细菌分离培养.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,实验三,细菌分离培养及移植,刘书超,预防兽医教研室,细菌的分离纯化技术,分离纯化：,使微生物共生群体分离开，得到纯培养物的过程称微生物的,纯分离技术,。得到的纯培养物称纯种。,纯种：,指一种或一株微生物,培养物,中所有的细胞只来源同一个细胞的后代。,分离纯化技术是细菌学实验中最基本的技术之一,临床送检样品或混杂的样品,分离受杂菌污染的菌种,细菌纯培养物,试验内容：,1.,需氧菌的分离移植和增菌,平板划线分离,营养（普通）斜面接种,营养（普通）肉汤增菌,2.,厌氧菌的分离培养方法,（本次试验不做）,生物学方法、化学方法、物理学方法,实验要求：,掌握：,掌握细菌分离培养的基本要领和方法,掌握无菌操作程序,掌握细菌在培养基上生长特点,认识：,认识菌落形态,无菌操作工具,接种工具,分离纯化法：,（细菌分离纯化）,1,、,平板划线法,2,、稀释,涂布,平板法,3,、稀释混合（倾注）平板法,4,、显微操作器单细胞挑取法,5,、棋盘格划线法,1.,平板划线：,将蘸有混合细菌的接种环在,平板表面,多方向,连续划线,，使混杂的微生物细胞在平板表面分散，浓度变稀，经培养得到由,单个细胞,繁殖而成的,菌落,，从而达到纯化。,1.,平板划线：,平板划线的原则和目的：,通过划线稀释细菌,获得单个菌落,划线均匀而细密，不重复,充分利用培养基面积,培养基不能划破,图,1,平板画线法,A,、,B,、,C,分别为,1,、,2,、,3,次画线,A,B,C,注意手势,1.,培养皿与酒,精灯的距离,2.,左手打开培,养皿的动作,3.,右手握接种,棒的姿势,4.,右手划线的,运作姿势,分区划线：,多用于粪便等含菌量较多的标本。,每划,一个区域，将接种环,烧灼一次,，待,冷却后,再划下一个区域。每一区域的划线应接触上一区域接种线的,23,次，使菌量逐渐减少，以形成单个菌落。,连续划线（曲线划线）：,分离含菌量较少的培养物,右手持接种环，,通过火焰灭菌，,冷却后，挑取标本或培养物少许,1.,平板划线：,1,挑取菌液：用接种环按无菌操作法挑取少量菌液。,2,分区划线（分,3,或,4,区），将接种环灭菌后放回原处。,3,培养：将划线后的平板倒置于,37,恒温箱中培养,1-2,天。,4,纯培养：选择,4,或,3,区中典型的独立的可疑单菌落，分别移植到普通琼脂斜面上，经培养后即获得了该菌的纯培养物（纯种）。,1,4,3,2,细菌在,固体培养基中,的生长情况：,单个菌落（,S,型）,菌苔,菌落（,R,型）,细菌的培养特征：,不同种类的细菌在固体、半固体和液体培养基中可表现出各自特有的培养特征。可以作,为细菌鉴别的特征之一。,细菌在固体培养基中生长表现：,1,、大小,（,mm,表示。,1mm,以内露滴状；,1-2mm,小菌落。,2-4mm,中等大菌落；,4-6mm,以上称大菌落或巨大菌落,）,2,、形状,（圆形、不规则形）,3,、边缘,（整齐、锯齿状）,4,、表面性状,（光滑、粗糙）,5,、隆起度,（扁平、隆起、中凸）,6,、颜色及透明度,（黄色、灰白、光泽、透明）,7,、硬度,（干燥、湿润、粘液）,8,、溶血,（在血培养基上的表现）,2.,斜面移植法：,培养，保存菌种及其它。,手执塑料杆处,手执试管底露出斜面,试管口离火焰,1cm,小指夹棉塞,培养后生长的斜面菌种,液体培养基接种法：,用于增菌及纯培养细菌的生长特点观察，如表面生长，沉淀生长，均匀混浊生长等。,细菌在液体培养基中生长的,三种不同,现象,混浊,：,细菌均匀弥漫扩散，出现不同程度混浊。,沉淀：,细菌由下沉。肉眼可见沉淀物（颗粒絮状）,菌膜：,需氧菌易在液面生长，形成可见的菌膜，菌环。,操作顺序：,接种环灭菌,勾取细菌,取棉塞,接种,塞棉塞,接种环灭菌,标记,培养。,思考题：,1,、划线分离时为什么每次都要讲接种环上多余的菌体烧掉？划线时为何不能重叠？,2,、在恒温箱培养微生物时为何培养皿均需倒置？,3,、如何进行菌落形状的检查？检查时应注意观察菌落的哪些性状？,4,、分离培养的目的是什么？经一次分离的菌种是否皆为纯种？何为纯种？,胆大心细的操作！,涂布平板法：,98,661genes,平板划线法：,