乙型肝炎实验室检测技术.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,乙型肝炎实验室检测技术,病毒形态与基因结构,嗜肝,DNA,病毒科,(,Hepadnaviridae,),正肝,DNA,病毒属,电镜：,3,种形态,HBV,基因组和基因表达产物,3200,b,p,4 open reading frames,7 proteins,大蛋白,(preS1-preS2-S),中蛋白,(preS2-S),小蛋白,(HBsAg),核衣壳,(HBcAg),HBeAg,聚合酶,X,蛋白,HBV carrier distribution in China in 1992,4-8%,8-124-8%,海南,黑龙江,吉林,辽宁,山东,福建,江西,安徽,湖北,湖南,广东,广西,上海,河南,山西,内蒙古,陕西,宁夏,甘肃,青海,四川,贵州,云南,西藏,新疆,江苏,浙江,北京,台湾,over7%,37%,Lower then3%,HBsAg distribution in the year of 2006,No data,Comparing of HBsAg prevalence between 1992 and 2006,age,世界,高流行区 ,8%,中流行区,2,7%,低流行区 ,2%,我国,农村,城市,南方,北方,中南和华东,华北,地区分布,年龄和性别,高流行区 青少年和,30,40,岁的成人,中流行区 仍以成人感染为主,低流行区 多,20,29,岁年龄组发病高峰,职业,高危人群 医务人员 托幼机构儿童,妓女 静脉内滥用毒品者,男性同性恋者,家庭聚集性明显,人群分布,基因型,血清型,主要地区,A,adw2,ayw1,北欧、西欧、非洲、美洲,B,adw2,ayw1,东南亚、中国、日本,C,adr,ayr,adw2,东亚、中国、日本、波利尼西亚等,D,ayw2,ayw3,南欧、地中海、印度,E,ayw4,西非,F,adw4,adw2,ayw4,美国土著人、波利尼西亚、中南美,G,adw2,美国、法国,H,?,尼加拉瓜、墨西哥、美国,HBV,不同基因型和血清型的地区分布Source:NNDSS/VHSP,经血传播,医源性传播,母婴传播,性接触传播,日常生活接触传播,传播途径,HBsAg,最早出现的血清学标志之一,是,HBV,感染的基本标志,HBsAg,阳性见于,乙肝的潜伏期、急性期,慢性乙肝,病毒携带,与,HBV,感染有关的肝硬化和原发性肝细胞癌,抗原抗体系统,抗,-HBs,特异性中和抗体、保护性抗体,抗,-,HBs,阳性可见于,乙型肝炎恢复期，在,HBsAg,消失后间隔一定时间抗,-,HBs,出现隐性感染的健康人，自身产生了免疫力,注射乙肝疫苗或乙肝高效价免疫球蛋白,(,HBIG,),后，产生的主动或被动免疫,HBcAg,不能从血清中直接检出,Dane,颗粒经去垢剂处理,HBcAg,释放检测,抗,-HBc,非中和抗体、分,IgM,和,IgG,主要见于慢性感染和既往感染,抗,-HBc IgM,通常在出现症状时即可检出，一般持续约,6,个月，提示,HBV,复制，是急性感染的重要指标，也是慢性活动性肝炎的重要标志,抗,-HBc IgG,在抗,-,HBc IgM,下降及消失后出现，可伴随感染者终生存在,HBeAg,与,HBsAg,平行出现，较,HBsAg,消失早,意义 体内,HBV,复制、传染性强的标志,急性乙型肝炎的辅助诊断,判断预后的指标：,HBeAg,转阴，表示,HBV,复制减少或终止，预后好；若,HBeAg,持续阳性，则预后不良，易转为慢性,抗,-,Hbe,HBeAg,消失后出现无症状,HBV,携带者及非活动期慢性肝炎患者表示,HBV,在体内复制减少或终止，传染性减弱或消失,HBV,感染血清学常见模式,临床及流行病学意义,HBsAg,抗,-HBs,抗,-HBc,IgG IgM,HBeAg,抗,-HBe,潜伏期末期,+,+/,急性乙肝，病毒长期携带,+,+,+,+,HBsAg,阴性的急性感染,+,感染消除，抗,-HBs,尚未出现,+,健康携带者,+,+,+/-,+,慢性乙肝，病毒长期携带,+,-,+,+/-,+,-,HBV,近期感染，恢复期,+,+,+/-,+,HBV,既往感染，已恢复,+/-,+,乙肝疫苗接种,+,ELISA,（最常用，定性）,免疫层析法（胶体金或硒标法）,发光免疫分析（定量）,反相间接血凝试验（少用）,HBV,感染的血清学诊断方法,利用抗原和抗体特异性结合,方法,间接法,:,测定抗,-HBs,夹心法：测定,HBsAg,和,HBeAg,竞争法：测定抗,-HBc,和抗,-HBe,酶联免疫吸附试验,ELISA,优点,快速简便，成本低,敏感,血清标本用量少,缺点,精密度差,难以自动化,容易出现交叉反应,酶标技术,临床,ELISA,检验影响因素,临床,ELISA,测定现通常为采用手工操作的以微孔板条为固相的测定模式，测定操作非常简单，一般涉及到标本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面，其中任一步骤的不当都会影响测定结果，且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚,一、临床标本的收集和保存,要注意避免出现严重溶血,样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染,血清标本如是以无菌操作分离，则可以在,2,8,下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存,冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融,标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测,二、试剂准备,实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置,20,分钟以上后，再进行测定,蒸馏水或去离子水应保证质量,三、加血清样本及反应试剂,加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡四、温育,要保证在设定的温度下有足够的反应时间,温育温度的选择,“边缘效应”的排除,五、洗板,固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术，需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开来，以保证,ELISA,测定的特异性,六、显色,在加入底物开始显色反应前，最好是先检查一下底物溶液的有效性,临用前配制,七、比色,比色测定时，一定要注意酶标仪的波长是否已调至合适或所用滤光片是否正确,单波长或双波长比色选择的问题,临床,ELISA,测定中可能会出现的问题及可能的原因,放射性同位素标记技术,缺点,有毒,保存期限短,价格昂贵,优点,敏感性高,可以自动化分析,生物素亲和素标记技术,缺点,需要硬件设备,检测背景干扰,优点,敏感性高,均一稳定，重复性好,化学发光技术,缺点,需要硬件设备,成本昂贵,优点,敏感性高,特异性强,操作简便,谢谢大家！,