2025年PCR质量手册简要概述.doc

PCR质量手册简要概述

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前 言

某某省某某医院临床基因扩增检查实验室建于 12月。实验室的设立、设备及人员配备均严格按照部、省临床基因诊疗实验室规范化原则结合
本身条件而建立。各项管理制度、质量确保体系以及基本操作规定和原则操作程序均已制订。
某某省某某医院临床基因扩增检查实验室将面对全省卫生系统,开展临床基因诊疗实验和有关知识的培训工作,使被培训人员掌握临床基因诊疗基础理论知识、实验室管理和质量确保方法、规范化操作办法以及理解基因诊疗领域的进展。同时还将开展基因(重要是遗传基因方面)的临床检测及科学研究工作,为我省临床基因诊疗事业的发展做出一份奉献。

质 量 方 针
临床基因扩增检查实验室是严格按照部、省临床基因扩增实验室规范化原则
进行管理与操作,始终遵照:

以病人为中心
以质量为核心
以科学为根据

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岗 位 职 责
1．实验室负责人岗位职责
（1） 拟定质量方针,编制质量手册,并组织人员学习,统一思想。
（2） 负责实验室全方面质量,涉及试剂盒的质量检查;操作的质量检查;质量控制(室内室间质评)的成果检查;实验成果的核对、质检和签发报告;拟定人员培训计划;安排日常工作,确保及时发出质量合格的报告。
（3） 定时审核和评审质量手册的运行状况。
（4） 对实验室对内外发出的报告负责,并以签名签字形式表达。
2．技术人员岗位职责
（1） 准时消毒、清洁实验室,并统计签字。
（2） 检查仪器设备的维护状况,统计使用状况并签字。
（3） 按质量手册规定的原则操作程序(SOP)操作实验,并填写报告签字。
（4） 按规定进行实验的自主质控工作(每次实验必须有室内质控方法),并做好统计签字。

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人 员 培 训 及 成 果

1． 人员构成及技术档案
本室有工作人员2人,其中1名中级,1名初级。
2． 培训统计及专业文章发表状况

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实验室设施环境及规章制度
1、实验室分区管理平面图:见图示1。
2、实验室基本设施:
分隔和面积:实验室严格按照原则,分隔为三个独立的工作室:试剂准备室、样品解决室、基因扩增室。
工作流程:从试剂准备→样品解决→基因扩增,工作人员只能单向流动。进入下一区域,必须更换工作服、手套。
通风:各室空气流通性良好。
照明:室内有良好的照明度。
环境:干净、无菌;各室均配有紫外消毒设备。
各室的仪器、实验和文具用品以及清洁物品均属于各室专用。
3、实验室消毒隔离及污物解决:
见实验室废弃物解决的原则操作程序。
4、实验室规章制度:
4.1 总则
4.1.1 进入基因诊疗实验室的任何工作人员都必须恪守实验室规则;非工作人员未经允许不得入内,特别不得为找人而逆向误入PCR实验室,以免造成不应有的污染。
4.1.2 临床基因诊疗实验室分试剂准备、样品解决、基因扩增室三个室,各室拥有专用的仪器设备及实验物品(含加样器、试管架、吸头、统计纸、笔、甚至清洁用品等),不得混用,须贴上不同颜色标签予以区别;试剂准备室为白色标记、样品制备室为蓝色标记、扩增室为绿色标记。
4.1.3 临床基因诊疗实验室工作人员应含有医学检查、微生物学检查基本知识、大中专以上学历、并受过PCR实验的基本知识和技能培训。
4.2.1 进入实验室的工作人员必须恪守实验室的唯一流向的规定,严禁反向流动。
4.2.2 进入实验室,必须更换本室有颜色标记的工作服(含帽和鞋)。勤换洗工作服。
4.2.3 接受样品时应检查样品与否符合规定、贴上标签并做好登记。
4.2.4 实验室技术人员必须严格按照PCR实验原则操作程序进行,涉及实验室擦洗、台面消毒,离心管、吸头的无菌灭活准备,仪器使用和废弃物解决等。
4.2.5 进入PCR实验室后区的物品不许带进PCR实验室前区。
4.2.6 任何实验操作涉及仪器使用等状况均须做好统计。
4.2.7 检测成果报告应完整(涉及:检查项目、靶核酸类型及成果等),并经专业负责人审核签字后方可发出。
4.2.8 每天实验开始前,结束后均应按规定清洁、消毒地面和实验台面。
4.2.9 保持临床基因诊疗实验室内空气唯一流向和空气流通。
4.2.10定时校准和维修PCR仪、离心机、水浴箱、冰箱等仪器、设备。
4.2.11实验室内不得从事与实验无关事宜如聊天、饮食、吸烟等;室内禁用电电扇。
4.2.12每天下班前解决好废弃物品,关好水、电和门窗。
4.3试剂准备室
4.3.1实验人员进入该室须穿本室专用白色工作服。实验中须戴手套。
4.3.2每天实验开始前,清洁实验台并应打开紫外线灯消毒30分钟。
4.3.3取出当天实验需配制和使用的试剂,其它试剂要立刻收好,放回冰箱内。
4.3.4实验中使用的离心管、吸头等应通过灭活无菌解决,(应在消毒的使用期内)。
4.3.5其它室的用品不得带入本室。
4.3.6每次实验都有统计;且使用本室专用的、带有本室标记的统计本、纸笔。
4.3.7实验完毕后要整顿、清洁工作台面。
4.4样品准备室
4.4.1实验人员进入该室须穿本室专用兰色工作服。实验中须戴手套,手套需常更换。
4.4.2每天实验开始前,清洁实验室和实验台,并应打开紫外灯消毒30分钟。
4.4.3样品的接受,登记,保存和提取按原则操作程序及试剂盒规定进行。
4.4.4使用本室专用的,经灭菌解决的加样器和带滤心的吸头。
4.4.5做好实验统计,并使用本室专用的统计本和笔。
4.4.6 PCR扩增后区的物品不得带入本室。
4.4.7实验完毕清洁实验室和实验台,并打开紫外灯消毒。
4.5基因扩增室
4.5.1实验人员进入该室须穿本室专用绿色工作服．实验中须戴手套,手套需常更换。

4.5.2 每天实验开始前,清洁实验室和实验台,并应打开紫外灯消毒30分钟。
4.5.3 使用本室专用的,经灭菌解决的加样器和带滤心的吸头。
4.5.4需在此进行操作的,如巢式扩增,第一次扩增的模板必须在本室内从反映管中取出,并加入另一只反映管中,此操作不可返回扩增前区进行。
4.5.5 非全封闭操作(即须启动反映管),应打开排电扇24小时排气,保持室内负压状态。
4.5.6 做好实验统计,且使用本室专用的统计本和笔。
4.5.7 PCR扩增室的物品不得带入扩增前区。
4.5.8 实验完毕清洁实验室和实验台,并打开紫外灯消毒。

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仪 器 设 备 和 标 准 物 质
1． 仪器设备的配备
1.1试剂准备室内配备的设备:
紫外灯、普通高速台式离心机、旋涡振荡器、一套持续可调式移液枪和无菌过滤咀型移液器枪头、冰箱、多个规格的无菌备用的离心管、PCR反映管和玻璃器皿、实验台及本室专用的文具、纸张;
本室专用的白色隔离服、一次性手套、污物桶及清洁用品。
1.2样品制备室内配备的设备:
紫外灯、台式高速冷冻离心机、旋涡振荡器、恒温水浴锅、二套持续可调式移液枪、无菌过滤咀型移液器枪头、冰箱、多个规格的无菌备用的离心管和玻璃器皿、实验台及本室专用的样品登记本、文具、纸张;
本室专用的蓝色隔离服、一次性手套、污物桶及清洁用品。
1.3 基因扩增室内配备的设备:
紫外灯、PCR扩增仪、实验台及本室专用的文具、纸张;
本室专用的绿色隔离服、一次性手套、污物桶及清洁用品。
2． 仪器设备的使用、维护及校准
见仪器使用、维护及校准原则操作程序。
3． 仪器设备的统计和标记
全部有关基因诊疗实验室仪器使用、维护及校准的操作均统计备案。校准后的仪器贴上标记,阐明校准日期和状态。
4． 原则物质
阳性、阴性对照:来源于对应的检测试剂盒。
室内质控物、室间质评物:来源于卫生部和省临检中心。

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校 准

1． 移液器、扩增仪、离心机等对检测成果有效性、精确性有影响的检查设备,投入使用前必须进行校准,并每年校准1次。
2． 参加卫生部组织的室间质评。

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检 验 方 法
1． 检查项目及办法
项目:乙型肝炎病毒DNA定量检测、丙型肝炎病毒RNA定量检测
办法:TaqMan荧光定量PCR法乙型肝炎病毒DNA定量检测
TaqMan荧光定量PCR法丙型肝炎病毒RNA定量检测
2． 操作手册
仪器使用、维护及校准原则操作程序
样品采集、保存及运输原则操作程序
实验过程原则操作程序(涉及:试剂准备、样品制备、基因扩增和产物检测SOP)
各检测项目的准操作程序
实验室消毒及污物解决原则操作程序
3． 质量确保方法
室内质控
3．1核酸提取质控 在核酸提取中,带一份弱阳性质控样本和一份阴性质控样本(基质与待测样本相似),分别鉴定核酸提取的有效性和核酸提取过程中与否发生污染。
3．2核酸扩增质控 靶核酸为DNA:带一份弱阳性靶DNA质控和一份阴性质控,以鉴定DNA扩增的有效性;
靶核酸为RNA:一份弱阳性cDNA质控、一份弱阳性RNA质控和一份阴性对照以鉴定转录和DNA扩增的有效性
3．3产物检测质控 一份靶DNA或已稀释的扩增靶DNA阳性质控、一份阴性质控以及一份试剂空白质控与待测的扩增样本同时检测,以鉴定产物检测中核酸杂交及显色测定的有效性。
室间质控
参加由卫生部临床检查中心组织的全国临床基因扩增项目的室间质量评价。

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样 品 处 置
1．样本的标记:标记由三部分构成--标本采集日期、该检测批次的标本序号和标本类型,三部分间无间隔符号,例如:02 08 01 01 B分别表达年、 月、 日、 序号和血液标本,序号(01-99),整个标记为8-11位;
2．样本的采集、保存和运输:见样品采集、保存及运输原则操作程序。
3．样本的接受、统计:样品接受后,立刻贴上本室设计的样品标记,并在接受标本统计表上按规定进行登记。
无签、迟送的样品、样品量局限性、溶血的样品及其它未按规定采集的样品,回绝接受并统计于拒收标本记录表。
4．样本的解决:见样品制备原则操作程序

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报 告 涉及下列信息:

实验室名称
检测项目(如丙型肝炎病毒RNA定量检测)
样本接受和检查日期
病人的信息(姓名、性别、年纪、门诊或住院病区及床号)
检查办法(如TaqMan荧光定量PCR检测法)
成果 定性 ××检测项目检测阴性或阳性
定量 ××检测项目检测阳性、检测量为
检测人签名
专业负责人签名及签发日期

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分包

供应及服务
采用部和省临检中心通过室间质评公布的推荐使用的仪器、试剂和检查办法。

申诉
1．埋怨统计:见埋怨统计和解决反馈意见登记本。
2．备案:将最后的解决成果存档备案。

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