生化实验二果蔬中总糖及还原糖含量的测定.pptx

生物化学实验生物化学实验生物化学实验生物化学实验第一部分第一部分第一部分第一部分果蔬成分的生化分析果蔬成分的生化分析果蔬成分的生化分析果蔬成分的生化分析综合实验一：果蔬成分的生化分析果蔬成分的生化分析实验一实验一 果蔬中维生素果蔬中维生素C的定量测定（的定量测定（4学时）学时）实验二实验二 果蔬中总糖及还原糖含量的测定（果蔬中总糖及还原糖含量的测定（4学时）学时）实验三实验三 果蔬中蛋白质含量的测定（果蔬中蛋白质含量的测定（4学时）学时）实验四实验四 果蔬中过氧化物酶分析（果蔬中过氧化物酶分析（12学时）学时）实验材料：实验材料：冬枣柚子冬枣柚子14组组梨（梨（2个品种）个品种）58组组盘菜萝卜盘菜萝卜 912组组实实实实 验验验验 二二二二果蔬中总糖及还原糖含量的测定果蔬中总糖及还原糖含量的测定果蔬中总糖及还原糖含量的测定果蔬中总糖及还原糖含量的测定一、目的一、目的 掌握总糖和还原糖含量的测定方法。掌握总糖和还原糖含量的测定方法。学习分光光度计的原理和操作方法。学习分光光度计的原理和操作方法。二、原理二、原理 总总糖糖是是指指样样品品中中的的还还原原单单糖糖及及在在本本实实验验条条件件下下能能水水解解成成还还原原单单糖糖的的蔗蔗糖糖、麦麦芽芽糖和可部分水解成葡萄糖的淀粉。糖和可部分水解成葡萄糖的淀粉。多多糖糖为为非非还还原原糖糖，可可用用酸酸将将没没有有还还原原性性的的多多糖糖和和寡寡糖糖彻彻底底水水解解成成具具有有还还原原性性的的单单糖糖，再再利利用用还还原原糖糖的的性性质质进进行行测测定定，这这样样就就可可分分别别求求出总糖和还原糖的含量。出总糖和还原糖的含量。蒽蒽酮酮比比色色法法是是一一个个快快速速而而简简便便的的定定糖糖方方法法。其其原原理理：糖糖类类在在较较高高温温度度下下可可被被硫硫酸酸脱脱水水成成糠糠醛醛或或糠糠醛醛衍衍生生物物，再再与与蒽蒽酮酮缩缩合合成成蓝蓝色色化化合合物物，在在620nm处有最大吸收。处有最大吸收。三、实验器材三、实验器材1、植物材料、植物材料2、吸管（、吸管（1.0mL2、5.0mL2、0.1mL2、0.2mL2、0.5mL2）3、试管（、试管（1.5cm15cm7）4、分光光度计、分光光度计5、水浴锅、电炉、水浴锅、电炉6、电子分析天平、电子分析天平7、容量瓶（、容量瓶（100mL1）、玻璃漏斗）、玻璃漏斗8、量筒、研钵、三角烧瓶、量筒、研钵、三角烧瓶四、实验试剂四、实验试剂1、蒽蒽酮酮试试剂剂：取取2g蒽蒽酮酮溶溶于于1000mL体体积积分分数数为为80%的硫酸中，当日配制使用。的硫酸中，当日配制使用。2、标标准准葡葡萄萄糖糖溶溶液液（0.1mg/mL）：称称取取100mg葡葡萄萄糖糖，溶溶于于蒸蒸馏馏水水并并稀稀释释至至1000mL（可可加加几几滴甲苯作防腐剂）。滴甲苯作防腐剂）。3、6mol/L HCl溶液溶液4、20%NaOH溶溶液液：称称取取20g NaOH固固体体，溶溶于于蒸馏水并稀释至蒸馏水并稀释至100mL。五、操作五、操作1、葡萄糖标准曲线的绘制：、葡萄糖标准曲线的绘制：取洁净试管取洁净试管6支，按下表进行操作：支，按下表进行操作：012345标准葡萄糖溶液标准葡萄糖溶液/mL00.10.20.30.40.5蒸馏水蒸馏水1.00.90.80.70.60.5置冰水浴中置冰水浴中5min蒽酮试剂蒽酮试剂4.04.04.04.04.04.0煮沸煮沸10，冷却后室温放置，冷却后室温放置10，在，在620nm处比色处比色A620nm步骤步骤管号管号 以以吸吸光光度度为为纵纵坐坐标标，各各标标准准液液浓浓度度（mg/mL）为横坐标做图得标准曲线。）为横坐标做图得标准曲线。2、样品中还原糖的提取和测定、样品中还原糖的提取和测定 称称称称取取取取1g1g果果果果蔬蔬蔬蔬，加加加加水水水水约约约约3mL3mL，在在在在研研研研钵钵钵钵中中中中磨磨磨磨成成成成匀匀匀匀浆浆浆浆，转转转转入入入入三三三三角角角角烧烧烧烧瓶瓶瓶瓶中中中中，并并并并用用用用约约约约30mL30mL蒸蒸蒸蒸馏馏馏馏水水水水冲冲冲冲洗洗洗洗研研研研钵钵钵钵2 23 3次次次次，洗洗洗洗出出出出液液液液也也也也转转转转入入入入三三三三角角角角烧烧烧烧瓶瓶瓶瓶中中中中。于于于于5050水水水水浴浴浴浴中中中中保保保保温温温温约约约约0.5h0.5h（使使使使还还还还原原原原糖糖糖糖浸浸浸浸出出出出），取取取取出出出出，冷却后定容至冷却后定容至冷却后定容至冷却后定容至100mL100mL。过滤后冰箱保存。过滤后冰箱保存。过滤后冰箱保存。过滤后冰箱保存。冬枣、柚子、梨：取滤液冬枣、柚子、梨：取滤液1mL100mL 盘菜、萝卜：取滤液盘菜、萝卜：取滤液10mL100mL 吸吸取取1mL滤滤液液置置于于试试管管中中，浸浸于于冰冰浴浴中中冷冷却却，再再加加入入4mL蒽蒽酮酮试试剂剂，沸沸水水浴浴中中煮煮沸沸10min，取取出出冷冷却却后后比比色色，其其他他条条件件与与做做标标准准曲曲线线相相同同。测测得得的的吸吸光光度度值值由由标标准曲线查算出样品液的糖含量。准曲线查算出样品液的糖含量。3、样品中总糖的提取、水解和测定、样品中总糖的提取、水解和测定 称称称称取取取取1g1g果果果果蔬蔬蔬蔬，加加加加水水水水约约约约3mL3mL，在在在在研研研研钵钵钵钵中中中中磨磨磨磨成成成成匀匀匀匀浆浆浆浆，转转转转入入入入三三三三角角角角烧烧烧烧瓶瓶瓶瓶中中中中，并并并并用用用用约约约约12mL12mL蒸蒸蒸蒸馏馏馏馏水水水水冲冲冲冲洗洗洗洗研研研研钵钵钵钵2 23 3次次次次，洗洗洗洗出出出出液液液液也也也也转转转转入入入入三三三三角角角角烧烧烧烧瓶瓶瓶瓶中中中中。再再再再向向向向三三三三角角角角烧烧烧烧瓶瓶瓶瓶中中中中加加加加入入入入6mol6mol/L L盐盐盐盐酸酸酸酸10mL10mL，搅搅搅搅拌拌拌拌均均均均匀匀匀匀后后后后在在在在沸沸沸沸水水水水浴浴浴浴中中中中水水水水解解解解0.5h0.5h，冷冷冷冷却却却却后后后后用用用用20%NaOH20%NaOH溶溶溶溶液液液液中中中中和和和和至至至至pHpH呈呈呈呈中中中中性性性性。然然然然后后后后用用用用蒸蒸蒸蒸馏馏馏馏水水水水定定定定容容容容至至至至100mL100mL，过滤后冰箱保存。，过滤后冰箱保存。，过滤后冰箱保存。，过滤后冰箱保存。冬冬枣枣、柚柚子子、梨梨：取取滤滤液液5mL用用蒸蒸馏馏水定容至水定容至100mL。盘盘菜菜、萝萝卜卜：取取滤滤液液10mL用用蒸蒸馏馏水水定容至定容至100mL。取取总总糖糖水水解解液液1mL同同上上法法进进行行还还原原糖糖测定。测定。六、计算六、计算 按照下列公式分别计算果蔬中还原糖按照下列公式分别计算果蔬中还原糖和总糖的质量分数（和总糖的质量分数（w）。）。W（还原糖还原糖）100%C1V1mW（总糖总糖）0.9100%C2V2m 乘乘0.9是为了从测定出的总糖水解成的单糖中扣除是为了从测定出的总糖水解成的单糖中扣除水解时所消耗的水量。水解时所消耗的水量。式中：式中：W（还原糖还原糖）：）：还原糖质量分数（还原糖质量分数（%）W（总糖总糖）：）：总糖质量分数（总糖质量分数（%）C1：还原糖的质量浓度（：还原糖的质量浓度（mg/mL）C2：水解后还原糖的质量浓度（水解后还原糖的质量浓度（mg/mL）V1：样品中还原糖提取液的体积（：样品中还原糖提取液的体积（mL）V2：样品中总糖提取液的体积（：样品中总糖提取液的体积（mL）m：样品质量：样品质量