蛋白质技术作业.doc

蛋白质技术作业总结
1、 名词解释
肽单位:又称为肽基（peptide group）, 是肽键主链上反复结构。是由参于肽链形成氮原子, 碳原子和它们4个替换成份: 羰基氧原子, 酰氨氢原子和两个相邻α-碳原子组成一个平面单位。
疏水内核: 蛋白质结构共同特征, 在分子内部由一个由疏水侧链堆积形成结构。有稳定结构作用。
分子伴侣: 是以热休克蛋白为代表一类参与蛋白质转运、 折叠、 聚合、 解聚、 错误折叠后重新折叠、 水解以及原始蛋白质活性调控等一系列功效保守蛋白质家族。
2、 哪些氨基酸强烈倾向于形成阿尔法螺旋？哪些非常不利于形成阿尔法螺旋氨基酸？
强烈倾向于形成阿尔法螺旋氨基酸:
谷氨酸Glu、 蛋氨酸Met、 丙氨酸Ala、 亮氨酸Leu
非常不利于形成阿尔法螺旋氨基酸:
丝氨酸Ser、 酪氨酸Tyr、 甘氨酸Gly、 脯氨酸Pro
3.简述β-折叠特征。
β-折叠结构形成通常需要两条或两条以上肽段共同参与, 即两条或多条几乎完全伸展多肽链侧向聚集在一起, 相邻肽链主链上氨基和羰基之间形成有规则氢键, 维持这种结构稳定。β-折叠结构特点以下:
（1） 包含肽段较短, 通常为5—10个氨基酸残基。
（2）借相邻主键间氢键维系, 在反平行层中是窄对氢键, 平行层中是宽对氢键。
（3）相邻肽链走向能够是平行和反平行两种。
（4）主链骨架伸展展现锯齿状。
4、 结构域、 亚基基础区分是什么？
一个分子中结构域区是以共价键相连, 而亚基是以非共价键。
5.图解蛋白质结构层次体系
6.请列出建立一个蛋白质纯化试验室所需要基础设备。
样品处理:
1.低温冷冻高速离心机, 常规离心机, 超声破碎仪, 机械破碎仪
2.不一样体积超滤装置, 双蒸水装置, 冷冻干燥机, 冰箱（4, -20, -70摄氏度）
蛋白质分离纯化:
一套蛋白质分离纯化系统（比如法玛西亚AKTA系统）, 同时配置多种类型层析柱和填料; 高效液相系统。
检测判定系统:
电泳仪, WESTERN BLOT转膜仪（半干或湿转）, 干胶仪, 紫外分光光度计, 酶标仪。

7、 经过半合成对蛋白质进行工程操作标准是利用非共价键相互作用, 二硫键, 常规肽键（经过化学法或酶法产生）, 其她非肽共价键将较小肽段连在一起。
8、 简明描述试验设计方案: 以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个目蛋白基因, 并使之在大肠杆菌中进行表示。

9、 测定蛋白分子量方法有哪些？（思索: 设计一试验方案测定蛋白质分子量）
沉降法（超速离心法）、 凝胶过滤法、 SDS-PAGE.
10、 测定总蛋白质量方法。
凯氏定氮法、 双缩脲法、 Folin-酚试剂法、 紫外线吸收法、 考马斯亮蓝法

11、 首次分离到新蛋白质, 怎样在结构、 功效方面对该蛋白质定性？