浙江-高效液相色谱仪HPLC检测饲料中维生素A方案.doc

高效液相色谱法测定饲料中维生素A
一、 介绍
近期, 伴随经济复苏, 维生素类饲料添加剂销售量大大增加, 全球原料药大制造商帝斯曼最近也宣告对饲料维生素A涨价6%, 所以饲料中维生素A检测就显得非常紧急和关键。
南京科捷参考国家标准（GB/T 17817-）, 利用全新高性能LC-10Tvp高效液相色谱仪, 经实践检测可提供饲料中维生素AHPLC检测方案, 得出结果正确可靠, 检出限好, 适适用于配合饲料、 浓缩饲料、 复合预混合饲料、 维生素预混合饲料中维生素A测定, 仅供广大用户参考。

二、 四川成都LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪配置:
LC-10Tvp高压恒流泵: 2台
SPD-10Tvp紫外检测器: 1台
SCL-10Tvp 系统控制器: 1台
7725i手动进样阀: 1套
色谱工作站: 1套 （VI、 N、 N3000选择）
液相色谱柱: 1支 （C18 4.6*250mn,5um）
微量进样器: 1支 （50ul/100ul）
进样支架 : 1只 （进样阀用）

三、 四川成都LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪特点:
LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪是南京科捷分析仪器有限企业为了快速地满足多样化用户需求, 在原有STI501液相色谱仪基础上经过优化, 利用美国优异技术开发设计, 中国加工生产一款新型液相色谱仪。LC-10Tvp等度高效液相色谱仪实现了人机对话, 可实时对仪器运行状态进行监控, 并可对潜在和已出现故障做出判定, 同时提供在线处理方案。该仪器也全方面实现了远程准无人操作, 大大提升了仪器使用效率, 同时经过高精度AS1000自动进样系统, 实现自动化进样, 最大程度抑制了样品交叉污染, 提供样品分析精度。LC-10Tvp等度高效液相色谱仪可广泛应用于研究开发、 医药检验、 食品检测、 化工分析、 环境监测等众多分析领域。

关键特点
丰富功效——符适用户对分析不一样需求
硬件含有VP功效, 统计维护信息和操作统计, 符合GLP/GMP要求; 系统控制器增含有时钟、 温度计、 湿度计等人性化设计功效。
卓越性能——满足用户对仪器严格要求
检测器采取进口氘灯、 光电池以及1200条/mm凹面光栅组成双光束单色器; 精密加工双透镜流通池, 控制波长调整高精度微处理器以及双路高速采样频率, 确保了低噪声、 低漂移及超高灵敏度等特点。
VI工作站符合多个法规要求。
可靠结果——满足用户对结果正确要求
与进口仪器做对比试验,分析结果含有高度一致性。
简便操作——便于用户对软件熟练操作
软件采取多窗口模式, 操作方便。
精美外观——满足用户对仪器视觉要求
外形精美, 带来视觉上享受。
技术指标
LC-10Tvp高压恒流输液泵
输液方法
微体积串联双柱塞
最大输液压力
0～9999Psi
流量设定范围
0.001～9.999ml/min （以0.001ml/min步长调整流量）
流量设定值误差
≤0.5%
流量稳定性误差
≤0.2%RSD
压力脉动
小于15Psi （流量1mL/min, 压力600～1600Psi 。）
泵密封性
压力为5400Psi, 时间为10min, 压降小于400Psi 。
时间程序功效
有
尺寸
W260×H130×D420mm
重量
11kg
使用环境温度范围
4～40℃
SPD-10Tvp紫外可见可变波长检测器
波长范围
190nm～700nm
波长示值误差
≤±1nm
波长反复性误差
≤±0.1nm
动态噪声
≤ ±0.75×10-5AU （甲醇, 1ml/min, 254nm, 20℃ 。）
静态噪音
≤ ±0.5×10-5AU （空池, 响应时间1秒, 20℃ 。）
动态基线漂移
≤±1×10-4AU/h （甲醇, 1ml/min, 254nm, 20℃ 。）
静态基线漂移
≤0.5×10-4 （空池, 响应时间1秒, 20℃ 。）
线性范围
≥104
最小检测浓度
≤1×10-9g/mL （萘/甲醇溶液）
定性反复性
RSD6≤ 0.1%
定量反复性
RSD6≤ 0.5%
光谱带宽
6nm
流通池体积
8μL
光程
10mm
时间程序功效
有
尺寸
W260×H130×D420mm
重量
11kg
使用环境温度范围
4～40℃

四、 四川成都高效液相色谱仪对饲料中维生素A检测方法具体检测方法以下:
1 仪器与试剂
1.1 仪器
LC-10Tvp高效液相色谱仪
Vertex 色谱柱: 150mm×4.6mm×5μm;
分析天平, 感量为分别为0.001g, 0.0001g, 0.00001g;
圆底烧瓶, 带回流冷凝器;
恒温水浴锅;
旋转蒸发器;
超纯水器。
1.2 试剂
无水乙醚: 不含过氧化物;
无水乙醇;
正己烷, 色谱纯;
异丙醇, 色谱纯;
甲醇, 色谱纯;
2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）;
无水硫酸钠;
氮气（纯度99%）;
碘化钾溶液;
淀粉指示液;
硫代硫酸钠溶液;
氢氧化钾溶液;
L-抗坏血酸纯品;
酚酞指示剂;
1,4-二氧六环;
维生素A乙酸酯标准品: 含量≥99%;
维生素A标准贮备液;
维生素A标准工作液。
2 试样溶液制备
2.1 皂化
称取试样配合饲料或浓缩饲料适量, 置入圆底烧瓶中, 加L-坏血酸乙醇溶液, 使试样完全分散、 浸湿, 加氢氧化钾溶液, 混匀, 置于水浴上回流, 不时震荡预防试样粘附在瓶壁上, 皂化结束, 分别用无水乙醇、 水自冷凝管顶端冲洗其内部, 取出烧瓶冷却至40℃。
2.2 提取
定量转移全部皂化液于盛有没有水乙醚分液漏斗中, 用蒸馏水分2次-3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗, 加盖、 放气, 随即混合, 猛烈震荡, 静置、 分层。转移水相于第二个分液漏斗中, 分次用乙醚反复提取两次, 弃去水相, 合并三次乙醚相。用蒸馏水数次洗涤乙醚提取液至中性, 首次水洗时轻轻旋摇, 预防乳化。乙醚提取液经过无水硫酸钠脱水, 转移到棕色容量瓶中, 加BHT使之溶解, 用乙醚定容至刻度。以上操作均在避光通风柜内进行。
2.3 浓缩
从乙醚提取液中分取一定体积置于旋转蒸发器烧瓶中, 在水浴温度约50℃, 部分真空条件下蒸发至干或用氮气吹干。残渣用甲醇溶解并稀释, 离心或经过0.45μm过滤膜过滤, 用于高效液相色谱仪分析。以上操作均在避光通风柜内进行。
3 色谱条件
色谱柱: Vertex 色谱柱 150mm×4.6mm×5μm;
流动相: 甲醇+水=95+5;
流速: 1.0mL/min;
温度: 室温;
进样量: 20μL;
检测波长: 326nm。
4 维生素A标准高效液相色谱图。