基因工程复习资料U版.doc

名词解释10*2 是非10*2 选择10*2 简答5*5 叙述 1*15 18日14:00-16:00 教2101
基因工程: 是指核酸分子经体外加工, 将不一样起源基因根据设计组成新基因组, 再把它引入宿主细胞中, 使之表示技术。简单地能够归结为: 经过体外基因操作, 引发生物遗传性状改变技术。基因工程应用在植物方面就称为植物基因工程。
载体: 把一个有用目基因DNA片段经过重组DNA技术, 送进受体细胞中去进行繁殖和表示工具叫载体。现在使用载体关键有四大类: 质粒, 噬菌体λ、 单链噬菌体和粘粒。
质粒拷贝数: 指质粒在复制时与宿主繁殖相结合, 致使每个细胞中只有一个或多个质粒, 质粒在细胞中拷贝数为10~200个。
转化: 是指将外源DNA引入受体细胞, 使之取得新遗传性状一个手段, 它是微生物遗传、 分子遗传、 基因工程等研究基础试验技术。
感受态细胞: 是指含有吸收裸DNA分子能力细胞, 通常经一系列处理方法 可使得细胞膜通透性发生改变, 而使细胞成为感受态细胞。
受体细胞: 是指转化对象, 接收重组DNA细胞, 通常要求有高转化率, 能保持质粒稳定, 属某营养缺点型, 具其她选择标识等条件。
基因组文库: 是指把某种细胞整个基因组DNA, 按一定长短要求, 酶解成若干片段, 在与适宜载体分子重组, 引入对应细胞, 形成一大批含重组DNA分子细胞克隆群体, 该克隆群体即为基因组文库。
cDNA文库: 是指以生物体RNA(通常是mRNA)为模板, 经反转录形成cDNA分子, 给予克隆形成一个基因文库。
S-D序列: 细菌mRNA翻译起点上游与16SrRNA相结合序列。
退火: 是指PCR等核酸分子重组过程中, 即DNA加热变性后逐步冷却过程, 在分子遗传中, 应用于不一样起源核酸分子形成杂合体研究中。
转化外源基因稳定表示:是指外源基因整合到核基因组DNA分子上, 并能稳定遗传外源基因表示。
分子标识:可遗传并可检测DNA序列或蛋白。包含蛋白质标识和DNA标识。
转座子

基因工程研究内容
1．特定目基因分离或合成
2．构建重组DNA分子
3．转化宿主细胞
4．筛选重组DNA菌落
5．目基因有效表示

基因工程基础操作程序关键包含五个方面内容:
1、 带有目基因DNA片段制备
2、 DNA片段与载体DNA体外重组
3、 DNA重组体转入受体细胞
4、 重组体克隆筛选与判定
5、 外源基因表示
制备外源DNA片段能够有以下5个路径:
第一， 从生物基因组群体中分离目基因（鸟枪法即限制性内切酶法、 反转录法）
第二， 人工合成
第三， PCR反应合成DNA
第四， mRNA差异显示法取得目基因
第五， 机械方法如超声波把基因组打成片段。

工具酶: 基因工程中进行基因剪切、 拼接、 组合所需酶统称为工具酶
工具酶按功效分为剪切酶、 修饰酶、 连接酶
限制性内切酶特点: 只降解双链DNA分子, 而不切单链DNA, 反应时需金属Mg2+离子等。
影响限制性内切酶活性关键原因:

1. 酶纯度
2. DNA样品纯度
3. DNA甲基化程度
4. 酶切反应温度与时间
5. DNA分子构型
6. 反应缓冲液

常见聚合酶有三种: 即依靠DNADNA聚合酶; 依靠RNADNA聚合酶; 依靠DNARNA聚合酶。

理想基因工程载体要求:

1．能在受体细胞中独立繁殖
2．轻易导入受体细胞
3．有限制性内切酶位点
4．分子量小, 多拷贝易于分离、 纯化、 导入
5．有轻易识别筛选标识,

载体种类: 质粒、 噬菌体、 病毒、 粘粒
质粒三种构型: 共价闭合环状DNA（cccDNA)、 开环DNA（ocDNA)、 线形DNA（LDNA)

质粒空间构型与电泳速率: 同一质粒尽管分子量相同, 不一样构型电泳迁移率不一样
电泳次序(快到慢)1 SC 2L 3 OC

为何要质粒质粒载体构建？
1、 天然质粒不足
（1）分子量大, 拷贝数低
（2）筛选标志不理想
质粒载体必需含有基础条件

（1）含有复制起点（ORI）
（2）含有抗菌素抗性基因
（3）若干限制性内切酶单一位点
（4）含有较小分子质量和较高拷贝数

质粒载体是以PBR322为基础进行构建
pBR322优点
1）双抗菌素抗性选择标识
没有取得载体寄主细胞, 在Amp或Tet中都死亡
取得载体寄主细胞, 在Amp或Tet其中之一中死亡
2）分子小, 克隆能力大
载体越小越好, 大于10kbDNA在纯化过程中轻易断裂
3）高拷贝数
4）安全

粘粒载体特点:
1.含有l噬菌体特征, 在寄主细胞内形成环化DNA
2.含有质粒载体特征, 能象质粒一样复制。
3.方便选择
4.高容量克隆能力

大分子DNA克隆载体:
一、 酵母人工染色体YAC
YAC载体基因结构
（1） 着丝粒区（CEN）主管染色体在细胞分裂过程中正确地分配到子细胞中
（2） 端粒（TEL）对于染色体稳定及端粒复制含相关键意义
（3） 复制起点（ORI）
YAC可容纳更长DNA片段, 用较少克隆就能够包含特定基因组全部序列并由此保持基因特定完整性, 有利于制作物理图谱。构建时在细菌中操作。

细菌人工染色体（BAC）是以细菌F因子为基础构建细菌克隆载体。
F质粒特点:
1）单拷贝复制
2）克隆容量可达300kb
3）比较稳定
4）便于提纯

核酸提取与纯化三大步骤:
1. 细胞破碎
2. 去除与核酸结合蛋白质及多糖脂等杂质,
3. 除去其她杂质核酸

CTAB法是种去污剂,可溶解细胞膜,与核酸结合形成复合物,在高盐溶液中可溶,低盐浓度时可沉淀,经过离心将CTAB与核酸复合物同蛋白质\多糖类物质分开,然后将CTAB与核酸复合物沉淀溶解于高盐溶液,再加入乙醇使核酸沉淀,CTAB溶于乙醇.
SDS法基础原理: 利用高浓度SDS在较高温度（55-65℃）条件下裂解细胞, 使染色体离析、 蛋白质变性, 释放出核酸, 然后用提升盐浓度及降低温度做法使蛋白质及多糖沉淀（通常是加入5M乙酸钾于冰上保温, 在低温条件下乙酸钾与蛋白质及多糖结合成不溶物）。离心除去沉淀后, 对上清液中核酸进行反复抽提去除蛋白质, 用乙醇沉淀水相中核酸。

方法: CTAB法、 异硫氢酸胍、 Trizol法
RNA提取关键原因是尽可能降低污染。并设法抑制RNA酶活性。
污染起源: 全部器皿、 所用溶液、 试验人员手及飞沫。

核酸凝胶电泳: 琼脂糖凝胶电泳、 聚丙烯酰胺凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳区分:
1.聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨率高
2.聚丙烯酰胺凝胶比琼脂糖凝胶载样量大,
3.聚丙烯酰胺凝胶回收DNA样品纯度极高可用于要求非常严格试验
4．在聚丙烯酰胺凝胶分子交联网状结构中, 带有酰胺侧链C-C聚合物不带或少带离子侧链基团
5．聚丙烯酰胺凝胶无色透明, 比琼脂糖凝胶紫外线吸收率低, 抗腐蚀性强, 机械强度高, 韧性好

影响凝胶电泳原因:
1．酶切效果即DNA分子大小: 分子量大, DNA迁移率小
2．DNA分子构象: 线性分子与环状DNA分子迁移率不一样
3．DNA分子所带电荷数: 所带电荷数多, 迁移快
4．缓冲液极性
5．所采取电压大小
6．染色剂添加量
7．凝胶浓度和厚度

Southern 印迹杂交: DNA/DNA杂交, 立即DNA电泳、 转印到固相支持物上, 用探针进行检测方法。
Northern 印迹杂交: 检测RNA（关键是mRNA）方法
与Southern杂交不一样
– 靶核酸: RNA
– RNA电泳
– 转膜: 不需变性
Western 杂交印迹法: 检测蛋白质, 立即电泳分离非标识蛋白质转移到固相载体上, 用特异抗血清对蛋白质进行判定及定量方法。

探针: 指经放射性或非放射性等物质标识已知或特定DNA或RNA序列。
依据探针起源及核酸性质不一样: DNA探针、 RNA探针、 cDNA 探针, 及寡核苷酸探针
探针标识方法: （1）DNA缺口平移法 （2）DNA引物法 （3）聚合酶链反应标识法

构建基因文库所使用载体关键有: λ噬菌体、 粘粒(菌落)、 质粒、 酵母人工染色体

基因组文库与cDNA文库区分:
从定义上看, 基因组文库指某种细胞内某个基因组按一定长短要求被酶切成若干片段, 与适宜载体分子重组, 引入对应细胞, 形成一大批含DNA重组体细胞克隆群体, 这么细胞克隆群体称为基因组文库
cDNA文库指以生物体RNA通常是mRNA为模板, 经逆转录酶作用形成cDNA再给予克隆而形成一个基因文库。
就真核生物基所以言, mRNA前体经加工, 去除内含子, 且加尾polyA成为成熟mRNA, 故cDNA文库与基因组文库对照可用于研究内含子在基因中位置及功效。

PCR原理 : PCR是指聚合酶链式反应, 又称体外基因扩增。其原理是在一个高温DNA聚合酶作用下经过引物模板DNA作用来扩增DNA。模板能够是基因组DNA, 单链DNA, 克隆DNA序列或RNA(经过反转录成cDNA)。

PCR三个基础反应步骤: 变性--退火--延伸
模板ＤＮＡ变性: 加热变性, 使DNA双链解离为单链, 方便它与引物结合, 为下轮反应作准备;
模板ＤＮＡ与引物退火（复性）: 温度降至温度降至55℃左右, 引物与模板DNA单链互补序列配对结合
引物延伸:
DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶作用下, 以dNTP为反应原料, 靶序列为模板, 按碱基配对与半保留复制原理, 合成一条新与模板DNA 链互补半保留复制链反复循环变性--退火--延伸三过程, 就可取得更多“半保留复制链”, 而且这种新链又可成为下次循环模板
PCR反应五要素: 引物、 酶、 dNTP、 模板和Mg2+
PCR污染原因:
1．标本间交叉污染
2．PCR试剂污染
3．PCR扩增产物污染
4．试验室中克隆质粒污染
PCR种类:
1) 反向PCR（Inverse PCR）, 反向PCR目在于扩增一段已知序列旁侧DNA, 也就是说这一反应体系不是在一对引物之间而是在引物外侧合成DNA（见下图22-2）。反向PCR可用于研究与已知DNA区段相连接未知染色体序列, 所以又可称为染色体缓移或染色体步移。
2) 跳跃PCR（Jumping PCR）, 跳跃PCR在扩增极度退化DNA时, 尤其有用。它有可能跳出DNA断裂处, 合成完整所需片段。
3) 复合PCR（Multiplex PCR）
用多对引物同时扩增几条DNA片段方法称为复合PCR。
4) 锚式PCR（Anchored PCR）, 只有当要扩增序列（作为第一个起始位点）是已知条件下, 才可应用锚式PCR。需要将已知目标序列连接到另一个已知序列一端, 以后者作为第二个合成起始位点。
5) RT－PCR(反转录PCR), RT－PCR（Reverse transcribed PCR）是以RNA为模板, 经过反转录酶把RNA反转录成cDNA, 然后在TaqDNA聚合酶作用下进行DNA扩增。
6) RAPD－PCR, 也被叫做Ap-PCR(Arbitrarily Primed-PCR), 是一个利用序列寡核苷酸为引物PCR操作技术。通常选择合成10核苷酸引物, 内含50－80%（G＋C）并预防回文结构。
7) PCR－Southern杂交, 将PCR产物琼脂糖胶电泳后, 转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上, 再进行常规Southern杂交反应。
8) 不对称PCR（Asymmetric PCR）, 不对称PCR基础原理是采取不等量一对引物产生大量单链DNA（ss-DNA）
9) 定量PCR
PCR在基础研究方面应用:

1. 特定片段取得及其克隆
2. 引入定点突变, 微小缺失或插入
3. 从少许mRNA制备cDNA文库
4. 染色体步查(基因组测序)
5. 基因功效和表示调控研究
6. 特定片段取得及其克隆

PCR在医学方面应用:

1.遗传病基因诊疗
a.限制性片段长度多态性（RFLP）连续分析
b.依据特异性扩增带判定遗传病
c.PCR结合特异性寡核苷酸探针进行诊疗
2.在肿瘤研究中应用
3.检测病原体
4.在基因分型中应用
5.法医物证检测

理想分子标识:
1.高多态性 2.共显性遗传
3.能明确分辨等位基因 4.遍布整个基因组
5.无基因多效性 6.检测手段简单快速
7.成本低廉 8.反复性好

分子标识类型:
(1)以分子杂交为关键分子标识: 限制性片段长度多态性RFLP、 可变数目串联反复位点VNTR
(2)以PCR为基础分子标识: 扩增多态DNA 即RAPD、 扩增片段长度多态性（AFLP）、 简单反复序列多态性（SSR）、 单链构型多态性（SSCP）
(3)以DNA序列为关键分子标识: 转录间隔区（ITS）、 单核苷酸多态性（SNP）

植物外源基因转化方法:
载体介导法(1) 农杆菌介导法 、 (2) 病毒介导法
直接基因转化法(1) 化学诱导法、 (2) 物理诱导法
种质系统转化法

农杆菌介导基因转化方法基础原理及其应用:
农杆菌转化植物细胞是经过将其体内一段DNA(T-DNA)转移到被侵染植物细胞而实现。参与该过程遗传物质基础关键有三个方面: (1)被转移T-DNA。 (2)位于同一质粒(Ti或Ri)上, 用于编码T-DNA加工、 转移及整合等功效蛋白致毒区(Vir区)。 (3)位于细菌染色体上与农杆菌吸附植物细胞壁相关基因(chv)。
转化特点:
农杆菌介导转化属于一个纯生物学方法, 其精巧转基因系统使其与其它理化方法［聚乙二醇(PEG)、 电激、 基因枪等］相比, 含有显著优点:
(1) 转化频率高。T-DNA链在转移过程中受蛋白质(VirE2、 VirD2)保护及定向作用, 使得T-DNA免受核酸酶降解, 而完整、 正确地进入细胞核, 转化效率较高。其它理化方法因为DNA以裸露方法进入植物细胞, 易受细胞内核酸酶破坏, 以致转化频率低。
(2) 导入植物细胞片段确切, 且能导入大片段DNA。Ti质粒上位于两个边界序列间外源基因片段均会转移到植物细胞, 可避免其它理化方法那样将非目基因片段(用于在细菌体内复制DNA骨架)导入植物细胞而造成潜在遗传物质扩散危险。
(3) 导入基因拷贝数低, 表示效果好。农杆菌介导转化向植物细胞导入外源基因拷贝数大多只有1～3个, 而其它方法往往几十个拷贝, 大量拷贝数会造成转基因缄默。
(4) 农杆菌转化方法使用技术、 仪器简单。这种方法可避免进行原生质体培养等难度高、 周期长弊端, 也不象基因枪法需要昂贵费用。
转化方法适用范围及不足:
与其它方法相比, 前人认为农杆菌介导转化不足之处是宿主范围较小。这一点以前关键是依据农杆菌能否在某种植物上诱瘤决定。现有研究表明, 因为植物种类不一样, 组成其细胞生理状态和诱瘤条件也不一样, 所以能否诱瘤及诱瘤大小并不能说明农杆菌寄主特征。实际上, 农杆菌能侵染很多包含关键禾本科植物在内单子叶植物, 水稻高频率转化更使大家认识到农杆菌寄主范围不只局限于双子叶植物。其次, 因为农杆菌是一个生物有机体, 其功效受环境及其作用对象影响比其它理化方法复杂得多, 以致现在能得到转化株往往只是某一科一个或多个植物。农杆菌介导转化这种现实状况使得我们有必需深入探讨影响其转化原因。从已经有转化研究看, 农杆菌菌种、 vir基因诱导、 外植体选择及植株再生频率、 转化体筛选方法均会影响到转化效率。

基因枪法(particle gun)又称微弹轰击法(microprojecctile bombarbment, particle bombardment及biolistics)。最早由美国Cornell大学Sandford等(1987)研制火药引爆基因枪。
基因枪基础原理
是将外源DNA包被在微小金粒或钨粒表面, 然后在高压作用下微粒被调整射入受体细胞或组织。微粒上外源DNA进入细胞后, 整合到植物染色体上, 得到表示, 从而实现基因转化。
与其它遗传转化方法相比较, 有以下优点:
A、 无宿主限制: 根癌农杆菌只对一些双子叶植物敏感, 而对多数单子叶植物尤其是关键禾谷类作物不敏感, 从而大大限制了它应用范围。基因枪技术没有物种限制, 对双子叶和单子叶植物都可适用, 对动物、 微生物也一样适用。
B、 靶受体类型广泛: PEG法、 脂质体法、 电击法等介导基因转化需要以原生质体作为受体细胞。因为原生质体不易培养和再生, 或再生周期长, 基因型依靠性强, 使这些方法应用受到限制。基因枪技术能够选择易于再生受体, 绕过原生质体再生困难。它不仅以原生质体、 叶圆基为靶受体, 而且悬浮培养细胞、 茎或根切段以及种子胚、 分生组织、 幼穗、 幼胚、 愈伤组织、 花粉细胞、 子房等几乎全部含有潜在分生能力中组织或细胞都能够用基因枪进行轰击转化。
C、 可控度高: 近代高压放电或高压气体基因枪已可依据试验需要无级调控微弹速度和射入浓度, 能够较高命中率把DNA微粒载体射入特定层次细胞, 即厂家态细胞和分生区细胞, 从而为基因转化提供可靠技术方法
D、 操作简便快速, 甚至可克服无菌困难
基因枪转化技术应用前景
因为基因枪技术含有很多优点, 所以可应用于现代分子生物学很多领域, 概括起来有以下多个方面:
1) 植物基因转化, 现在已经有十多个植物采取此技术取得了转基因植株。
2) 外源基因导入植物细胞细胞器, 即细胞核、 线粒体、 叶绿体, 现已证实基因枪法可将外源基因导入细胞器, 并能得到稳定表示。
3)基因枪在种质转化中应用
植物种质系统包含茎尖分生组织、 配子体及胚胎细胞, 它们都有可能作为外植体而被转化。如大豆茎尖分生组织用基因枪转化成功一例, 分生组织中一些细胞将决定花粉、 子房及配子体形成, 这些细胞被转化后, 即可在雌雄性器官中携带有外源基因, 从面取得转基因植株。
模拟自然界有性过程, 用转化花粉授粉, 以取得转化种子, 是一条最为简捷和理想转化路径, 若能成功, 则可克服基因型依靠性, 克服植株再生困难, 且轻易得到大量种子以供选择。
4) 植物基因表示调控研究
利用基因枪技术为外源基因导入特定组织提供了可能, 所以能够利用研究植物发育及调控。假如把外源基因导入不一样细胞或不一样发育时期, 则能够研究其基因表示特点。经过培养条件改变能够研究基因表示环境原因。
另外, 基因枪技术还能够应用于微生物和动物细胞基因导入。尤其引发大家重视是, 其它基因转化技术对动物细胞转化一直较困难, 而现在利用基因枪技术已成功地在动物培养细胞、 器官、 卵细胞、 胚胎细胞等实现了基因转化。揭开了动物基因转化新篇章。因为深入分析动物基因转化成功, 使基因枪作为基因诊疗工具成为可能。假如对特定器官导入特异性表示基因, 可对病变部位进行直接诊疗, 或经过遗传免疫产生抗体诊疗疾病。

基因工程发展历史:
A、 基因工程诞生
　基因工程是一项新兴工程技术, 它诞生需要理论和技术上支持:
1. 理论上三大发觉:
（1）证实了生物遗传物质是DNA（基因工程先导）（2）DNA双螺旋结构和半保留复制机理（3）遗传信息传输方法（中心法则）和三联体密码子系统建立
2. 技术上三大发觉:
（1）　基因工程工具酶 （2）基因工程载体（3）基因体外重组
B、 基因工程发展:
(1) 艰苦阶段: 诞生早期受到很多争论, 科学界对其发展采取了一定得阻扰
(2) 逐步成熟阶段: 很多基因工程产品诞生, 促进了基因工程发展
(3) 快速发展阶段: 20世纪80年代以后基因工程快速发展, 转基因小鼠、 烟草等相继诞生, 1991年全球范围内人类基因组计划实施等。

限制性内切酶命名 （选择题）
第一个字母: 细菌属名第一个字母第二、 三母: 细菌种名前二个字母, 接下是细菌株第一个字母 , 同一菌株中有多个不一样内切酶时, 则分别用罗马数字Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ……来代表; 已发觉限制性内切酶有三种类型: 分别为I型, II型和III型。

影响连接反应原因
1. DNA末端浓度
2. 反应温度
3.ATP浓度

修饰酶包含聚合酶、 磷酸酶、 甲基化酶

核酸分子杂交:含有互补序列两条核酸单链在一定条件下, 按碱基配对标准形成双链过程。

TaqDNA聚合酶特征: 热稳定性强 、 高特异性 、 合成率高 、 延伸能力强

预防污染方法
1) 合理分隔试验室
2) 吸样枪
3) 预混和分装PCR试剂
4) 预防操作人员污染
5) 设置合适阳性对照和阴性对照
6) 降低PCR循环次数
7) 选择质量好Eppendorf管, 以避免样本外溢及外来核酸进入

基因芯片: 采取原位合成或直接点样方法将大量DNA片段或寡核苷酸片段以预先设计方法排列在硅片、 玻璃等介质上形成微矩阵, 待检测样品用荧光分子标识后, 于微矩阵杂交, 经过荧光扫描及计算机分析即可取得样品中大量基因序列及表示信息, 以达成快速、 高效、 高通量分析生物信息目。

动物基因工程: 是应用DNA重组技术, 根据大家意愿, 在基因水平上改变生物遗传性, 发明新生物物种, 经过工程化为人类提供有用产品及服务技术; 或指应用现代化生物科学和遗传学技术, 对动物基因进行操纵或改造科学工程。
1、 植物基因工程在植物分子生物学研究中应用
转座子标签 T-DNA标签法 反义RNA技术 位点特异性重组系统
2、 改良植物品种
抗虫基因工程, 抗病基因工程, 抗除草剂基因工程, 抗逆境基因工程, 改良作物营养品质基因工程, 改变花色花形基因工程, 雄性不育基因工程
3、 利用植物作为生物反应器
转基因植物生产疫苗, 转基因植物生产抗体, 转基因植物生产其她多肽与蛋白质类药品, 利用转基因植物生产糖类、 脂类物质, 利用转基因植物生产可降解生物塑料
重组体克隆筛选与判定
筛选: 1、 表型直接筛选法: 利用载体遗传标识、 噬菌斑形成等来选择重组子。2．菌落或噬菌斑原位 杂交。另外, 还有免疫化学法、 遗传互补法等方法。
判定: DNA测序、 凝胶电泳分析和电镜观察等。
II类 限制性内切酶特点:
A． 在双链上识别相同序列
假如极性相同, 比如5’—3’, II类酶在两条DNA链上识别序列是相同。这么序列被称为是回文结构(palindrome)。这种结构增加了能够发生连接构象数目。
B． 大多数酶含有4个或6个碱基识别位点。
C． 不一样酶能识别相同位点
D． 不一样酶能产生相同末端
有些II类酶作用后产生DNA粘性末端相同
原位杂交内容(书本108页）
将标识核酸探针与细胞或组织中核酸进行杂交, 称为原位杂交, 即菌落杂交。
具体过程: 将菌落或噬菌斑转移到溶菌液中硝酸纤维素滤膜上, 使溶菌变性DNA同滤膜杂交。这些带DNA印记滤膜烤干后, 再与放射性同位素标识特异性DNA或RNA探针杂交。漂洗除去未杂交探针, 同X光底片一道曝光。依据放射自显影揭示同探针序列有同源性DNA印迹位置, 对照原来平板, 即可挑选出含插入序列菌落或噬菌斑。
基因文库: 经过克隆方法保留在合适宿主中某种生物、 组织、 器官或细胞类型全部DNA片段而组成克隆集合体。
依据其核酸起源不一样, 基因文库可分为（1）基因组文库; （2）cDNA文库
植物基因转化方法
1、 载体介导基因转化方法
2、 基因直接导入方法
3、 种质系统转化法
原核细胞表示真核基因存在困难:
①原核细胞RNA聚合酶不能识别真核基因开启子。
②因为真核基因为不连续基因, 所以必需将内含子切除后才能成为成熟mRNA, 但原核细胞中缺乏真核细胞转录后加工系统。
③在原核细胞中, mRNA必需含有SD序列才能和核糖核蛋白体结合, 从而指导蛋白质合成。而真核基因转录mRNA缺乏SD序列。
④真核基因在原核细胞表示产生外源蛋白很不稳定, 轻易被细胞蛋白酶所破坏。
基因工程产品安全性:
1、 环境安全性
（1）转基因植物演变成农田杂草可能性
（2）基因漂流到近缘野生种可能性 基因工程药品投放规则和要求