血型鉴定与疑难血型.pptx

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,你真的会做血型鉴定吗？,试剂,抗,-A,抗,-B,A,1,细胞,B,细胞,凝集强度,0,0,4+,4+,结果,报啥型？,案例,1,试剂,抗,-A,抗,-B,A,1,细胞,B,细胞,O,细胞,凝集强度,0,0,4+,4+,4+,结果,O,细胞也凝了，报啥型呢？,试剂,抗,-A,抗,-B,A,1,细胞,B,细胞,O,细胞,凝集强度,0,0,0,4+,0,结果,What,？正反定型不符了！,37,度温育,1min,后,最终通过吸取放散确定血型为,Ael血型是非常稀有的A亚型，概率为八万分之一，常规血型鉴定不与A抗体反应，只有通过吸取放散试验才能鉴定出红细胞表面存在A抗原。,Ael,试剂,抗,-A,抗,-B,A,1,细胞,B,细胞,凝集强度,4+,3+,3+,4+,结果,报啥型？,案例,2,正定型,AB,，反定型,O,，是多了抗原，还是多了抗体？,试剂,抗,-A,抗,-B,自身,A,1,细胞,B,细胞,O,细胞,凝集强度,4+,3+,3+,3+,4+,4+,结果,What,？更加扑朔迷离了？,增长自身和O细胞后,红细胞放散后进行正定型,反定型温育1min,对血浆进行盐水抗筛,成果如下：,试剂,抗,-A,抗,-B,A,1,细胞,B,细胞,O,细胞,凝集强度,4+,0,0,4+,0,4+,0,2+,结果,A,型,可能是抗,M,自身抗体导致患者自身红细胞凝集会影响正定型；抗M是常温同种抗体会与反定型红细胞表面的m抗原发生凝集，影响ABO反定型成果。,ABO血型鉴定的目的,对的的血型鉴定是输血安全中十分重要的一步，假如血型鉴定出错，极有也许引起医疗事故。,血型鉴定绝非看上去那么简朴,广义上的血型是人体血液的一种遗传性状，多种血液成分包括红细胞、白细胞、血小板及血浆蛋白在个体之间均具有抗原成分的差异，受独特的遗传基因控制。由若干个互相关联的抗原抗体构成的血型体系，称为血型系统。血型被认为是多种血液成分的遗传多态性标识。,我们平常说的血型重要是指ABO血型和Rh血型，ABO血型并非大家认知中的那么简朴。,狭义上的血型,怎样做好血型鉴定,纯熟掌握血型鉴定基本原理,重视反定O细胞与自身对照,理解所用试剂与措施的特性,凝集强度应原则化判读记录,纯熟掌握血型鉴定基本原理,血型,红细胞上抗原,血清中抗体,A,A,抗,-B,B,B,抗,-A,O,H,抗,-A,，抗,-B,孟买,无,抗,-H,AB,A,、,B,无,重视反定,O,细胞与自身对照,自身凝集代表,正定型不可信,O,细胞凝集代表,反定型不可信,正定型,反定型,试剂,抗,-A,抗,-B,自身,凝集强度,4+,3+,3+,试剂,A1,细胞,B,细胞,O,细胞,凝集强度,4+,4+,4+,理解所用试剂与措施的特性,玻片法,试管法,卡式法,迅速筛查,批量,+,自动化,金原则,长处：,可以反复离心当作果。,可以延长抗原抗体反应时间，可以变化反应温度（4、37孵育）,有助于弱抗原、抗体的检出或排除冷凝集素的干扰。,可以观测红细胞混合外观现象。,可以观测红细胞溶血现象。,试管法：血型定型金原则，常用于疑难血型鉴定。,必备试剂：,抗,-A,、抗,-B,单克隆抗体,A1,细胞、,B,细胞、,O,细胞,可选试剂,：抗,-A1,抗,-AB,抗,-H,A2,细胞,ABO,血型鉴定,常用试剂,我们所使用的的试剂正反定型试验条件：,加 样 量：正定-1滴单克隆抗体+1滴3-8%的患者红悬液,反定-1滴试剂红细胞+2滴患者血清,离心条件：3400转15秒或者1000转1min 二选一,一:试验条件应严格按照试剂阐明书进行，不得随意更改,凝集强度应原则化判读记录,先轻摇（joggle)：指离心完毕之后轻柔摇动试管至细胞扣悬起。,再振摇（shake)：指在轻摇后维续摇动试管2-3s,摇动力度可不小于轻摇。,二、对的的摇试管措施,凝集强度应原则化判读记录,三:试管法凝集强度判读统一原则,凝集强度应原则化判读记录,为何要使用原则凝集强度？,操作原则化。,试验成果有回溯性。,保证不一样试验室、不一样工作人员对同一标本试验成果的一致性。,ABO正反定型相符的定义：,正反定型相符且正定型反应强度4+；反定型反应强度2+。,ABO正反定型不符的定义：,ABO 正反定型不符（多或少抗原、抗体）。,ABO正反定型相符，但弱反应，正定型反应强度4+,反定型反应强度2+以上。,什么是正反定型不符,1、试验技术及管理原因2、生理性原因3、疾病的影响4、临床治疗的影响5、ABO亚型,正反定型不符的常见原因,标本问题：采样不规范（静脉输液处采样、非抗凝管）、标本接受不规范（溶血、乳糜、变质标本）等。,试验技术人员的操作问题：技术错误、判读错误(溶血、弱凝集、混合外观）、记录错误等。,试剂质量问题：过期失效、被污染及使用未经确认的试剂等。,仪器设备问题：设备故障及使用未经确认的设备等。,试验技术及管理原因,年龄：老年人（抗体减弱）、4-6个月内的婴儿（抗原或抗体发育不成熟）。（美国AABB规定婴儿4个月后可做反定型。）,ABO亚型：抗原减弱、血清中出现意外抗体（抗-A1、抗-B)。,意外抗体：受检者血清中存在室温反应性IgM类同种抗体(MN、Lewis、P血型系统同种抗体）、冷凝集素，这些意外抗体也许与试剂红细胞发生凝集，导致反定型异常。,试剂红细胞保护剂原因：有人血清中有针对试剂红细胞保护剂成分的抗体，会导致反定型发生与AB0血型抗体无关的红细胞凝集反应。,型物质干扰：有人血清中AB0血型物质高，用未经洗涤红细胞，型物质会中和抗-A或抗-B抗体，导致正定型为弱阳性。,嵌合体血型（卡米拉，chimerism):这种血型的人体内有两群不一样血型红细胞，正定型时会出现“混合外观”凝集现象。,先天性无ABO抗体,生理性原因,*白血病、恶性肿瘤：导致ABH抗原减弱甚至消失、AB0抗体减弱。,*低丙种球蛋白血症：因免疫球蛋白水平低，反定型时不凝集或弱凝集。,*多发性骨髓瘤等：多发性骨髓瘤患者血浆中的M蛋白会干扰反定型（缗钱状凝集）。,*自身抗体：自身免疫性溶血性贫血、淋巴瘤、胶原疾病(红斑狼疮）等患者的自身抗体会干扰反定型。,*红细胞自身凝集：患者体内存在高效价冷凝集素使红细胞发生自发的凝集，会干扰正定型。,*肝脏疾病、结核病等：导致血浆白蛋白/球蛋白比例倒置，干扰反定型。,*急性大量失血：外周血网织红细胞增多，并出既有核红细胞，使正定型反应减弱。,*血型型物质过高：某些疾病（如腹腔癌）导致血浆中存在大量的型物质，用未洗涤红细胞，型物质会中和抗-A或抗-B抗体，引起正定型为弱阳性。,*红细胞致敏：被免疫球蛋白致敏的红细胞，在含高蛋白介质的试剂中可发生凝集。,*大量胎母出血（FMH)等。,疾病的影响,近期输血：患者近期输入异型红细胞，使正定型出现“混合外观”现象，输入异型的血浆会干扰反定型。,造血干细胞移植：AB0不一样型造血干细胞移植，可影响正、反定型。,免疫克制治疗：也许会导致抗体减弱。,大量输液：抗体被稀释，反定型减弱。,静脉注射丙种球蛋白：丙球中的AB0血型抗体干扰反定型。,过客淋巴细胞综合征：AB0不一样型的器官移植，供者器官残留的淋巴细胞针对受者的血型抗原产生免疫性抗体，影响血型鉴定。,单采血浆或血浆置换治疗：血浆稀释会导致反定型减弱，假如使用大量的非同型的血浆做置换治疗，输入的血浆会导致反定型异常。,静脉输入高分子药物：如甘露醇、右旋糖苷、羟乙基淀粉等会干扰反定型。,临床治疗影响,ABO亚型是指红细胞上A、B抗原数量的减少和抗原表位的异常。亚型必须具有遗传基础，有明确的血清学特点。*因年龄、疾病等不可遗传的原因导致的血型变化不是亚型。*虽然有基因变化，但不影响血 清学特点的ABO血型不是亚型。,ABO,亚型的影响,ABO亚型的发现正反定型不符#非新生儿、未患有使抗原、抗体减弱疾病的患者正定凝集强度应 4+，反定凝集强度应 2+。,#正定凝集强度弱于4+提醒也许是亚型。,注意：凝集强度应按原则判断,#反定凝集强度2+，或存在冷反应性意外抗-A、抗-B提醒也许是亚型。,注意：靠反定预测亚型不如正定可靠！,A亚型：,A2、A3、Aint、Ax、Ay、Am、Aend、Ael 等。,B亚型：,B3、Bx、Bm、Bend、Bel 等。,AB,亚型：,A亚B、AB亚,Aw、Bw B（A）cisAB,孟买、类孟买（Hh血型系统）,ABO,常见亚型,根据每种亚型特点做血清学试验，比对反应格局表来判断是何种亚型。,推荐兰炯采专家的三步法,1、首先排除人为原因、操作失误，确定非人为原因、试剂问题、耗材、仪器等所致的误差；,2、另一方面查询性别、年龄、妊娠史、临床诊断、输血史、移植史、用药史等，确认引起ABO疑难血型的病理原因；,3、最终确认与否为亚型或其他特殊血型。,正反定型不符的处理,反复试验，排除,人为与技术原因,01,查询病历，考虑与否疾病、生理、治疗影响,02,大胆假设,逐项求证排除,03,处理问题,04,怎样做出的血型,才是可靠的？,1,干干净净的细胞,3,符合标准的凝集,2,干干净净的血浆,血浆干扰反定型,红细胞干扰整定型,吸 收,排 除,变 性,洗 涤,放 散,分 离,确定干扰原因,处理方案,1、吸取放散试验2、唾液型物质检测3、毛细管离心分离自身和输入红细胞4、巯基试剂处理自身凝集红细胞5、分子生物学检测(血型基因),几种常用A,BO,血型鉴定特殊技术简介,试验原理：体现弱A和弱B抗原的红细胞直接离心试验中不被抗-A,抗-B所凝集，但可以吸取对应的抗体。可以通过将其吸取的抗体放散出来，并检测放散出来的抗体,以证明弱A或弱B抗原的存在。吸取用RBC：盐水洗涤3次的待检压积RBC 1ml。吸取用的抗血清：人源抗-A、抗-B。（单克隆抗体也可）试验环节：*将压积RBC和抗血清按等体积比例混合，在4温育至少1小时,期间隔15分钟混匀一次。*用冷盐水洗涤温育后的细胞4-6次，得到压积RBC,加入等量盐水。*56水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。*用试剂红细胞检测放散液(人源抗体要做盐水介质和IAT)。注意：一定要用最终一次洗涤液做平行对照。,吸取放散试验,试验原理：大概80%的个体具有Se基因,它控制着水溶性的ABH抗原的分泌。通过检测分泌型人唾液中的ABH物质可作血型鉴定。用 于:ABO亚型、血液病致抗原减弱、近期输血史等。型物质准备:1-2ml唾液,沸水煮10分钟,离心后得到的上清。抗体的修正:抗体用盐水稀释至与对应红细胞产生4+的最高稀释度。中 和:将唾液与修正的抗体等体积混合,室温放置30分钟。检 测:用Ac检测中和后的抗-A，Bc检测中和后的抗-B，0c检测中和后的抗一H。成果判断:通过ABH抗体的克制试验证明ABH抗原存在于唾液中。,唾液型物质检测,原理：新生成的自体红细胞比重比输入的红细胞小，可以通过离心措施与输入的红细胞分离开。,注意：至少须输血后3天的血样。,环节：,1、用盐水洗涤红细胞3次，在保留白膜层的状况下尽 也许去掉上清，混匀。,2、在微量红细胞比积管中加入洗涤红细胞，封死管底。,3、用专用离心机离心15min。,4、在距红细胞柱顶上5mm处切开微量红细胞比积管，用注射器将管中的红细胞冲到试管中。,5、将分离出的红细胞洗涤，用盐水配成2-4%红细胞 悬液备用。,毛细管离心分离自身和输入红细胞,自身的红细胞,输入的红细胞,巯基试剂处理自身凝集红细胞,巯基试剂：DTT、2-Me,试验原理：巯基试剂可以裂解IgM抗体单体间的二硫键，用以消除冷自身抗体导致的红细胞的自发凝集，为血型检测提供不凝集的红细胞。,试验环节：用盐水洗涤红细胞3遍并配成50%的悬液，加入等 量的0.01M的DTT，37孵育30分钟，将细胞洗涤3 遍后配成2-4%的悬液备用。,PCR技术问世后，分子生物学技术用于红细胞血型基因的的检测，使红细胞血型定型技术飞跃到了一种崭 新的阶段。可用于：ABO疑难血型的鉴定与输血：亚型？疾病致抗原减弱？有近期输血史等。发现ABO血型新等位基因：cisAB、B(A)、Aw、Bw等。RhD变异型的鉴定与输血：弱D、部分D,分子生物学检测血型,感 谢 聆 听,谢谢您的观看,