NY∕T 3141-2017 饲料中2,6-二甲基-3,5-二乙酯基-1,4-二氢吡啶的测定 液相色谱-串联质谱法(农业).pdf

ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/ T 3141一2017饲料中26-二甲基-35-二乙醋基-1，4-二氢毗睫的测定液相色谱一串联质谱法Determination of 1 ,4-dihydro-2, 6-dimethyl-3 ,5-pyridinedicarboxylic acid diethyl ester in feeds-Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2017 -12-22发布2018-06-01实施中华人民共和国农业部发布目。吕本标准按照GB/T 1. 1-2009给出的规则起草。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全同饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。本标准起草单位:农业部饲料质量监督检验测试中心(成都)。本标准主要起草人:赵立军、张静、李宏、林顺全、廖峰、曾晓芳、魏敏、李云。NY/ T 3141-2017 I NY/ T 3141-2017 饲料中2，6一二甲基-3，5-二乙醋基-1 ,4 -二氢毗睫的测定液相色谱一串联质谱法范围本标准规定了饲料中2，6二甲基-3,5 -一一二氢毗院含量测定的液相色谱一串联质谱法。本标准适用于配合饲料、基-1，4-二氢毗睫的测定。本标准方法的检出2 下列文件对件。凡是不注日GB/ T 6 GB/ T 14 GB/ T 3 原理试样中谱一串联4 除非另有4. 1 甲醇:色4.2 乙腊:色谱纯4. 3 乙酸镀:色谱4.4 甲酸:色谱纯。4.5 95%甲醇榕液:取甲4.6 90%乙腊溶液:取乙脯(4且L加水定智至1004.7 2，6-二甲基-3，5-二乙酣基-1，4由蝠矗品占IIII !m9g. 0 %。2，6二甲基-3,5 -二乙醋4.8 标准储备榕液:准确称取适量2，6-二 甲垂-.j, ;) -一乙醋基1，4二氢口比院对照品(精确到O.1 mg)，用乙腊榕解、定容，配成储备榕液浓度为1mg/mL，转移至棕色瓶。-200C冰箱内保存，有效期为3个月。4.9 标准中间溶液:准确吸取2，6-二甲基3，5二乙醋基1，4-二氢毗院储备榕液(4.8)0.2mL，用乙腊稀释、定容至100mL，使之浓度为2.0 g/mL，转移至棕色瓶。200C冰箱内保存，有效期为1个月。4. 10 0.1%甲酸+5mmol/L乙酸镀水溶液:称取乙酸镀(4.3)0.385g加水定容至1000mL，加入甲酸(4.的1mL，摇匀，即得。4. 11 固相萃取柱:C1S百相萃取柱(200mg/ 3 mL);或性能相当的分析柱。1 NY/T 3141-2017 4.12 微孔滤膜:0.22m，有机相。4.13 密封盖塑料离心管:50mL。5 仪器和设备5. 1 高效液相色谱串联质谱仪(配电喷雾离子源)。5. 2 分析天平:感量为0.1mg和0.01g各1台。5. 3 离心机:转速为8000r/min及以上。5. 4 超纯水器。5. 5 涡旋混合器。5. 6 振荡器。5. 7 同相萃取装置。6 采样和试样制备按照GB/T14699. 1的规定抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样。按GB/T20195的规定制备战样，全部通过0.28mm孔筛，充分混匀，装人密闭容器中，避光低温保存，备用。7 分析步骤7. 1 提取7. 1. 1 配合饲料、浓缩饲料或精料补充料:准确称取2g(精确到O.01 g) ，置于250mL具塞锥形瓶中，加入95%甲醇(4.5)50mL。置于振荡器上中速振荡30min，静置2min。移取适量上清液于离心管中，以8000r/min离心5min。准确吸取上清液0.2mL，用95%甲醇(4.5)定容至10mL，作为备用液。7. 1.2 添加剂预棍合饲料:准确称取1g(精确到0.01g)，置于250mL具塞锥形瓶中，加入90%乙腊(4.6)50 mL。置于振荡器上中速振荡30min，静置2min。移取适量上清液于离心管中，以8000r/ min 离心5min。准确吸取上清液0.1mL，用90%乙腊(4.6)定容至10mL，作为备用液。7. 2 净化7.2. 1 配合饲料、浓缩饲料或精料补充料:固相萃取柱依次用甲醇3mL、水3时，活化(活化后萃取柱内水相液面高于柱筛板1mm2 mm)，取备用液(7.1. 1)3. 0 mL过柱，收集流出液至10mL试管内，涡旋混匀，过O.22m滤膜。7.2.2 添加剂预混合饲料:取适量备用液(7.1. 2) ，过O.22m滤膜。7. 3 标准曲线的制备根据测定试样种类不同，按7.1和7.2步骤分别制备配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料空白试样备用液。精密盐取适量2，6 一二甲基-3，5二乙醋基-1，4二氢毗院标准中间溶液(4. 9) ，用上述空白同样备用液稀释定容，制得0.0004g/mL、0.002g/mL、O.005g/mL、0.01g/mL、0.02g/mL、0.05g/mL、O.1g/mL各系列工作溶液，供高效液相色谱一串联质谱测定。7. 4 测定7.4. 1 液相色谱参考条件2 色谱柱:C18柱，柱长100mm，内径2.1mm，粒径2.4m;或性能相当的分析柱;流动相A为乙腊，流动相B为0.1%甲酸+5mmol/L乙酸镀水榕液，梯度洗脱条件见表1;柱温:300C;进样茧:10L。NY/ T 3141-2017 时间，mlnO 2. 00 5. 00 5. 01 12.00 12. 01 15.00 7. 4. 2 质谱参考条件离子源:电喷雾离子源;扫描方式:正离子扫描;检测方式:多反应监测;表1流动相梯度洗脱参考条件流动相A，%流动相，%20. 0 80. 0 80. 0 20. 0 80. 0 20. 0 95.0 5. 00 95. 0 5. 00 20.0 80. 0 20. 0 80. 0 毛细管电压、碰撞能量等参数应优化至最佳灵敏度;定性离子对、定量离子对等参数见表20流速，mL/mino. 20 0.20 0.20 0.40 0.40 o. 20 o. 20 表22，6-二甲基-3，5-二乙醋基-1，4-二氢毗睫的定性、定量离子对及碰撞能量参考值名称2,6 -二甲基-3，5二乙醋基-1，4-氢11比吭7.4.3 定性测定定性离子对，m/z254/208 254/ 108 定量离子对，m/z254/ 208 碰撞能量，V6 22 在相同试验条件下，试样中待测物的保留时间与标准工作溶液的保留时间偏差在土2.5%以内，且试样谱图中各组分定性离子的相对离子丰度与浓度接近的标准，工作溶液中对应的定性离子相对离子丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定试样中存在对应的待测物。相对离子丰度允许的最大偏差7. 4. 4 定量测定表3定性确证时相对离子丰度的最大允许误差50 :1:20 2050(含)士251O20(含)士30取试样制备液(7.2.1或7.2. 2)和相应浓度的标准工作榕液(7.3)，作单点或多点校准，以色谱峰面积定量。当待测物浓度超出线性范罔时，应适当调整稀释倍数后测定。2，6-二甲基-3，5一二乙醋基1,4 -二氢口比院标准工作溶液多反应监测(MRM)色谱罔参见附录A。8 结果计算试样中2，6-二甲基-3，5-二乙醋基-1，4-二氢口比睫的含量x，以质量分数表示，单位为毫克每千克(mg/kg) ，单点校正按式(1)计算。x =:1i X Cs XVs X V X !. (1) A s X m X V; 式中:x -一试样中2，6一二甲基一 3，5-二乙醋基- 1，4一二氢口比院含量，单位为毫克每千克(mg/kg); A 试样溶液峰面积值;Cs一-标准工作榕液浓度，单位为微克每毫升(g/mL); Vs一一标准工作榕液进样体积，单位为微升(L);3 NY/T 3141-2017 V 定容体积，单位为毫升(mL);As一一标准工作辩液峰面积值;m一-称取试样的质量，单位为克(g); Vi一-i式样榕液进样体积，单位为微升(L);n 稀释倍数。测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。多点校正按式(2)计算。乱中:Cx一一标准曲线上查得每毫升(g/测定结果用平行测x=f.x X V X n m 9 重复性4 (2) 的20%。NY/T 3141-2017 附录A(资料性附录)2，6一二甲基-3，5一二乙醋基-1,4 -二氢毗脏标准溶液多反应监测(MRM)色谱图2，6一二甲基-3，5-二乙醋基- 1，4二氢毗脏标准榕液多反应监测(MRM)色谱图见罔A.Lx 10 1.3 1.2 1.1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 x lO 4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 0.5 2 3 4 4.89 494 2，6-:甲基-3，5-一乙酶基-1，4-:氧i1比l到:4.89 2245 -=坦2，6-一甲基-3，5-:.:.乙酣基-1，4-:.:.氢i1比眼5 6 7 8 9 10门口1314 !,min 图A.1 2，6-二甲基-3，5-二乙醋基-1，4-二氢毗睫标准溶液(5.0ng/mL)多反应监测(MRM)色谱图5 hON|寸的同MZ中华人民共和国农业行业标准饲料中2，6-二甲基-3, 5-二乙醋基-1, 4-二氢毗睫的测定液相色谱一串联质谱法NY/ T 3141- 2017 争夺中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码100125网址.ccap. corn. cn) 北京印刷一厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销* 兴)(. 开本880rnrnX1230rnrn 1/16 印张O.75 字数15千字2018年5月第1版2018年5月北京第1次印刷书号16109 4347 定价18.00元长兴版权专有僵权必究举报电话[phone] NY/T 3141- 2017