结核感染T细胞(TB-IGRA)检测及意义PPT课件.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,-,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,-,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,-,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,-,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,-,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,-,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,-,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,-,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,-,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,-,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,-,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,-,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,-,*,干扰素释放试验（,IGRAS,）,临床应用,南京医科大学第二附属医院 呼吸科,沈 红,1,-,contents,目录,1.,结核病的诊断现状,2.TB-IGRA,产品介绍,3.TB-IGRA,的临床应用,4.TB-IGRA,检测方法及结果解释,2,-,3,结核病现状,结核病,(tuberculosis)是由结核分枝杆菌(tubercle bacillus)引起的一种慢性肉芽肿性炎。,以,肺结核最常见,，死亡人数仅次于艾滋病。也,可见于全身各器官,。,肺外结核,占整个发病率的,10%-20%，死亡率,占结核病全部死亡率的,14.1%-17.6%,。,全世界约三分之一的人群感染，,2014,年全球结核病报告,显示：,2013,年有,900,万新发病例，,150,万人死亡。,中国是结核病高发区,，,发病数居全球第二,，现有,600,万活动性肺结核，且患者人数逐年增加，始终位居全国甲乙类传染病的前列。,电镜下的结核杆菌,3,-,World Health Organization.Global tuberculosis control:epidemiology,strategy,financing:WHO report 2011(WHO/HTM/TB/2011.16).Geneva:WHO,2011,2010,年新发,880,万例结核患者，,59%,在亚洲,，,26%,在非洲,4,-,发病人群前五位的国家,India(2.0 million2.5 million)(26%),China,(0.9 million1.2 million),South Africa(0.40 million0.59 million),Indonesia(0.37million0.54 million),Pakistan(0.33 million0.48million).,38%,5,-,结核病现状及危害,-,传播范围广,6,-,World Health Organization.Multidrug and extensively drug-resistant TB(M/XDR-TB):2010 global report on surveillance and response.,WHO/HTM/TB/2010.3,.,逐年,增加,全球,27,个,MDR-TB,流行严重,的国家之一，,中国尤其严重,7,-,HIV,感染和艾滋病破坏了机体的免疫系统，加剧了结核的发病，,1/3HIV,病人死于结核,多菌耐药的结核菌感染率增加,贫困、移民等,细菌学涂片率低，,2/3TB,病人菌阴性,原 因,8,-,结核发病机理,LTBI,结核分枝杆菌（,MTB,）,暴露,感染,自愈,90%,不发展为结核病,Latency,2-5%,疾病进展,1%,活动性结核病,细菌全部被清除,一直存在活菌,需预防性服药,不需要预防性服药,Latency,潜伏,9%,复燃,注：感染后发病与否和机体易感性有关！,5-10%,HIV10%,活动性结核：,发病状态,潜伏性结核感染（,LTBI,）：,是宿主感染结核杆菌后,尚未发病,的一种特殊状态,未根治,9,-,结核病的免疫主要是细胞免疫,Dheda K,et al.The immunology of tuberculoisis:From bench to beside.Respirogy,2010,15:433-450,10,-,11,耗时长,4-8,周,检出率低,50%,涂阴检出低,22%-38%,肺外结核难,结核检测的方法比较,结核,诊断,X,射线,分子诊断,涂片,镜检,细菌培养,特异性差,误诊肺炎、肺癌,肺外结核难,操作复杂,技术要求高,涂阴检出低,34%,肺外结核,难,不能区分,NTM,检出率低,20%,肺外结核难,假阳,/,假阴多；,（涂阴,45%/35%,）,WHO,建议禁用,抗体检测,TST,（结核菌素皮试）,不能区分卡介苗接种者,不能区分,NTM,48-72,小时复诊,取样操作简便,检出率高（活动结核和潜伏结核）,区分,BCG,、,NTM,检测肺外结核,IGRA,方法,接触史,临床症状,病原,/,病理,11,-,12,TB-IGRA,Tuberculosis,（结核,TB,）,I,nterferon,（干扰素）,G,amma,（,）,R,elease,（释放）,A,ssay,（测定）,原理,:,感染者体内被结核菌,（,TB,）,抗原致敏的,效应,T,细胞,，在体外受到相同抗原的刺激（在,APC,辅助下）后，会分泌大量,IFN-,(,细胞因子,),。通过,IFN-,的检测，判断结核感染情况。,12,-,contents,目录,1.,结核病的诊断现状,2.TB-IGRA,介绍,3.TB-IGRA,的临床应用,4.TB-IGRA,检测方法及结果解释,13,-,APC,T cell,TB-IGRA,方法介绍,细胞因子,活化,/,细胞因子,细胞因子,ELISA,ELISPOT,流式细胞术,细胞因子,活化标志物,IGRA,s,IFN-,g,release assay,TNF,a,IFN,g,C,K,体外刺激：,RD1,抗原,原理,:,机体内被结核菌抗原致敏的,效应,T,细胞,，在体外受到相同抗原的刺激（在,APC,辅助下）后，会分泌大量,IFN-,(,细胞因子,),。,通过,IFN-,的检测，判断结核感染情况。,14,-,两种,TB-IGRA,比较,高孟秋,刘菲,纪滨英等,.,两种,-,干扰素释放分析在结核病临床诊断中的比较研究,.,中华结核和呼吸杂志，,2012,，,35,（,10,）：,762-765,15,-,TB-IGRA,产品特性,高灵敏度，检出率,85%,以上,高特异性,RD1,区编码的,ESAT-6,和,CFP-10,两个特异性抗原,该抗原具 有较强的,Thl,细胞免疫原性，且在所有制备卡介 苗的菌株及环境中绝大多数非结核分枝杆菌中均不存在该抗原，不受卡介苗和非分支杆菌影响,TNF,a,IFN,g,C,K,16,-,国内外相关研究,TB-IGRA,快速简便,，是一种值得推广的检测方法：,张华，黄圣文，罗振元,.,结核分枝杆菌,r-,干扰素体外释放定量试验诊断结核感染的临床应用,.,中华医学院感染学杂志,2009,年第,19,卷第,14,期,17,-,国内外相关研究,国内文章,sensitivity,结核分枝杆菌,-,干扰素体外释放定量试验诊断结核感染的临床应用,90.24%,（,74/82,）,TB-IGRA,与,TST,检测菌培阳性肺结核患者比较,80.3%,（,118/147),-,干扰素释放试验诊断结核分枝杆菌感染的临床意义,88.64%,（,39/45,）,结核分枝杆菌相关,-,干扰素体外释放试验在结核病诊断中的应用价值,90.7%,（,243/268,）,两种结核分枝杆菌相关,-,干扰素定量检测试剂盒检测结核分枝杆菌感染结果比较研究,90.9%,（,290/319,）,体外释放酶联免疫法检测结核杆菌,-,干扰素的实验研究,89.11%,（,90/101,）,干扰素释放酶联免疫法（,TB-IGRA,）用于检测结核分枝杆菌的优越性,96.12%(99/103),体外,-,干扰素检测结核分枝杆菌不同方法的应用价值比较,90.1%(308/342,干扰素体外释放酶联免疫法在结核潜伏感染诊断中的价值,88.6%(39/44),国外同类试剂,优势,A Three-Way Comparison of Tuberculin Skin Testing,QuantiFERON-TB Gold and T-SPOT.TB in Children,Latent TB,检出高,Positive Tuberculin Skin Test or Interferon-Gamma Release Assay in Patients with Radiographic Lesions Suggesting Old Healed Tuberculosis,Latent TB,检出高,Estimating diagnostic accuracy of tests for latent tuberculosis infection without a gold standard among healthcare workers,特异性,93.6%,Clinical Utility of Interferon Gamma Assay in the Diagnosis of Tuberculosis,灵敏度,90%,特异性,97%,18,-,contents,目录,1.,结核病的诊断现状,2.TB-IGRA,介绍,3.TB-IGRA,的临床应用,4.TB-IGRA,检测方法及结果解释,19,-,临床应用案例,肺结核辅助诊断：,某院呼吸科病人,，,男,临床,症状：,发热,1,周，咳嗽,检测结果：,TB-IgG(-)，,TB-IGRA,（+）T-N的值是21.5pg/ml,结果分析：,TB-IgG,灵敏度低，易漏检。,临床诊断：,肺结核,备注：,2011,年，,WHO,建议不再使用结核抗体检测结核,感染,20,-,临床应用案例,肺外结核辅助诊断：,某院感染科，女，,75,岁,临床症状：,发热数日，胸痛，干咳,检测结果：,X,射线胸腔积液影像，积液涂片（,-,）、积液培养（,-,）、,TB-IGRA,T-N,350pg,/,ml,，,积液,单核细胞增多，,血沉,快,结果分析：,对于肺外结核的诊断，涂片与培养的阳性率极低，,TB-IGRA,（,+,），结合其他非特异辅助指标可明确诊断肺外结核。,临床诊断：,结核性胸膜炎,21,-,临床应用案例,肺炎与肺结核的鉴别诊断：,某医院呼吸内科，男，,59,岁,临床症状：,肺部,有胸水,，高烧发热，初步认定肺炎，抗生素治疗,1,周不见效果，高度怀疑,结核。,检测结果：,痰涂片（,-,），结核抗体（,-,），,TB-IGRA,（,-,）,结果分析：,传统结核检测检出率在,20%-40%,，灵敏度低。,IGRA,检出率,在,90,以上，阴性排除意义高于涂片和抗体。患者继续用药,3,周，病情好转。,临床诊断：,肺炎,22,-,23,MTB,与其他杆菌感染的鉴别诊断：,某院呼吸内科病人，男,临床,症状：,发热、咳嗽、咳痰、呼吸困难，乏力，多汗，关节疼痛,检测结果：,痰涂片（,-,），菌培（,-,），肺部,X,射线可见肺结节，,胸腔积液,诊断过程：,该院诊断为结核但治疗无好转，患者转院检测,IGRAs,（,-,），试管凝集实验,+,，布病抗体,+,，确诊布氏杆菌感染，与该院打官司胜诉。,结果分析：,由于痰涂片和菌培检出率低，阴性也未能引起重视，只凭,X,片和症状诊断为结核并治疗。治疗无效后，病人转院，检测,IGRAs,阴性，考虑排除结核，且病人为牧民，确诊布氏杆菌病。官司败诉后，该院才开始重视,IGRAs,检测,。,最终确诊：,布氏杆菌病,临床应用案例,23,-,MTB,与,NTM,的鉴别诊断：,某院感染科病人，男,临床,症状：,发热,1,周，咳嗽，少量痰,检测结果：,两次痰涂片（,+,），两次,TB-IGRA,（,-,），肺部,X,射线无异常，后经菌培鉴定为菌培（,-,）,结果,分析：,痰涂片不能区分非结核,分枝杆菌,，造成假阳性，而,TB-IGRA,与菌培结果相符，对结核,分枝杆菌,有很好的特异性,。,临床诊断：,鸟型分枝杆菌感染,临床应用案例,24,-,NTM,（非结核分枝杆菌）比例增高,2000,年全国流调分离的,抗酸杆菌菌株中，,NTM,菌株占,11.,1,%,，其中,90%,为非结核分枝杆菌肺病。,NTM,肺病的临床表现与结核病相似,，,既可有全身中毒症状，亦有局部损害表现。但症状和体征缺乏特异性，,20%,-,50,%,的病人无明显症状，除非做菌型鉴定，凭临床表现,难与,肺结核病相鉴别。,PPD,试验,：,弱,阳性多,见，,但不能,鉴别,MTB,和,NTM,感染,。,细菌学,检查,：,常规痰,涂片无法,鉴别,MTB,和,NTM,。,培养,特性：固体培养基,上，,NTM,菌落常光滑，部分菌落有色素产生，生长迅速，且在含,PNB(,对硝基苯甲酸,),和含,TCH(,噻吩二羧酸肼,),选择性培养基上均可生长，而结核分枝杆菌只在,TCH,选择性培养基上,生长。,25,-,使用,抗,TNF,药物前排查结核的意义,发病率,/100.000,患者,/,年,Dixon W G et al.Ann Rheum Dis 2010;69:522528.,Tubach et al.,Arthritis&Rheum,2009;60:1884-1894,发病率,/100.000,患者,/,年,06.16.2011,26,-,潜伏性感染监控,某中学高三年级小规模结核爆发,初始病例,1,例（,7,班）,6,月初,第一批疫情,5,例（,7,班）,8-9,月,第二批疫情,10,例（,8,例,7,班）,9,月,对师生采血进行,IGRA,检测,IGRA,阳性者进行预防性服药,疫情控制,自行住院,全年级师生胸透，胸透阴影预防性服药,全年级师生,PPD,试验,疫情发展阶段,结核病例及分布,疫情时间,疫情初处理,一起小规模结核暴发流行的调查与控制,27,-,潜伏性感染、抗结核治疗监控,定量检测,干扰素释放强度，可用于持续监控：,28,-,抗结核治疗效果辅助评估,Kobashi,等利用,IGRA,对,50,例结核患者的治疗进行追踪检测：,治疗开始后，结核患者中,IGRA,的敏感性和反应强度均有明显的下降趋势,29,-,综上，,TB-IGRA,：,高特异性，高灵敏性，体外，全血，定量检测,应用方向：,肺结核辅助诊断,肺外结核辅助诊断,结核感染排查,潜伏性感染监控，抗结核治疗追踪,TB-IGRA的临床应用,30,-,TB-IGRA应用汇总,肺结核的辅助诊断，尤其是细菌学检测阴性的肺结核的辅助诊断：,TB-IGRA,从细胞水平上检测结核感染，检出率高，早期感染即可检出，实现早诊断早治疗。,肺外结核的辅助诊断,：,TB-IGRA,取静脉血进行检测，克服肺外结核患者痰样找不到结核菌，病灶部位取样难的问题。,呼吸系统疾病与结核的鉴别诊断：,发热、咳嗽、咳痰,2,周；咯血；胸痛等症状疑似结核，胸片,/CT,不能明确诊断者；抗炎治疗治疗效果不佳患者的结核排查，阴性结果在很大程度上可以排除结核。,31,-,2,周以上不明原因发热病人的结核感染排查：,有研究发现其中,20%,是结核引起的，大部分是肺外结核。,高危人群的结核感染筛查：,如使用生物制剂,/,免疫抑制剂、大剂量激素患者，,HIV,患者，糖尿病患者，血液病和癌症放化疗之前患者进行结核筛查，以防陈旧性结核、潜伏性结核爆发以及近期结核感染。,抗结核治疗效果跟踪以及潜伏性结核定期监控：,TB-IGRA,结果是一个定量值，活动性结核患者随治疗进行阳性强度降低甚至转阴；潜伏感染患者若发生阳性强度明显升高，有发展成活动性结核风险。流调显示有,85%,90%,新诊断的活动性肺结核由潜伏性结核演变而来。,32,-,已有,25,个国家发布了,IGRAs,应用指南：,美国、加拿大、英国、巴西、法国、西班牙、意大利、德国、澳大利亚、葡萄牙、爱尔兰、瑞士、丹麦、挪威、芬兰、捷克、斯洛伐克、波兰、保加利亚、克罗地亚、沙特、奥地利、南韩、日本、,中国,潜伏性感染和活动性结核的辅助诊断,（美国,CDC,，英国,NICE,，,中国,）,疑似结核的辅助诊断，阴性结果排除感染,（,中国,）,在所有人群中可以完全代替,PPD,试验,（美国,CDC,，日本厚生省）,接受抗,TNF-a,治疗前必须用,IGRA,进行结核杆菌感染的筛查，,PPD,筛查不再使用,（瑞士卫生署和肺科协会）,两个国际组织,WHO,、,ECDC,也发布了应用指南。,万泰,TB-IGRA,试剂是“中华人民共和国出入境检验检疫行业标准,结核分枝杆菌,-,干扰素体外检测方法”中唯一提到的结核检测试剂。,33,-,34,-,contents,目录,1.,结核病的诊断现状,2.TB-IGRA,产品介绍,3.TB-IGRA,的临床应用,4.TB-IGRA,检测方法及结果解释,35,-,万泰TB-IGRA,北京万泰生物药业股份有限公司,国家传染病诊断试剂与,疫苗工程技术研究中心,厦门大学,研制历经,6,年，,2012,年,4,月获得,SFDA,认证,国食药监械（准）字,2012,第,3400557,号,36,-,TB-IGRA检测方法,37,-,阴性对照管,N,阳性对照管,P,检测管,T,培养液,无刺激原,培养液,刺激抗原,培养液,PHA,TB,特异性刺激抗原（,RD1,区：,ESAT-6,、,CFP-10,）,无刺激效应,非特异性刺激抗原（,PHA,）,评估,-,IFN,升高水平,评估,-,IFN,本底水平,评估,T,淋巴细胞活性,ELISA,定量分析,38,-,TB-IGRA,结果判定,T,：测试培养管（,T,）含量值,N,：本底对照培养管（,N,）含量值,P,：阳性对照培养管（,P,）含量值,N,P-N,T-N,结果判定,结果解释,400,任何值,14,且,N/4,阳性,感染结核分,枝,杆菌（结核活动期感染、潜伏感染）,20,14,或,N/4,阴性,未感染结核分枝杆菌,20,14,或,400,任何值,任何值,不确定,39,-,TB-IGRA,结果判定,40,-,全自动酶免平台系统,41,-,42,-,TB-IGRA,注意事项,采血管推荐使用,BD,或,Greiner Bio-One,肝素锂采血管，内毒素最少，对结果影响最小,采血到分装不超过,4,小时，避免混血激烈,/,溶血等,病人情况,免疫系统异常患者检出效果受限,不能严格区分活动或潜伏,无症状阳性的处理,依据下一步治疗和病人意愿做预防性治疗,不确定结果的原因,免疫系统异常患者容易因免疫力低下或,干扰素本底过高造成无法判断,43,-,TB-IGRA,的临床参考,涂片,菌培,TB-IGRA,肺结核影像学指征,疑似肺结核临床症状,临床指导意义,+/-,+,+,+,+/-,活动性肺结核，有强传染性，建议治疗,+/-,+,+,-,+/-,活动性肺结核，建议治疗,-,-,+,+,+,活动性肺结核，建议治疗,-,-,+,+,-,既往肺结核恢复期，建议跟踪观察,-,-,+,-,-,潜伏性结核；如有肺外结核症状则为肺外结核；罕见分枝杆菌感染,+,+,-,+/-,+/-,CD4,细胞水平低下的活动性结核患者，建议治疗,+,-,-,+/-,+/-,非结核分枝杆菌感染者,-,-,-,+,+,肺部其他疾病，排除肺结核,44,-,万泰TB-IGRA检测试剂盒的优势,高灵敏度：,肺内、肺外结核辅助诊断，尤其可用于涂,/,菌阴肺结核的辅助诊断；,高特异性：,排除卡介苗及非结核分枝杆菌的干扰，降低假阳性；,体外全血检测：,有效检出肺外结核，并发现早期感染者；,定量分析：,可进行疗效的辅助评估；,采用酶免平台，具有高通量检测能力，简便快捷，无需对技术人员进行专业培训。,45,-,2013,年,6,月,46,-,TB-IGRA,开展情况,TB-IGRA,在国内,开展的,单位已有近,300,家,华西医院、安贞医院、解放军,309,医院、,301,医院、北京佑安医院、湖南省人民医院、四川省人民医院、西安交大附属二院等等,江苏目前已开展,20,多家,南京军区总医院、江苏省人民医院、江苏省中医院、南京市中医院、徐州市第一人民医院、南京市第一人民医院等等,47,-,T H A N K Y O U,48,-,