SC∕T 7208.1-2007 牡蛎拍琴虫病诊断规程 第1部分：巯基乙酸盐培养诊断法(水产).pdf

ICS 65.020.30 B 41 中华人民共和国水产行业标准SC/T 7208.1一2007牡航拍琴虫病诊断规程第1部分:疏基乙酸盐培养诊断法Diagn.tic Procols for Perkinsis of Shellfish一Part 1: Method by Culture in Thioglycollate Medium 2007-06-14发布27- 01实施中华人民共和国农业部发布前自SC/ T 7208 (牡筋拍琴虫病诊断规程分为两个部分:一一第1部分:藐基乙酸盐培养诊断法;一一第2部分:组织病理学诊断法。本部分为SC/T7208的第1部分。本部分的附录A为规范性附录。本部分由中华人民共和国农业部提出。本部分由全国水产标准化技术委员会归口。SCIT 7208. 1-2007 本部分起草单位:中国水产科学研究院黄海水产研究所、全国水产技术推广总站、深圳出入境检验检疫局。本部分主要起草人:杨冰、黄健、陈爱平、江育林、王崇明、王秀华、魏琦、刘莉。I SCIT 7208. 1-2007 牡蠕拍琴虫病诊断规程第1部分:琉基乙酸盐培养诊断法1 范固SC/ T 7208的本部分规定了牡蜻拍琴虫病就基乙酸盐培养诊断法的原理、试剂与材料、仪器设备、操作步骤和结果判定。本部分适用于对牡蜻、鲍及其他贝类海水拍琴虫(Per-kinsusmarinus)病的普查和初步诊断。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。SC/ T 7205.1-2007牡妨包纳米虫病诊断规程第1部分:组织印片的细胞学诊断法3 原理3. 1 牡蟠拍琴虫及其病理学特征拍琴虫病(Perkinsosis)是由顶复体门(Apimp!exa)拍琴虫属(Perki田国)的海水拍琴虫和奥尔森拍琴虫感染所致的海洋软体动物疾病。拍琴虫在宿主组织中寄生发育。在结缔组织中可找出未成熟期、印环期和玫瑰形朔的各期虫体。奥尔森拍琴虫的增殖使结缔组织和上皮细胞崩解，导致贝体弱，有时可见版肿。受感染鲍(Haliotis spp. )的腹足和外套膜上可见到j直径达8mm的旅瘤，可引起鲍死亡。贞洁巨牡妨(CrasSOJt曲vzrgtnzca)感染海水拍琴虫后消化腺发白、贝壳张口、外套膜回缩、性腺发育迟缓、生长停滞，有时出现脉肿，病妨极度衰弱。贞洁巨牡断亲本受感染后死亡率高达95%。拍琴虫(Per-kinsusspp.)的增殖与水温相关，水温高于20C易于发病。其感染期是双鞭毛游动抱子，进入宿主组织后就发育成营养体，营养体在宿主中不断通过二分裂方式繁殖。海水拍琴虫感染通常是全身性的。奥尔森拍琴虫感染则常发生在鲍腹足和外套膜的结缔组织中。在宿主各器官的结缔组织中都可观察到未成熟期、印环朔和玫瑰形期的寄生虫体。其中，未成熟期的营养体可包括子粘变体(meront)、裂殖子(mero.皿ite)或者静抱子(ap!anospore) (直径2严到-3阳时，印环期(signet-dng-stag田)可包括成熟的营养体、子粘变体、裂殖子或静抱子(直径3.m-1Om)寄生虫抱体内含有一个大的偏心空泡，玫瑰形期(rosett白st略目)可包括分裂前体(tomont)、袍子囊(spora鸣iwn)或含有2、4，8、16或32个正在发育的滋养体的裂殖体(schiwnt)(直径4m-15m)。3 .2 技术原理通过光镜观察琉基乙酸盐培养基培养后经卢戈氏(Lugo!s)碗液染色的拍琴虫虫体及休眠抱子的形态，从而初步诊断被检样品是否感染拍琴虫。4试剂和材料4. 1 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馆水或去离子水或相当纯度的水。4.2 流基乙酸盐培养基按附录A的规定。l SCIT 7208. 1-2007 4.3 混合抗生素按附录A的规定。4.4 卢戈氏碗液按附录A的规定。5 仪棉设备5. 1 培养箱:20C-25C。5.2 显微镜:带高倍镜(40X)和泊镜(100X)。5.3 灭菌二角烧瓶(250mL)。5.4 灭菌棉塞。5.5 载玻片。5.6盖玻片。5.7 解剖刀。5.8 手术剪。5.9银子。5.10滴管。6 操作步骤6. 1 样品的采集按SC/T7205. 1-2007 (牡妨包纳米虫病诊断规程第1部分:组织印片的细胞学诊断法)附录B执行。6.2取活体样品，剪取大小为5mmxlOnun的组织块(牡蜘选取直肠，鲍选取足肌或外套膜)，立即放入加有混合抗生素的液体就基乙酸盐培养基中，22C-25C下避光培养4d-7d。6.3 培养后收集组织碎片，置于5倍稀释的卢戈氏硕液中10mino 6.4 将组织碎片置于载玻片上，盖上盖玻片，镜检。7 结果判定7.1 培养后，寄生虫虫体的大小从3四n-lOm增大到70阳n-250严n。拍琴虫的休眠抱子呈球形，其细胞壁被卢戈氏腆液染成蓝色或蓝黑色。7.2 诊断结果可疑时，补充组织病理学诊断法进行结果确认。2 SC/ T 7208. 1-2007 A.1 混合抗生素附录A规范性附豪试押l配方氯霉素1吨水5mL溶解后，0.45p.rn滤膜过滤除菌。制霉菌素5.0X1o单位水10mL溶解后，0.45阳n滤膜过滤除菌。将2.5mL氯霉素浴液加入10mL lttJ霉菌素溶液中，混匀后-20C贮存数周。使用前每10mL琉基乙酸盐培养基中加入50L混合抗生素。A.2卢戈氏(Lugols)慎液腆模化饵水放置24h后过滤溶液，暗处室温贮存。A.3 .基乙醺盐培养基就基乙酸盐N.CI 2g 4g 1mL 30g 20g 水1L边加热边搅拌，直到变成金黄色透明液为止，溶液冷却后分装于lOmL离心管中，高压灭菌，黑暗密封保存备用。3