嘴巴后，迅速伸入对方悬臃垂后的咽喉部，轻轻揩取咽喉壁上的分泌物. 2）接种 以无菌方法用棉签在琼脂平板的一角（1/4处）来回划线，去掉棉拭，然后用接种环在原划线上过2〜3下，接着往下划线分离。 3）培养 写上标记，将平板放35.，18〜24h培养。 骤 1.注意无菌操作，防止空气或人体上的细菌污染。 注 2.倒入的培养基温度大约在45.左右（热而不烫手为宜）， 意 太热，太冷都
12、不行。 事 项 细菌对抗药物敏感试验操作流程及评分标准 项目 内容 分值 扣分标准 扣分 目的 掌握药敏试验的方法、原理、结果判读、临床意义 用物 准备 供试菌种、普通琼脂培养基、药敏纸片、培养起、平皿、镊子、试管、酒精灯、涂布棒 素质 要求 要求学生熟练操作纸片扩散法 操 作 步 骤 1.配制培养基 2.配制菌悬液 3.涂布于琼脂平板的表面 4.室温下干燥3 5分钟 5.贴药敏纸片 6.35°C培养16 18小时 7.测量抑菌圈直径，参照相关标准判读结果。
13、 注意事项 1. 培养基的质量 2. 药敏纸片的质量，含药量和保存方式 3. 接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一，取决于麦氏比浊标准的配制，正确使用和保存 5孵育条件，温度和时间 6抑菌圈测量工具的精度 7质控菌种本身的药敏特性是否合格，有无变异。 糖发酵试验操作流程及评分标准 项目 内容 分值 扣分标准 扣分 目的 熟悉葡萄糖发酵试验的原理和操作方法。 用物 准备 大肠杆菌，糖发酵管 素质 要求 熟悉大肠杆菌对葡糖糖的发酵情况. 操 1. 取两支HL葡萄糖培养基，置沸水中水浴10分钟.
14、 2. 冷却，将待检细菌接种到2支培养基中. 3. 取其中一支加灭菌的液体石蜡，使其与空气隔绝，另一管不加液体石蜡 4. 35^培养18 24小时，观察结果 作 步 骤 注意事项 配制糖发酵管内装的小倒管在接种细菌前应是无气泡存在的，否则不能进行接种 甲基红试验操作流程及评分标准 项目 内容 分值 扣分标准 扣分 目的 熟悉甲基红试验的原理和操作方法。 用物 准备 菌种、葡萄糖蛋白胨培养基，甲基红 素质 要求 能利用甲基红试验对大肠杆菌进行鉴定
15、 操 作 步 骤 1. 将待检的细菌接种于葡萄糖蛋白胨水中 2. 35°C培养18 24小时 3. 滴加甲基红试剂 4. 结果：呈红色为阳性，黄色为阴性。 注意事项 1.注意无菌操作 2. 注意观察指示剂的变化 病毒的分离培养操作流程及评分标准 项目 内容 分值 扣分标准 扣分 目的 了解鸡胚培养常见的几种接种方法；掌握鸡胚尿囊腔接种的操作技术. 用物 准备 受精卵、孵卵器，检卵灯，齿钻，磨壳器，钢针，蛋座木架，注射器,2. 5%碘酒，70%酒精，镊子，剪刀，封蜡(固体石蜡加1/4凡士林，溶化)，灭菌培养皿，灭菌盖
16、玻片等. 素质 要求 要求能够对不同的病毒通过鸡胚进行培养 操 作 步 骤 一、准备蛋胚 二、接种 1.绒毛尿囊膜接种 将孵育10—12天的蛋胚放在检卵灯上，选择血管较少的地方做一记号，并在记号处的卵壳上磨开一三角形小窗，用小镊子揭去所开小窗处的卵壳，小心、地划破壳膜，用针尖刺破气室小孔处的壳膜，用注射器通过窗的壳膜窗孔滴0. 05-0. 1ml病毒液于绒毛尿囊膜上。涂上半凝固的石蜡，将鸡卵保持人工气室在上方的位置37r培养，48 96小时观察结果。 2.尿囊腔接种 将蛋胚在检卵灯上照视，并在绒毛尿囊膜血管较少的地方作记号。用碘酒消毒气室蛋壳，
17、并用钢针在记号处钻一小孔.用带18mm长针头的1ml注射器吸取病毒液，针头刺入孔内，经绒毛尿囊膜入尿囊腔，注入0.1ml病毒液.用石蜡封孔后于37r孵卵器孵育72小时. 3.羊膜腔接种 将孵育10—11天的蛋胚照视，画出气室范围，并在胚胎最靠近卵壳的一侧做记号。用齿钻在气室顶端磨一三角形，用镊子揭去蛋壳和壳膜，并滴加灭菌液体石蜡一滴，用镊子，刺穿下层壳膜和绒毛尿囊膜没有血管的地方，用26号针头的注射器，刺入羊膜腔内，注入病毒液0. 1ml。将卵壳的小窗封住，于37r孵卵器内孵育48 72小时。 4.收获 注意事项 防止污染：接种全过程要求无菌操作.为减少污染，要求方法简单、操作迅速。 (2)温度要适宜，接种过的鸡胚，要根据所接种的病原体生长增殖所需要的温度，置温箱中孵育。
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