试剂标准操作规程(SOP)TBA.docx

文件号：AA
试剂标准操作规程
项目
总胆汁酸（TBA）
方法
循环酶法
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本规程自26年8月01日起实施，每1年复审一次
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院长办公室保管者

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检验科主任

临床化学检验室

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文件号：AA
1. 检测原理
2. 标本采集与处理
2.1受检者的准备
2.2静脉采血
2.3抗凝剂
2.4标本处理
3. 试剂
3.1试剂
3.2校准血清
3.3试剂与校准血清的稳定性
4. 仪器
5. 操作
6. 计算
7. 操作性能
7.1精密度
7.2准确度
7.3灵敏度
7.4可报告范围
7.5特异性
7.6干扰
8. 参考值
9. 临床意义
附录A:参数
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文件号：AA
1. 检测原理
胆汁酸与3a羟基类固醇脱氢酶（3a-HSDH ）及氧化型b-硫代烟酰胺脲嘌吟二核苷酸氧化型（Thio-NAD ）发生反应，生成3酮类固醇以及还原型b-硫代烟酰胺脲嘌吟二核苷酸（Thio-NADH ）。3-酮类固醇在3a-HSDH和Thio-NADH作用下，生成胆汁酸及Thio-NAD。通过循环酶而使微量的胆汁酸量得到放大。通过测定生成物Thio-NADH在405nm吸光度的变化，可测量样品中胆汁酸的浓度。
2. 标本采集与处理
2.1受检者的准备：
病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2静脉采血：
除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3抗凝剂：
血浆使用肝素或EDTANa 2 （ 1mg/mL ）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：
血标本室温放置30min〜45min后离心、分离血清或血浆，置洁净试管加盖低温保存。
3. 试剂
3.1 试剂：
威特曼生物科技（南京）有限公司TBA试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：
组成
混合后初始浓度
R1：缓冲液
PH=7.0, 65mmol/L
Thio-NAD
1g/L
R1a：缓冲液
PH7.0, 65mmol/L
Thio-NADH
6g/L
叠氮钠
0.6mmol/L
3a-羟基类固醇脱氢酶（3a-HSDH ）
> 50U/L
3.2校准血清
使用威特曼生物科技（南京）有限公司提供的校准血清或使用TBA的专用标准液。
校准频次：
空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
3.3试剂与校准血清的稳定性：
原包装试剂储存在2-8P至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。
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试剂储存在18-22P稳定28天，试剂应避免污染。试剂R1颜色为无色，试剂R2颜色为无色至浅黄色，当试剂变色，按照试剂失效处理。
多项校准血清在2-8P储存至标签所示失效日期，复溶后-2(TC保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。
TBA专用标准液在2-8P储存至标签所示失效日期，开瓶后2-8P储存避免污染，可稳定2个月。
4. 仪器
YY型号仪器。
5. 操作
样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为终点法。参数见后附，附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。
6.计算
c =△ A测定XC
△ A°
标准
式中：C测定总胆汁酸浓度，nmol/L;
测定
△ A . 标本管吸光度变化；
△ A 标准管吸光度变化；
标准
CO校准血清总胆汁酸浓度，pmol/L;
△A=A-A
7. 操作性能
7.1精密度：
批内 CV< 0.23%，批间 CV< 3.80%。
7.2准确度：
测量结果在质控血清靶值±2SD范围内。不同方法学试剂的质控结果之间会存在差异，使用时请确保质控选择与试剂的方法学保持一致。
7.3灵敏度：
总胆汁酸浓度为：1 mol /L时，显色吸光度为0.235〜0.256
7.4可报告范围：
血清与试剂用量之比为1:75时，测定上限为2 pmol /L
7.5特异性：
测量值在给定值的90%-110 %范围内。
7.6干扰：
内源性干扰物溶血为10mg/ml、脂血20mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸3mg/ml对测试结果无明显影响。
8. 参考值
0 〜15 mol /L
9. 临床意义
本试剂盒用于体外测定血清中的总胆汁酸含量°TBA是由肝脏分解代谢，能反映肝实
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质损伤。一旦肝细胞发生病变，血中胆汁酸浓度极易升高。急性肝炎、慢性活肝、肝硬化、肝癌TBA结果明显升高。与ALT进行比较，急性肝炎、慢性活肝两项都较敏感，但肝硬化、肝癌两种结果差异明显：TBA阳性率高达95%，而ALT阳性率仅为20%。因此，TBA测定用于监测慢性肝病价值很大，其测定方法简单，是一项很有实用价值的肝功能诊断指标。
附录A:参数
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