广东食品药品职业学院实验教学教案.doc

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广东食品药品职业学院实验教学教案（2014～2015学年第一学期）课程名称中药制剂检验技术、中药质量检测与控制实训项目实训性状与显微鉴别课时 2 教学对象 13中药制药1-4班、13药分1-2班授课日期教材卓菊主编. 中药制剂检验技术（中药质量检测与控制）实训讲义，2014 教师姓名卓菊教学方法讲授法、演示法、实操法实验实训中心签字实验目的 1. 掌握中药制剂的中性状鉴别方法。 2. 掌握显微鉴别方法.。教学内容与要求六味地黄丸【性状】本品为棕黑色的水蜜丸、黑褐色的小蜜丸或大蜜丸；味甜而酸。【鉴别】 (1) 取本品，置显微镜下观察：淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24～40μm,脐点短缝状或人字状。不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色，直径4～6μm。薄壁组织灰棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物。草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中，有时数个排列成行。果皮表皮细胞橙黄色，表面观类多角形，垂周壁略连珠状增厚。薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔，集成纹孔群；内皮细胞垂周壁波状弯曲，较厚，木化，有细疏细孔沟。重点难点 1. 现象观测及其判断。 2. 原始记录及检验报告书的书写。仪器盖玻片、载玻片、显微镜等试剂稀甘油、水合氯醛试液等教学过程设计 [板书]一、实验目的 1. 掌握中药制剂的中性状鉴别方法。 2. 掌握显微鉴别方法.。 [板书]二、实验原理六味药味均为细粉入药，药材的显微特征存在。 [板书]三、实验步骤及操作【性状】本品为棕黑色的水蜜丸；味甜而酸。【鉴别】 (1) 取本品，置显微镜下观察：淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24～40μm,脐点短缝状或人字状。不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色，直径4～6μm。薄壁组织灰棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物。草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中，有时数个排列成行。果皮表皮细胞橙黄色，表面观类多角形，垂周壁略连珠状增厚。薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔，集成纹孔群；内皮细胞垂周壁波状弯曲，较厚，木化，有细疏细孔沟。（1）水装片（2）水合氯醛：常用封藏液，也是透化剂，可使干缩的细胞膨胀而透明，并能溶解淀粉粒、树脂、蛋白质、叶绿素及挥发油等，加热后透化效果更为明显注意事项预习思考题完成预习报告课后记完成报告书广东食品药品职业学院实验教学教案（2014～2015学年第一学期）课程名称中药制剂检验技术、中药质量检测与控制实训项目实训一般化学反应鉴别/铺板课时 2（13中药制药1-4班） 4（13药分1-2班）教学对象 13中药制药1-4班、13药分1-2班授课日期教材卓菊主编. 中药制剂检验技术（中药质量检测与控制）实训讲义，2014 教师姓名卓菊教学方法讲授法、演示法、实操法实验实训中心签字实验目的 1. 掌握掌握中药制剂中化学成分的化学鉴别方法。 2. 掌握铺板方法 3. 熟悉中药制剂样品的前处理方法和供试液的制备。教学内容与要求 1. 石淋通片的鉴别取本品研成细粉，取约1g，加1%盐酸的70%乙醇溶液10ml，温热10分钟，滤过，滤液蒸去乙醇，加水5ml使溶解，滤过，取滤液各1ml，分置两支试管中，一管中加碘化铋钾试液2滴，生成橘红色沉淀；另一管中加三硝基苯酚试液2滴，生成黄色沉淀。 2. 薄层板制备将硅胶G 1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入玻板上并使其均匀（厚度为0.25~0.5mm），于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点无气泡，无破损及污染，于110℃烘30分钟，冷却后立即使用或置干燥箱中备用。重点难点 3. 现象观测及其判断。 4. 原始记录及检验报告书的书写。仪器托盘天平、研钵、电热套、漏斗等试剂 70%乙醇、5%硫酸、碘化铋钾试液、三硝基苯酚试液等教学过程设计 [板书]一、实验目的 1. 掌握掌握中药制剂中化学成分的化学鉴别方法。 2. 掌握铺板方法 3. 熟悉中药制剂样品的前处理方法和供试液的制备。 [板书]二、实验原理 1. 本品为广金钱草浸膏片，含生物碱，能与生物碱沉淀试剂作用生成沉淀。 [板书]三、实验步骤及操作 1. 石淋通片的鉴别取本品研成细粉，取约1g，加1%盐酸的70%乙醇溶液10ml，温热10分钟，滤过，滤液蒸去乙醇，加水5ml使溶解，滤过，取滤液各1ml，分置两支试管中，一管中加碘化铋钾试液2滴，生成橘红色沉淀；另一管中加三硝基苯酚试液2滴，生成黄色沉淀。碘化铋钾试液（应呈橘红色沉淀）三硝基苯酚试液（应呈黄色沉淀） 2. 薄层板制备：将硅胶G 1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入玻板上并使其均匀（厚度为0.25~0.5mm），于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点无气泡，无破损及污染，于110℃烘30分钟，冷却后立即使用或置干燥箱中备用。注意事项 1. 所有仪器要求洁净，以免干扰化学反应。 2. 试药和试液的加入量、方法和顺序均应按各试验项下的规定；如未作规定，试液应逐滴加入，边加边振摇；并注意观察反应现象。 3. 试验在试管或离心管中进行，试管反应一般使用2×10cm试管，取供试液1~2ml。如需加热，应小心仔细，并使用试管夹，边加热边振摇，试管口不要对着试验操作者。 4. 试验中需要蒸发时，应置于玻璃蒸发皿或瓷蒸发皿中，在水浴上进行。 5. 沉淀反应有色沉淀反应宜在白色点滴板上进行，白色沉淀反应应在黑色或蓝色点滴板上进行，也可在试管或离心管中进行；如沉淀少不易观察时，可加入适量的某种与水互不混溶的有机溶剂，使原来悬浮在水中的沉淀集中于两液层之间，以便观察。 6. 反应灵敏度极高的试验，必须保证试剂的纯度和仪器的洁净，为此应同时进行空白试验，以资对照。 7. 反应不够灵敏，试验条件不易掌握的试验，可用对照品进行对照试验。 8. 防止出现假阳性反应或假阴性反应。预习思考题完成预习报告课后记完成报告书广东食品药品职业学院实验教学教案（2014～2015学年第一学期）课程名称中药制剂检验技术、中药质量检测与控制实训项目实训薄层色谱法鉴别课时 2 教学对象 13中药制药1-4班、13药分1-2班授课日期教材卓菊主编. 中药制剂检验技术（中药质量检测与控制）实训讲义，2014 教师姓名卓菊教学方法讲授法、演示法、实操法实验实训中心签字实验目的 1. 熟悉中药制剂样品的前处理方法和供试液的制备。 2. 掌握薄层色谱法鉴别中药制剂的原理、方法及其操作。教学内容与要求【鉴别】（1）取本品5片，除去包衣，研细，取0.25g，加甲醇5ml，超声处理5分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各3~5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10:7:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，分别在紫外灯光（254nm）和紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与盐酸小檗碱对照品色谱相应的位置上，紫外光（365nm）下显相同颜色的荧光斑点；在与黄芩苷对照品色谱相应的位置上，紫外光（254nm）下显相同颜色的斑点。重点难点 1. 点样及其判断。 2. 原始记录及检验报告书的书写。仪器定容毛细管、层析缸、紫外光灯（365nm）试剂乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10:7:1:1）教学过程设计 [板书]一、实验目的 1. 熟悉中药制剂样品的前处理方法和供试液的制备。 2. 掌握薄层色谱法鉴别中药制剂的原理、方法及其操作。 [板书]二、实验原理 3. 鉴别可采用与同浓度的对照品溶液，在同一块薄层板上点样、展开与检视，供试品溶液所显主斑点的位置与颜色（或荧光）应与对照品溶液的主斑点一致，而且主斑点的大小、颜色的深浅也应大致相同。或采用供试品溶液与对照品溶液等体积混合，应显示单一、紧密的斑点；或选用与供试品化学结构相似的药物对照品与供试液的主斑点比较，两者Rf值值应不同；或将上述两种溶液等体积混合，应显示两个清晰分离的斑点。 [板书]三、实验步骤及操作 1. 薄层板制备：将硅胶GF2541份和水3份在研钵中向同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入玻板上并使其均匀（厚度为0.25~0.5mm），于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点无气泡，无破损及污染，于110℃烘30分钟，冷却后立即使用或置干燥箱中备用。薄层板表面应均匀、平整、光滑，无麻点、无气泡、无破损及污染。 2. 取本品5片，除去包衣，研细，取0.25g，加甲醇5ml，超声处理5分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。 3. 对照品溶液的制备（实训室制备）：另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。 4. 展开剂的制备（实训室，每人约需8～10ml）：乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10:7:1:1），精密量取乙酸乙适量、丁酮适量、甲酸适量、水适量混合均匀，即得。 5. 点样：微升毛细管点样。吸取上述三种溶液各3~5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于3mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 6. 饱和（预平衡）：将点好样的薄层板放入展开缸中，加入约8ml展开剂（展开剂禁止接触薄层板），密闭，饱和15～30分钟。 7. 展开：将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密闭，待展开至规定距离，取出薄层板，晾干。 8. 检视并画图。注意事项 1. 薄层板的活化与保存。 2. 点样速度要快。 3. 点样环境：保持试验环境的相对恒定。 4. 展开：展开缸预先饱和可避免边缘效应，展开距离不宜过长。 5. 喷雾显色：可使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出。预习思考题完成预习报告课后记完成报告书广东食品药品职业学院实验教学教案（2014～2015学年第一学期）课程名称中药制剂检验技术、中药质量检测与控制实训项目一般杂质检查-芒硝重金属检查课时 2 教学对象 13中药制药1-4班、13药分1-2班授课日期教材卓菊主编. 中药制剂检验技术（中药质量检测与控制）实训讲义，2014 教师姓名卓菊教学方法讲授法、演示法、实操法实验实训中心签字实验目的掌握一般杂质-重金属的检查原理、方法及操作。教学内容与要求【检查】镁盐取本品2g，加水20ml溶解后，加氨试液与磷酸氢二钠试液各1ml，5分钟内，不得发生浑浊。重金属取本品2.0g，加稀醋酸2ml与适量的水溶解使成25ml，依法检查（附录Ⅸ E第一法），含重金属不得过百万分之十。要求学生掌握重金属的概念、硫代乙酰胺法检查原理、操作和判断。重点难点 1. 结果观测。 2. 原始记录及检验报告书的书写。仪器分析天平、比色管试剂稀醋酸、标准铅溶液、PH3.5醋酸盐缓冲溶液、硫代乙酰胺试液教学过程设计 [板书]一、实验目的掌握一般杂质重金属的检查方法。 [板书]二、实验原理检查原理为在醋酸盐缓冲溶液（pH3.5）条件下，检品溶液所含的铅与硫代乙酰胺试液作用显色（棕色或黑色），与一定量的标准铅溶液在相同条件下生成的颜色的比较，以检查供试品中所含重金属是否超过限量。 [板书]三、实验步骤及操作 1. 镁盐：略 2. 重金属 (1) 标准铅溶液的制备（实训室制备）称取硝酸铅0.160g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作储备液。临前，精密量取储备液10ml,置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。（每1ml相当于10mg的铅）。 (2) 硫代乙酰胺试液的制备（须学生临用前制备）：取4%硫代乙酰胺水溶液1.0ml，临用前加入5.0ml混合液（由1mol/L氢氧化钠液15ml，水5ml及甘油20ml组成），在沸水浴上加热20S，冷却，即得。 (3) 取25ml钠氏比色管3支 ① 甲管中加标准铅溶液2.0ml，与醋酸盐缓冲溶液（PH3.5）2ml后，用水稀释至25ml，得标准溶液。 ② 乙管中加芒硝2.0g，加稀醋酸2ml与适量的水溶解使成25ml，得供试品溶液。 ③ 丙管中加芒硝2.0g，加稀醋酸2ml与适量的水溶解后，加标准铅溶液2.0ml，与醋酸盐缓冲溶液（PH3.5）2ml后，用水稀释至使成25ml。 ④ 在甲乙丙三管分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2min，同置白纸上，自上向下透视，当丙管现出的颜色不浅于甲管时，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。如丙管现出的颜色浅于甲管，应取样按第二法重新检查。注意事项 1. 标准铅溶液应在临用前精密量取标准铅贮备液新鲜稀释配制，以防止硝酸铅水解而造成误差，配制与贮存标准铅溶液使用的玻璃容器，均不得含有铅。 2. 重金属硫化物生成的最佳pH值是3.0～3.5，选用醋酸盐缓冲液（pH3.5）2.0ml调节较好。 3. 显色剂硫代乙酰胺试液用量经实验也以2.0ml为佳。 4. 显色时间一般为2分钟。 5. 以10～20µg的Pb与显色剂所产生的颜色为最佳目视比色范围。 6. 硫代乙酰胺显色剂：因易水解，故临用前配制。 7. 纳氏比色管应选玻璃质量好、无色（尤其管底）、配对、刻度标线高度一致的纳氏比色管。预习思考题完成预习报告课后记完成报告书广东食品药品职业学院实验教学教案（2014～2015学年第一学期）课程名称中药制剂检验技术、中药质量检测与控制实训项目相对密度课时 2 教学对象 13中药制药1-4班、13药分1-2班授课日期教材卓菊主编. 中药制剂检验技术（中药质量检测与控制）实训讲义，2014 教师姓名卓菊教学方法讲授法、演示法、实操法实验实训中心签字实验目的 1. 掌握中药制剂口服液相对密度测定方法教学内容与要求【检查】相对密度应不低于1.16（附录Ⅶ A）。重点难点 1. 相对密度结果计算报告书的书写。仪器分析天平、比重瓶、pH计等试剂邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液（pH4.00）、磷酸盐标准缓冲液（pH6.86）教学过程设计 [板书]一、实验目的 2. 掌握中药制剂口服液相对密度测定方法； 3. 掌握中药制剂口服液pH值的测定方法。 [板书]二、实验原理 1. 相对密度：系指在相同的环境条件下（如同一温度等），某物质的密度与参考物质（水）的密度之比。通常用来表示，除另有规定外，均指20℃时的比值，即组成一定的药品具有一定的相对密度，当其组分或纯度变更，相对密度亦随之改变；因此，测定相对密度，可以鉴别或检查药品的纯杂程度。一般用比重瓶法。 [板书]三、实验步骤及操作相对密度（比重瓶法）（1）比重瓶重量的称定：将比重瓶洗净并干燥，称定其重量，准确至毫克数。（2）供试品重量的测定：取上述已称定重量的比重瓶，装满供试品（温度应低于）后，插入中心有毛细孔的瓶塞，用滤纸将从塞孔溢出的液体擦干，置的恒温水浴中，放置若干分钟，随着供试液温度的上升，过多的液体不断从塞孔溢出，随时用滤纸将瓶塞顶端擦干，待液体不再由塞孔溢出（此现象意味着温度已平衡），迅即将比重瓶自水浴中取出，再用滤纸擦干瓶壁外的水，迅速称定重量准确至毫克数。减去比重瓶的重量，即得供试品重量。水重量的测定：按上述求得供试品重量后，将比重瓶中的供试品倾去，洗净比重瓶，装满新沸过的冷水，再照供试品重量的测定法测定同一温度时水的重量。注意事项 1. 比重瓶必须洁净、干燥（所附温度计不能采用加温干燥），操作顺序为先称量空比重瓶重，再装供试品称重，最后装水称重。 2. 配制标准缓冲液与供试液用水，应是新沸放冷除去二氧化碳的蒸馏水或纯化水（pH值5.5～7.0），并应尽快使用，以免二氧化碳重新溶入，造成测定误差。预习思考题完成预习报告课后记完成报告书广东食品药品职业学院实验教学教案（2014～2015学年第一学期）课程名称中药制剂检验技术、中药质量检测与控制实训项目重量（装量）差异检查课时 2 教学对象 13中药制药1-4班、13药分1-2班授课日期教材卓菊主编. 中药制剂检验技术（中药质量检测与控制）实训讲义，2014 教师姓名卓菊教学方法讲授法、演示法、实操法实验实训中心签字实验目的掌握中药制剂的重量差异、装量差异的检查方法教学内容与要求 1. 重量差异检查 2. 复方丹参片的重量差异检查 3. 板蓝根颗粒的装量差异检查重点难点 1. 结果判断。 2. 原始记录和报告书的书写。仪器分析天平、称量瓶、镊子等试剂无教学过程设计 [板书]一、实验目的 1. 掌握中药丸剂、片剂的重量差异的检查方法。 2. 掌握中药颗粒剂的装量差异的检查方法。 [板书]二、实验原理制剂的重（装）量差异检查是药品质量的常规检查项目之一，保证用药剂量的准确。中国药典在附录中规定了对各剂型的重（装）量差异进行检查的方法。 [板书]三、实验步骤及操作每片（丸、袋）重量： 20片（10丸、10袋）重量：平均片重：限度：限度范围：结果：结论：注意事项无预习思考题完成预习报告课后记完成报告书广东食品药品职业学院实验教学教案（2014～2015学年第一学期）课程名称中药制剂检验技术、中药质量检测与控制实训项目含量测定-UV法课时 2 教学对象 13中药制药1-4班、13药分1-2班授课日期教材卓菊主编. 中药制剂检验技术（中药质量检测与控制）实训讲义，2014 教师姓名卓菊教学方法讲授法、演示法、实操法实验实训中心签字实验目的 1. 掌握用紫外-可见分光光度法测定制剂含量的原理和方法。 2. 熟悉紫外-可见分光光度仪。教学内容与要求消咳喘糖浆中总黄酮的含量测定重点难点 1. 数据处理及结果判断。 2. 原始记录和报告书的书写。仪器仪器：紫外-可见分光光度仪等试剂三氯化铝、醋酸钾、60%乙醇、亚硝酸钠等教学过程设计 [板书]一、实验目的 1. 掌握用紫外-可见分光光度法测定制剂含量的原理和方法。 2. 熟悉紫外-可见分光光度仪。 [板书]二、实验原理紫外-可见分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内的吸光度，对该物质进行定性和定量分析的方法。满山红含有黄酮类化合物，在一定条件下与三氯化铝作用生成有色物质，在420nm有吸收。 [板书]三、实验步骤及操作【含量测定】总黄酮对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品30mg，置100ml量瓶中，加60％乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取10ml，置50ml量瓶中，加60％乙醇至刻度，摇匀，即得（每1ml含无水芦丁60μg）。教学过程设计标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml与5ml，分别置10ml量瓶中，各加0.1mol/L三氯化铝溶液2ml、1mol/L醋酸钾溶液3ml，加60％乙醇至刻度，摇匀，放置30分钟；以相应的溶液为空白。照紫外-可见分光光度法（附录Ⅴ B），在420nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标、绘制标准曲线。测定法精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，加60％乙醇至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加0.1mol/L三氯化铝溶液”起依法操作。另精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，加60％乙醇稀释至刻度，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，作空白，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。本品每1ml含总黄酮以无水芦丁(C27H30O16)计，不得少于2.0mg。注意事项 1. 选用仪器的狭缝宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度值会偏低，狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，对于大部分被测品种，可以使用2nm缝宽。 2. 吸收池必须洁净，并注意配对使用。量瓶、移液管均应校正、洗净后使用。 3. 取吸收池时，手指应拿毛玻璃面的两侧，装盛样品以池体的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无溶剂残留。 4. 装样品溶液的体积约为池体积的4/5。 5. 吸收池放入样品室时应注意箭头方向相同。吸收池用后用溶剂或水冲洗干净，晾干防尘保存。 6. 供试品溶液浓度除各该品种已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之间为宜。 7. 测定时除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm石英吸收池，在规定的吸收峰±2nm以内，测几个点的吸收度或由仪器在规定的波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸收度最大的波长作为测定波长，除另有规定外吸收度最大波长应在该品种项下规定的测定波长±2nm以内。 8. 供试品应取2份，平行操作，偏差应在±0.5%以内。预习思考题完成预习报告课后记完成报告书广东食品药品职业学院实验教学教案（2014～2015学年第一学期）课程名称中药制剂检验技术、中药质量检测与控制实训项目含量测定-HPLC法课时 6 教学对象 13中药制药1-4班、13药分1-2班授课日期教材卓菊主编. 中药制剂检验技术（中药质量检测与控制）实训讲义，2014 教师姓名卓菊教学方法讲授法、演示法、实操法实验实训中心签字实验目的 3. 掌握用高效液相色谱法测定中药制剂成分含量的原理和方法。 4. 熟悉高效液相色谱仪。教学内容与要求小儿百部止咳糖浆黄芩苷的含量测定重点难点 3. 数据处理及结果判断。 4. 原始记录和报告书的书写。仪器仪器：高效液相色谱仪等试剂甲醇、磷酸等教学过程设计 [板书]一、实验目的 3. 掌握用高效液相色谱法测定中药制剂成分含量的原理和方法。 4. 熟悉高效液相色谱仪。 [板书]二、实验原理高效液相色谱法系以高压液体为流动相的分析方法，是一种现代液体色谱法。其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用高压输液泵将其泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用色谱处理机记录色谱图或进行色谱数据处理，得到测定结果。 [板书]三、实验步骤及操作【含量测定】照高效液相色谱法（附录ⅥD）测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水-磷酸（45:55:0.04）为流动相，检测波长为276nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。教学过程设计对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。供试品溶液的制备精密量取本品2ml，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加65%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱法，测定，即得。本品每1ml含黄芩以黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于3.7mg。注意事项 9. 色谱柱与进样器及其出口端与检测器之间应为无死体积连接，以免试样扩散影响分离。 10. 新柱或被污染柱用适当溶剂冲洗时，应将其出口端与检测器脱开，避免污染。 11. 使用的流动相应与仪器系统的原保存溶剂能互溶，如不互溶，则先取下上次的色谱柱，照（(3).①.a和(3).①.b）的方法用异丙醇冲洗过渡，进样器和检测器的流通池也注入异丙醇进行过渡，过渡完毕后，接上相应的色谱柱，换上本次使用的流动相，再按（(3).①.a）顺序操作。 12. 压力表无压力显示或压力波动时不能进行分析，应检查泵中气泡是否已排除， 13. 各连结处有无漏液，排除故障后方能进行操作。如压力升高，甚至自动停泵，应检查柱端有无污染堵塞。 14. 发现记录基线波动，出现毛刺等现象，首先应考虑检测器流通池中是否有气泡或污染，如不是流通池引起，可等待氘灯稳定，同时检查仪器的接地是否良好，必要时，换上新的氘灯，仪器稳定后方能进行操作。 15. 进样前，色谱柱应用流动相充分冲洗平衡，如系统适用性不符合规定，或填充剂已损坏，则应更换新的同类色谱柱进行分析，由于同类填充剂的化学键合相的键合度及性能等存在一定差异，往往依法操作达不到预定的分离时，可更换另一牌号的同类色谱柱进行试验。 16. 各色谱柱的使用应予登记，应包括本次测试药品及柱中的保存溶剂。 17. 色谱流路系统，从泵、进样器、色谱柱到检测器流通池，在分析完毕后，应按（⑤ a）充分冲洗，特别是用过含盐流动相的，更应注意先用水，再用甲醇-水充分冲洗，如发现泵漏液等较严重的情况，应请有经验的维修人员进行检查、维修。预习思考题完成预习报告课后记完成报告书

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